枸杞中甜菜堿的含量測定

□ 盧艷婷 東莞出入境檢驗檢疫局

枸杞子是常用的藥食兩用材料，具有滋補肝腎、益精明目的功效，枸杞子在植物分類中定義為茄科植物寧夏枸杞的干燥成熟果實。甜菜堿是一種枸杞特征性的生物堿，為其主要活性物質(zhì)，其生物活性提供甲基供體，起到抗氧化的作用。本文通過研究實踐，建立了HPLC方法測定甜菜堿的含量[1]，該方法與中國藥典標準方法薄層色譜法（2015年版第一部P249頁）相比更加準確、簡便可靠。

1 藥典法定測定法

《中國藥典》2015 年版枸杞子甜菜堿含量測定采用薄層色譜法，具體操作方法為：取枸杞子約2g，用剪刀剪碎，精密稱定，加80%甲醇50mL做溶劑，加熱回流，用該溶劑30mL分次洗滌殘渣和濾器，將洗液與濾液合并后濃縮至10mL，調(diào)節(jié)pH值至1，加入活性炭1g脫色，加入新配制的2.5% 硫氰酸鉻銨溶液20mL，攪勻，低溫靜置3 h，過濾。加丙酮定量至5mL，作為供試品溶液[2]。另取甜菜堿對照品20mg，精密稱定，加鹽酸甲醇溶液（鹽酸∶甲醇=0.5∶99.5） 定容至5mL作為對照品溶液。按“薄層色譜法（TLC）操作規(guī)程”試驗，精密吸取對照品溶液3μL與6μL，供試品溶液5μL硅膠G層析板上，以丙酮-無水乙醇-鹽酸（v∶v ∶v=10∶6∶1 ）為展開劑，噴顯色劑改良碘化鉍鉀試液，按“薄層色譜法操作規(guī)程”進行掃描，波長：λs =515nm，λR = 590nm，測量，計算，即得。

筆者經(jīng)實際操作發(fā)現(xiàn)，該方法干擾因素多，而且溫度和濕度對顯色影響較大，重現(xiàn)性差[3]。

2 HPLC方法的建立

2.1 儀器與試藥

安捷倫1260高效液相色譜儀、枸杞子、磷酸二氫鉀（分析純）、甜菜堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號136941-201703）。

2.2 實驗方法

2.2.1 溶液配制

對照品溶液：準確稱取甜菜堿對照品 0.060g，加純化水溶解并定容至刻度，制備成 0.600mg/m L的儲備液。

流動相：準確稱取磷酸二氫鉀0.408g，加純化水溶解并定容至1000mL，配制成 0.003mol/L KH2PO4溶液，0.22μm微孔濾膜過濾，備用。

2.2.2 實驗參數(shù)

色譜條件：SCX 陽離子交換柱（4.6mm×250mm，5μm），0.003mol/L磷酸二氫鉀溶液為流動相，柱溫 40℃，檢 測 波 長 192nm， 流 速 1.0mL/min，進樣量：20μL。

樣品處理方法：同上述薄層色譜法前處理[4]。

圖1 甜菜堿標準曲線

2.3 結(jié)果與分析

2.3.1 制備對照品標準曲線

分別精確量取 0.600mg/mL的甜菜堿對照品儲備液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL加純化水定容至10mL，搖勻。以甜菜堿峰面積的積分值為縱坐標，以質(zhì)量濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為：Y=2323413X+29.21，r=0.9999（圖1）。結(jié)果表明，甜菜堿在0-0.300mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度試驗

取濃度為 0.120mg/mL的甜菜堿對照品溶液，于高效液相色譜連續(xù)進樣 5次，根據(jù)峰面積值測定結(jié)果（見表1），計算其 RSD值為 0.95%，表明儀器精密度良好。

2.3.3 重現(xiàn)性試驗

取上述枸杞子5 份，制成樣品溶液，用高效液相色譜測定樣品峰面積值，計算樣品中甜菜堿的含量（見表2）。結(jié)果可得所測甜菜堿的平均質(zhì)量分數(shù)為 0.82%，RSD為 1.29%。

2.3.4 回收率試驗

取上述枸杞子，準確稱取100mg，平行6份，分別加入5mL濃度為0.120mg/mL甜菜堿對照品溶液，加純化水定容至50mL，制成樣品溶液，用高效液相色譜測定峰面積值，計算回收率，結(jié)果平均回收率為 97.17%，RSD為1.05%，見表3。

表1 精密度試驗結(jié)果

表 2 重現(xiàn)性試驗結(jié)果

表3 回收率試驗結(jié)果

3 結(jié)論與討論

枸杞作為常用的藥食兩用材料，在食品和藥品的標準體系中均有收載。食品標準無需檢測甜菜堿的含量，藥品標準作為最嚴格的執(zhí)行標準，對其有效成分甜菜堿有進行檢測，用薄層色譜法，但是該方法溫度和濕度對顯色影響較大，重現(xiàn)性差。本文建立高效液相色譜方法測定枸杞子甜菜堿的方法操作準確簡單快速、重復(fù)性好，可用于枸杞子藥材及其制劑的質(zhì)量控制。