缺血性腦血管病患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊與血清HMGB1水平的研究

鄧霜 楊雪霞 （通訊作者）

（1 貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院 貴州 貴陽(yáng) 550000）

（2 貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 貴州 貴陽(yáng) 550000）

頸動(dòng)脈粥樣硬化（carotid atheromatous sclerosis，CAS）被認(rèn)為是引起缺血性腦血管病的重要危險(xiǎn)因素之一，且近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是以血管壁對(duì)損傷的炎癥反應(yīng)為基礎(chǔ)的慢性病理過(guò)程，炎癥細(xì)胞和炎癥因子在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。 高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein B1，HMGB1）為新近發(fā)現(xiàn)的一種重要的晚期致炎細(xì)胞因子。在動(dòng)脈粥樣硬化病變中，平滑肌細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、泡沫細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞均可以產(chǎn)生和釋放HMGB1；同樣，在鄰近壞死核心的基質(zhì)中，HMGB1也明顯增多；胞外的HMGB1能激活內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)咆和巨噬細(xì)胞以及血小板，產(chǎn)生和放大炎癥反應(yīng)，加速動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展[1]。本研究通過(guò)對(duì)缺血性腦血管病患者頸動(dòng)脈超聲的檢查，并測(cè)定血清HMGB1的水平，旨在探討監(jiān)測(cè)血液中HMGB1水平是否有利于對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化程度及斑塊危險(xiǎn)度的評(píng)估，為早期預(yù)防及治療提供依據(jù)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

缺血性腦血管病組：選擇2013年06月至2013年12月于貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院治療的缺血性腦血管病患者100例，男性45例，女性55例，年齡34～85歲，平均年齡68.36±9.69歲。其中腦梗死后遺癥患者有40例，腔隙性腦梗死患者29例，短暫性腦缺血發(fā)作患者31例。對(duì)照組：選擇同期住院年齡、性別與缺血性腦血管組相匹配的非缺血性腦血管病患者30例作為對(duì)照組，男性17例，女性13例，年齡44～78歲，平均年齡61.20±10.85歲。其中周?chē)窠?jīng)病6例，繼發(fā)性頭痛7例，神經(jīng)癥2例，運(yùn)動(dòng)障礙疾病4例，頸椎病7例，脊柱畸形1例，失眠癥1例，上頜竇2例。并經(jīng)體格檢查、顱腦CT或顱腦MRI檢查排除腦血管疾病。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

所有入選患者均于入院次日空腹采集靜脈血5ml，應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定標(biāo)本中HMBG1水平。所有研究對(duì)象均行頸動(dòng)脈彩超檢查：根據(jù)頸動(dòng)脈超聲斑塊檢出數(shù)目將研究對(duì)象分為：（1）無(wú)頸動(dòng)脈斑塊組，包括內(nèi)膜-中層厚度≤1.0mm，雙側(cè)頸動(dòng)脈內(nèi)膜光滑、無(wú)增厚；（2）頸動(dòng)脈單發(fā)斑塊組：頸動(dòng)脈內(nèi)膜-中層厚度在1.0～1.4mm之間；雙側(cè)頸動(dòng)脈有1個(gè)斑塊，內(nèi)膜-中層厚度局限性增厚≥1.5mm；（3）頸動(dòng)脈多發(fā)斑塊組，雙側(cè)頸動(dòng)脈有2個(gè)或2個(gè)以上斑塊。根據(jù)頸動(dòng)脈超聲聲學(xué)特點(diǎn)將研究對(duì)象分為：（1）穩(wěn)定斑塊組：斑塊為高強(qiáng)回聲，后方伴明顯聲影；或斑塊為表面光滑的中等均質(zhì)回聲。（2）不穩(wěn)定斑塊組：斑塊局部呈低回聲、等回聲或混合回聲，其后方不伴聲影。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)數(shù)資料以樣本數(shù)及構(gòu)成比率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較進(jìn)行單因素方差分析。以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

缺血性腦血管病組斑塊檢出率為69%，非腦血管病組斑塊檢出率為30%，兩組比較P＜0.05，缺血性腦血管病組頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生率明顯高于非腦血管病組，其中缺血性腦血管病組多發(fā)斑塊檢出率（52%）高于非腦血管病組（10%），差異顯著（P＜0.05），而兩組單發(fā)斑塊檢出率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。缺血性腦血管病組穩(wěn)定斑塊組檢出率21.7%，不穩(wěn)定斑塊檢出率為78.3%；非缺血性腦血管病穩(wěn)定斑塊檢出率為88.9%,不穩(wěn)定斑塊檢出率為11.1%,兩組比較差異顯著P＜0.01。由表2-1可見(jiàn)：HMGB1在頸動(dòng)脈無(wú)斑塊組與單發(fā)斑塊組、多發(fā)斑塊組的水平分別為 71.52±6.96μg/L、77.87±7.47μg/L、78.85±6.71μg/L，三組比較差異顯著（P＜0.01），無(wú)斑塊組分別與單發(fā)斑塊組、多發(fā)斑塊組比較差異顯著（P＜0.01），單發(fā)斑塊組與多發(fā)斑塊組比較無(wú)顯著差異（P=0.57）。由表2-2可見(jiàn)：血清HMGB1在頸動(dòng)脈穩(wěn)定斑塊組的水平為71.97±5.52μg/L，在頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊組的水平為80.62±6.31μg/L，兩組比較差異顯著P＜0.01。

表2-1 血清HMGB1的水平與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生情況的比較（±s）Tab.2-1 comparison of the levels of HMGB1 in serum and carotidatherosclerotic plaque（±s）

表2-1 血清HMGB1的水平與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生情況的比較（±s）Tab.2-1 comparison of the levels of HMGB1 in serum and carotidatherosclerotic plaque（±s）

注：a表示與對(duì)照組比較P＜ 0.001，*表示與單發(fā)斑塊組比較P=0.57。

表2-2 血清HMGB1的水平與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的比較（±s）Tab.2-2 comparison of the levels of HMGB1 in serum and carotidatherosclerotic plaque stability（±s）

表2-2 血清HMGB1的水平與頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性的比較（±s）Tab.2-2 comparison of the levels of HMGB1 in serum and carotidatherosclerotic plaque stability（±s）

3.討論

頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊（carotid atheromatous sclerosis，CAS）脫落可 成為腦栓子的一個(gè)重要來(lái)源，頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊還可引起腦血流動(dòng)力學(xué)的改變，它被認(rèn)為是引起缺血性腦血管病的重要危險(xiǎn)因素。本組資料顯示，100例缺血性腦血管病患者中，CAS檢出斑塊者69例，斑塊檢出率為69%。30例非腦血管病患者檢出CAS9例，斑塊檢出率為30%；其中缺血性腦血管病組多發(fā)斑塊檢出率（52%）高于對(duì)照組（10%）；缺血性腦血管病組不穩(wěn)定斑塊檢出率為78.3%，非缺血性腦血管病組不穩(wěn)定斑塊檢出率為11.1%。缺血性腦血管病組CAS斑塊檢出率、多發(fā)斑塊檢出率及不穩(wěn)定斑塊檢出率高于非腦血管病組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明頸動(dòng)脈粥樣樣硬化的發(fā)生與缺血性腦血管病密切相關(guān)。目前對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的病理學(xué)研究結(jié)果一致認(rèn)為[2]，動(dòng)脈粥樣硬化斑塊是以血管壁對(duì)損傷的炎癥反應(yīng)為基礎(chǔ)的慢性病理過(guò)程,炎癥細(xì)胞和炎癥因子在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。

高遷移率族蛋白B1（high mobility group proteinB1，HMGB1）是一類(lèi)真核細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的非組DNA結(jié)合蛋白，20世紀(jì)70年代Goodwin[3]等在牛胸腺中作為染色質(zhì)蛋白被發(fā)現(xiàn)，并因其在聚丙烯酰胺凝膠電泳中的高遷移率而命名為高遷移率族蛋白（HMG）。1999年wang等[4]首先發(fā)現(xiàn)HMGB1釋放到胞外后介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，為內(nèi)毒素血癥和膿毒癥的晚期炎癥介質(zhì)，相較TNF-ɑ、IL-1等經(jīng)典的早期炎性介質(zhì)而言，HMGB1出現(xiàn)晚且高峰持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，為新近發(fā)現(xiàn)的一種重要的晚期致炎細(xì)胞因子。生理情況下，HMGB1作為染色體結(jié)構(gòu)成分位于細(xì)胞核，參與核蛋白的裝配和DNA的復(fù)制、重組、轉(zhuǎn)錄和修復(fù)等過(guò)程。其不僅能與DNA相互作用，而且胞外的HMGB1通過(guò)作用于多種細(xì)胞的表面受體而發(fā)揮強(qiáng)烈的致炎作用。HMGB1可影響AS病變內(nèi)的細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞（EC）、單核-巨噬細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）的功能，促進(jìn)局部炎癥反應(yīng)、單核-巨噬細(xì)胞聚集、VSMC趨化性及其細(xì)胞骨架的重構(gòu)，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的發(fā)生發(fā)展。在一般環(huán)境條件下，HMGB1的表達(dá)量維持在基礎(chǔ)水平[3]。當(dāng)炎性因子刺激和細(xì)胞應(yīng)激時(shí)均可誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞等主動(dòng)分泌HMGB1[5]，HMGB1又可刺激樹(shù)突狀細(xì)胞和單核/巨噬細(xì)胞等分泌TNF-ɑ、IL-1等炎性因子及單核細(xì)胞趨化蛋白1等趨化因子，以啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，以清除損傷壞死的細(xì)胞[6]。而TNF-ɑ、IL-1這些由HMGB1刺激分泌的炎性因子也能促使單核/巨噬細(xì)胞分泌HMGB1，這樣就形成了一個(gè)促炎的正反饋環(huán)路，導(dǎo)致炎癥級(jí)聯(lián)信號(hào)放大，因此HMGB1作為一種炎性因子，可能在致炎細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)著一個(gè)中心環(huán)節(jié)的位置[7]。

本研究中，HMGB1的水平在頸動(dòng)脈無(wú)斑塊組與單發(fā)斑塊組、多發(fā)斑塊組分別為71.52±6.96μg/L、77.87±7.47μg/L、78.85±6.7μg/L，三組比較差異顯著，多發(fā)斑塊組血清HMGB1水平高于單發(fā)斑塊組。血清HMGB1在穩(wěn)定斑塊組的水平為71.97±5.52μg/L，在不穩(wěn)定斑塊組的水平為80.62±6.31μg/L，不穩(wěn)定斑塊組血清HMGB1水平高于穩(wěn)定斑塊組，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

本研究結(jié)果顯示，HMGB1參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成及降低斑塊穩(wěn)定性，在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和進(jìn)展中扮演十分關(guān)鍵的上游炎癥介質(zhì)的作用，可成為反映病情嚴(yán)重程度和進(jìn)展?fàn)顟B(tài)并指導(dǎo)治療的良好生物標(biāo)記物。因此，治療頸動(dòng)脈粥樣硬化，可設(shè)想通過(guò)抑制HMGB1的表達(dá)以及干涉其危險(xiǎn)因素，從而降低缺血性腦卒中的發(fā)生率。因研究時(shí)限及患者因素，本研究為非動(dòng)態(tài)性的，且樣本量較小，可在今后的臨床研究中進(jìn)一步完善。另外，HMGB1在AS病理中作用的研究目前尚處在起步階段,因此可進(jìn)一步深人了解其在AS病變中的變化規(guī)律、病理生理作用及其調(diào)控機(jī)制,將有助于從新的角度認(rèn)識(shí)AS病理機(jī)制，為探索AS的防治方法提供新的思路。