高效液相色譜法測定食品中胭脂蟲紅的含量

□ 張艷嬌 廣州萬正藥業(yè)有限公司

胭脂蟲紅是從仙人掌上的雌性胭脂蟲體內(nèi)提取的一種蒽醌類天然色素[1]，其理化性質(zhì)非常穩(wěn)定，色調(diào)呈粉紅至紫紅，被視作最安全的天然色素而用于食品、化妝品、藥品及紡織品等生產(chǎn)。歐洲、美國、日本及中國都允許作食品添加劑使用，《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760-2014）中明確規(guī)定其使用范圍及最大使用量，但尚無相關(guān)檢驗方法標(biāo)準(zhǔn)。為了保障食品中胭脂蟲紅的合理使用，本文針對不同類型的食品（飲料、糖果、肉制品等），建立高效液相色譜法（HPLC）快速測定食品中胭脂蟲紅含量的檢測技術(shù)，為食品質(zhì)量監(jiān)督檢測提供準(zhǔn)確、高效分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

胭脂蟲紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：分子式C22H20O13，CAS登錄號 1260-17-9，純度98.5%，德國Dr.公司。甲醇、乙腈：色譜純，美國TEDIA公司。胭脂蟲紅儲備液：準(zhǔn)確稱取胭脂蟲紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)100.0 mg，用超純水溶解并定容至100 mL容量瓶中，配制濃度為1 000 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液。

1.2 儀器與設(shè)備

液相色譜儀：HPLC-2010A型，日本島津公司。分析天平：CPA324S型，德國Sartorius公司。超聲波萃取儀：SK2510LHC型，上?？茖?dǎo)公司。離心機：Concentrator plus型，德國Eppendorf公司。

1.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18（ 250 mm×4.6 mm×5 μm）。檢測波長：275 nm。流動相：乙腈-0.5% H3PO4溶液（80:20）。流速：1.0 mL/min。柱溫：25 ℃。進樣量：10 μL。

1.4 樣品前處理

樣品經(jīng)粉碎后準(zhǔn)確稱取5.0 g（精度0.1 mg），加5 mL 0.5%磷酸水溶解，超聲萃取5 min，加入0.5%磷酸水定容至10 mL，8 000 rpm離心30 s，取上清液過0.45 μm微孔濾膜，濾液供HPLC測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸收波長的選擇

采用光二極管陣列檢測器（PAD）對胭脂蟲紅標(biāo)準(zhǔn)溶液進行190～800 nm紫外可見光吸收峰掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)胭脂蟲紅在275、310、495 nm波長處均有較大吸收峰，其中275 nm的紫外吸收峰響應(yīng)值最高，且峰形最好。故檢測波長選擇275 nm。

2.2 流動相的選擇

比較了甲醇/乙腈-水、甲醇/乙腈-乙酸鈉緩沖液、甲醇/乙腈-H3PO4溶液等不同流動相體系對胭脂蟲紅的色譜分離情況。結(jié)果表明：當(dāng)以乙腈-0.5% H3PO4溶液（80∶20）作為流動相時，胭脂蟲紅峰形對稱，保留時間為13.589 min（圖1）。

圖1 胭脂蟲紅標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖

2.3 萃取溶劑的選擇

分別采用正己烷、乙酸乙酯、乙腈、磷酸水溶液等試劑萃取食品中胭脂蟲紅，結(jié)果發(fā)現(xiàn)磷酸水溶液具有較高的萃取率，且當(dāng)使用0.5%磷酸水作為萃取溶液時，胭脂蟲紅萃取率高達(dá)98.7%。故選擇0.5%磷酸水作為萃取溶劑。

2.4 線性范圍、定量限、精密度及回收率

準(zhǔn)確移取適量胭脂蟲紅標(biāo)準(zhǔn)儲備液到容量瓶中，用去離子水定容配制 濃 度 依 次 為 0.5、1.0、5.0、10.0、50 mg/kg系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，以胭脂蟲紅質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)色譜峰響應(yīng)值（y）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果顯示：胭脂蟲紅在0.5～50 mg/kg范圍內(nèi)，具有較好的線性關(guān)系，線性回歸方程為 y=3.12×104x+2.3×103，相關(guān)系數(shù)r2為0.999 9。通過對添加一系列低濃度的胭脂蟲紅的試樣進行HPLC測定，以10倍信噪比計算定量限，結(jié)果顯示：本方法定量限為0.1 mg/kg。通過對飲料、糖果、肉制品等不同食品進行胭脂蟲紅加標(biāo)試驗，使其終濃度分別為0.5、25、50 mg/kg，按本文所建HPLC法進行測定，3種不同食品在3種加標(biāo)水平下，胭脂蟲紅的加標(biāo)回收率為89.3%～98.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.58%～3.12%。

3 結(jié)論

本研究建立了食品中胭脂蟲紅的高效液相色譜檢測方法，該法操作簡單、準(zhǔn)確高，適于食品中胭脂蟲紅含量的測定，可為食品中胭脂蟲紅的監(jiān)督檢驗提供檢測技術(shù)。