PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA在口腔鱗狀細胞癌中的診斷價值及其與組織分化和淋巴結轉移的關系

董愛芬,李旭升

(河南大學附屬鄭州頤和醫(yī)院 口腔科,河南 鄭州450000)

口腔癌是臨床常見惡性腫瘤之一，以鱗狀細胞癌最為常見[1]。相關報道發(fā)現(xiàn)，每年約有10000人死于口腔癌，隨著手術、放化療技術方法的改進與提高，口腔鱗狀細胞癌(OSCC)患者的5年生存率僅達到50%，給患者的生命造成嚴重威脅[2]。研究發(fā)現(xiàn)，肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor,HGF)、尿激酶型纖溶酶原激活劑(urokiase type plasminogen activator,uPA)、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(protein tyrosine phosphatase gene,PTEN)、基質金屬蛋白酶-7(matrix metallo proteinase,MMP-7)與鱗狀細胞癌的惡性表型具有密切聯(lián)系，它們的表達與口腔癌的發(fā)生、臨床分期、淋巴結轉移及預后具有相關性[3,4]。本研究擬采用化學方法檢測OSCC患者和健康成年人血清HGF、血清uPA、PTEN、MMP-7表達情況，研究HGF、uPA、PTEN、MMP-7在OSCC中及正常組織中的表達差異，探究其表達水平與OSCC臨床分期、淋巴結轉移及預后之間的關系，為OSCC的發(fā)生機制提供理論基礎，同時為其早期診斷及臨床治療提供新的思路。

1 資料和方法

1.1一般資料

選取2014年6月-2017年3月在我院口腔科行手術切除的OSCC患者64例，其中男42例，女22例；年齡36-76(56.2±5.1)歲。納入標準：(1)患者口腔出現(xiàn)腫塊、結節(jié)、斑塊、潰瘍或炎癥等臨床癥狀；(2)臨床資料完整，符合醫(yī)學倫理學要求，患者知情同意，并簽署知情同意書；(3)經(jīng)病理檢查確診為口腔癌。排除標準：(1)排除其他惡性腫瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病、慢性肝病、艾滋病或其他感染性疾??；(2)精神異常或智力障礙者。所有患者均無家族病史，術前未行手術、放化療治療。其中高分化18例，中低分化46例；伴淋巴結轉移31例，無淋巴結轉移33例。血清HGF、uPA含量測定對照組來自我院健康體檢中心各項指標均正常者64例，其中男性40例，女性24例；年齡37-78(57.5±5.9)歲。PTEN、MMP-7測定以同期手術切除的癌旁正?？谇徽衬そM織標本64例作為對照組。標本切片分別進行HE染色和免疫組化染色，PTEN陽性對照采用扁桃體組織，MMP-7陽性對照采用胎盤組織。

1.2方法

所有納入患者及健康查體者于清晨空腹采靜脈血5 ml，室溫凝固半小時，3 000 r/min進行離心，10 min，取上清液于無菌EP管中，-40℃冰箱中保存，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清HGF、uPA含量。PTEN、MMP-7測定采用免疫組化進行測定，4 μm石蠟切片，72℃烤片1.5 h，二甲苯脫蠟，純酒精脫苯，梯度酒精水化，檸檬酸鹽緩沖液高壓抗原修復，PBS浸泡5 min，3%過氧化氫溶液室溫孵育5-10 min，滴加適當比例一抗，37℃孵育20 min，PBS沖洗，滴加二抗，室溫孵育1 h，PBS淋洗3遍，DAB溶液顯色，在顯微鏡下觀察5-10 min，棕色為陽性顯色，蘇木素復染5 min，梯度酒精脫水(75%-85%-95%-100%)，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1.3觀察指標

觀察PTEN、MMP-7在正?？谇火つそM織及OSCC中的表達情況，觀察血清HGF、uPA在OSCC患者及健康成年人體內的水平，觀察OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量與年齡、性別、臨床分期、病理分級、淋巴結轉移的關系，并對PTEN、MMP-7、HGF及uPA之間的相關性進行分析。

1.4結果判定

PTEN、MMP-7陽性細胞為細胞質中出現(xiàn)深黃色顆粒，按染色強度及陽性細胞占所有細胞總數(shù)的百分比進行綜合評定：(1)染色強度：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；(2)陽性細胞數(shù)：在高倍鏡視野下取200個癌細胞，陽性細胞數(shù)≤10%為0分，11%≤陽性細胞數(shù)≤25%為1分，26%≤陽性細胞數(shù)≤50%為2分，51%≤陽性細胞數(shù)≤100%為3分，綜合分數(shù)=染色強度積分×陽性細胞數(shù)積分，3分及以上者為陽性，0-2分為陰性。

1.5統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量在正?？谇火つそM織或健康成年人及OSCC中的表達比較

OSCC患者血清HGF、uPA水平明顯高于正常人，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。PTEN在癌旁正?？谇火つそM織中的陽性表達率為81.25%(52/64)，在OSCC中的陽性表達率為40.63%(26/64)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；MMP-7在癌旁正?？谇火つそM織中的陽性表達率為23.44%(15/64)，在OSCC中的陽性表達率為75.00%(48/64)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量在正?？谇火つそM織或健康成年人及OSCC中的表達

注：表中PTEN、MMP-7結果中，對照組64例為癌旁黏膜組織的數(shù)據(jù)。

2.2OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量與臨床特征的關系

OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量在不同年齡、性別方面差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量在不同病理分級、臨床分期、有無淋巴結轉移方面差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 OSCC患者PTEN、MMP-7、血清HGF、uPA含量與臨床特征的關系

2.3PTEN、MMP-7、HGF及uPA之間的相關性分析

見表3。

表3 PTEN、MMP-7、HGF及uPA之間的相關性分析

3 討論

口腔癌是臨床常見腫瘤之一，其早期癥狀表現(xiàn)為增殖性紅斑，即紅色炎性斑塊，臨床癥狀多不明顯，不具有特異性，常易被臨床醫(yī)生忽視[5]。在以手術為主的治療模式下可提高腫瘤的局部控制率，但仍然無法徹底清除腫瘤組織，易導致腫瘤復發(fā)和轉移。研究表明，口腔癌患者術后5年生存率僅為50%[6]。因此，早期診斷口腔癌對于提高患者術后生存率及控制腫瘤復發(fā)轉移具有重要意義。

PTEN、MMP-7是腫瘤發(fā)生、發(fā)展、浸潤及轉移研究的熱點。PTEN是一種抑癌基因，PTEN的缺失與細胞凋亡、遷移具有密切聯(lián)系[7]。PTEN基因突變或缺失會導致PTEN蛋白的陰性表達，從而促進細胞分裂增殖，抑制細胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，PTEN蛋白在子宮內膜癌、胃癌、直腸癌等多種腫瘤組織中陰性表達[8]。MMP-7是基質金屬蛋白酶家族中的一員，屬于基質溶解素的一種，可溶解蛋白質，并具有廣泛的底物特異性，可降解黏連蛋白、蛋白聚糖、層黏連蛋白等[9]。MMP-7在基質細胞中低表達，而在腫瘤細胞中高表達，其產物直接參與腫瘤的侵襲和轉移。本研究結果顯示，PTEN在癌旁正?？谇火つそM織中的陽性表達率(81.25%)高于在OSCC中的陽性表達率(40.63%)，MMP-7在OSCC中的陽性表達率(75.00%)高于癌旁正常口腔黏膜組織中的陽性表達率(23.44%)。表明PTEN、MMP-7可作為口腔癌的早期診斷指標。PTEN、MMP-7表達與口腔鱗癌的臨床分期、病理分級、有無淋巴結轉移密切相關，與患者的性別、年齡均無相關性，表明PTEN、MMP-7在一定程度上可作為判斷口腔鱗癌惡性程度的指標，對口腔鱗癌的預后具有預測價值。程媛媛等[10]研究報道MMP-7在頭頸部鱗癌中的表達與腫瘤的病理分級、臨床分期及預后密切相關，而與患者的性別、年齡、腫瘤組織類型無相關性。

HGF是一種間充質合成的細胞生長因子，參與細胞組織器官的生長及重塑過程，其可刺激細胞生長，修復受損組織，發(fā)揮有絲分裂原的作用[11]。它還可促進細胞的侵襲和遷移，在腫瘤的轉移及侵襲過程中發(fā)揮重要作用。HGF可誘導血管內皮生長因子的表達和分泌，促進腫瘤血管增生。uPA是一種蛋白水解酶，其與纖溶蛋白酶結合后可溶解細胞外基質和基底膜，是腫瘤細胞發(fā)生侵襲和轉移的先決條件[12]。uPA可與HGF發(fā)揮協(xié)同作用，在內皮細胞三維結構中感應微毛細管的生成。研究發(fā)現(xiàn)，白血病、結直腸癌、骨髓瘤等多種腫瘤中可檢測血清uPA和HGF的升高[13]。本研究結果發(fā)現(xiàn)，OSCC患者血清uPA、HGF水平明顯高于健康成年人，表明uPA、HGF水平可作為口腔癌的早期診斷指標。Ⅲ-Ⅳ期患者血清HGF、uPA水平與Ⅰ-Ⅱ期相比有顯著性差異(P<0.05)，中低分化OSCC患者血清HGF、uPA水平明顯高于高分化OSCC患者，發(fā)生淋巴結轉移的OSCC患者血清HGF、uPA水平明顯高于未發(fā)生淋巴結轉移患者，提示HGF、uPA水平高低與口腔癌的臨床分期、病理分級、有無淋巴結轉移密切相關，可作為評估口腔癌臨床分期及預后的一項指標。

本研究結果顯示，PTEN蛋白表達與MMP-7、HGF、uPA表達呈負相關，MMP-7蛋白表達與HGF、uPA水平呈正相關， HGF水平與uPA水平呈正相關。PTEN缺失可能引起MMP-7、HGF、uPA表達增加，在OSCC侵襲中發(fā)揮著重要作用。國內外研究[14,15]表明，實體瘤患者在治療后產生HGF、uPA的能力明顯下降，表明HGF、uPA的變化與腫瘤進展程度、病情變化以及治療效果密切相關。早期檢測血清HGF、uPA變化及MMP-7、PTEN蛋白表達情況有助于早期診斷口腔癌，了解患者的腫瘤進展狀態(tài)，有助于判斷疾病的嚴重程度，對腫瘤患者療效進行評估，也可以作為口腔癌患者手術治療及化療后的客觀評價指標。

綜上所述，PTEN、MMP-7、HGF及uPA可作為口腔癌早期診斷的指標，同時與口腔癌的臨床分期、病理分級及淋巴結轉移具有相關性，可作為評估口腔癌病情嚴重程度及預后的指標。

作者簡介：董愛芬(1963-),女，本科學歷，河南鞏義人，副主任醫(yī)師，研究方向：口腔頜面外科。