玉米蛋白磷酸酶2C基因ZmPP2C26兩個(gè)可變剪接體的功能分析

張盼娃，張夏瑋，于好強(qiáng)，盤林秀，付鳳玲,李晚忱

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 玉米研究所，四川 成都 611130)

蛋白磷酸酶2C(Protein phosphatase type 2C,PP2C)是蛋白磷酸酶超級(jí)家族中的一個(gè)家族，它通過對(duì)多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中蛋白質(zhì)可逆磷酸化的調(diào)節(jié)，在植物生長發(fā)育和對(duì)環(huán)境脅迫的應(yīng)答中起重要作用[1-2]。擬南芥、水稻等模式植物的PP2C家族成員已經(jīng)鑒定，并部分驗(yàn)證其功能[3-5]。然而，玉米基因組較大，冗余的重復(fù)和轉(zhuǎn)座序列眾多，導(dǎo)致基因家族成員間功能的多樣性更為復(fù)雜[6-8]。迄今為止，只鑒定了ZmPP2C家族中少數(shù)成員的功能，比如用ZmPP2C2基因轉(zhuǎn)化煙草可增強(qiáng)其抗寒性[9]，ZmPP2C16在脫落酸(Abscisic acid,ABA)介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用[10]，以及一個(gè)未編號(hào)的家族成員轉(zhuǎn)化擬南芥可增強(qiáng)其對(duì)非生物逆境的抗性[11]。

本課題組關(guān)于ZmPP2C基因在干旱脅迫下的差異表達(dá)研究中，克隆了ZmPP2C基因家族的一個(gè)成員，并驗(yàn)證其差異表達(dá)應(yīng)答干旱脅迫，當(dāng)時(shí)命名為ZmPP2Ca，在GenBank的注冊(cè)號(hào)為KJ855114.1[12]。值得注意的是，在上述研究中利用不同的PCR體系反復(fù)擴(kuò)增該基因開放閱讀框時(shí)，均能得到兩個(gè)長度不同的片段，序列分析表明，兩個(gè)片段長度相差214 bp，但重疊部分的序列完全相同。因此推測，這兩個(gè)片段是同一初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的可變剪接體。根據(jù)其推導(dǎo)蛋白與擬南芥和水稻PP2C家族成員的同源性和進(jìn)化樹分析，這一基因在近期的研究中被重新命名為ZmPP2C26[10]。

越來越多的證據(jù)表明，50%以上的植物基因均存在可變剪接現(xiàn)象，通過增加轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組的多樣性，應(yīng)答發(fā)育過程和環(huán)境脅迫[13-23]。例如，小麥DREB2基因[18]、擬南芥SR和SOS4基因[19-20]、水稻OslM和OsMAPK5基因[21-22]的可變剪接都被證明與非生物逆境脅迫應(yīng)答有關(guān)。在耐旱性極強(qiáng)的復(fù)蘇草本植物Sporobolusstapfianus中，PP2C基因家族一個(gè)成員的可變剪接也被證實(shí)對(duì)干旱脅迫有應(yīng)答[23]。

本研究利用反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增玉米ZmPP2C26基因的兩個(gè)可變剪接體，用以轉(zhuǎn)化野生型擬南芥，結(jié)合蛋白的亞細(xì)胞定位，驗(yàn)證其在干旱脅迫應(yīng)答中的功能。

1 材料和方法

1.1 ZmPP2C26不同剪接體的克隆

取玉米模式自交系B73幼苗的葉片，用RNAiso plus kit(TaKaRa,大連)提取總RNA。用RNase-free DNase(TaKaRa,大連)去除可能的基因組DNA污染后，用PrimeScriptTMⅡ 1st Strand cDNA Synthesis kit(TaKaRa,大連)反轉(zhuǎn)錄成cDNA。根據(jù)ZmPP2C26基因在GenBank的注冊(cè)序列(KJ855114.1)，用Primer-BLAST軟件(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast)設(shè)計(jì)特異PCR引物(5′-ATGTCTTGCACGGTGGCCA-3′，5′-GAGCTTGAAAATTTCTGCAACT-3′)，用LATaqDNA Polymerase和GC BufferⅠ(TaKaRa,大連)擴(kuò)增ZmPP2C26基因的開放閱讀框。擴(kuò)增產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠電泳分離，用QIAquick Gel Extraction Kit(Qiagen,德國)回收特異條帶，亞克隆至pMD19-T載體(TaKaRa, 大連)，送上海生物工程有限公司測序。利用Spidey軟件(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/spidey/)對(duì)測序結(jié)果與玉米自交系B73基因組DNA序列(Maize Genetics and Genomics Database，http://www.maizegdb.org/)進(jìn)行比對(duì)，分析ZmPP2C26基因的外顯子/內(nèi)含子結(jié)構(gòu)，用BLASTp軟件(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)比對(duì)較長與較短剪接體推導(dǎo)蛋白的氨基酸序列。

1.2 植物表達(dá)載體構(gòu)建和擬南芥的轉(zhuǎn)化

用引入限制性酶切位點(diǎn)SmaⅠ和SalⅠ(下劃線堿基)的特異引物(5′-TCCCCCGGGATGTCTTGCACGGTGGCCA-3′,5′-GCGTCGACGAGCTTGAAAATTTCTGCAACT-3′)，從克隆載體pMD19-T上擴(kuò)增不帶終止密碼(TAA)的ZmPP2C26基因長(LV)、短(SV)兩個(gè)可變剪接體的開放閱讀框。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶SmaⅠ/SalⅠ雙酶切消化后，插入以增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因eGFP為標(biāo)記的植物表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-eGFP，構(gòu)建成CaMV 35S啟動(dòng)子和章魚堿合成酶終止子OCS、控制同框融合基因ZmPP2C26-eGFP的植物表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-ZmPP2C26(LV)-eGFP和pCAMBIA2300-35S-ZmPP2C26(SV)-eGFP(圖1)。經(jīng)SmaⅠ/SalⅠ雙酶切鑒定和菌液送樣測序后，凍融法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)EHA 105菌株。經(jīng)抗性培養(yǎng)基篩選后，挑取陽性單克隆搖菌，用花序浸染法[24]轉(zhuǎn)化野生型擬南芥。

圖1 ZmPP2C26基因兩個(gè)可變剪接體的表達(dá)結(jié)構(gòu)Fig.1 Expression structures of two alternative spliced variants of ZmPP2C26 gene

1.3 轉(zhuǎn)基因植株的篩選

T0代種子收獲后，播種于添加50 mg/L卡那霉素(Sigma，美國)的1/2 MS培養(yǎng)基篩選[25]，存活T1代植株自交產(chǎn)生T2代種子。T2代株系繼續(xù)在相同抗性培養(yǎng)基上篩選，選取抗∶感分離比約3∶1的T2代株系繼續(xù)自交，產(chǎn)生T3代種子。在相同抗性培養(yǎng)基上篩選抗性不分離的純合T3代株系。用跨ZmPP2C26基因與eGFP基因的序列片段特異引物(5′-GCCCACCGTCCCCGCCTCTA-3′/5′-CTCGCCCTTGCTCACCATGG-3′)，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因擬南芥陽性檢測。選取純合轉(zhuǎn)基因擬南芥制作根尖切片，在熒光顯微鏡(90 I型，Nikon，日本)下檢測綠色熒光信號(hào)。

1.4 T3代株系的表型鑒定

從上述鑒定的兩個(gè)剪接體轉(zhuǎn)化的T3代純合株系中，各選20個(gè)長勢(shì)均勻一致的單株，并以野生型擬南芥為對(duì)照，分別移栽至5個(gè)盛有營養(yǎng)土的花盆中，在25 ℃、相對(duì)濕度60%～70%、光照10 h/黑暗14 h條件下生長2個(gè)月，其中3 盆每株取2個(gè)葉片用于實(shí)時(shí)定量PCR檢測(3次生物學(xué)重復(fù))后，稱取植株鮮質(zhì)量，室溫放置6 h，再稱取萎蔫質(zhì)量，按下式計(jì)算相對(duì)含水量；另外2盆植株停止?jié)菜?，?shí)施干旱處理，待植株顯現(xiàn)明顯萎蔫癥狀時(shí)，拍照紀(jì)錄株系間的表型差異。

用IBM-SPSS軟件(http://www-01.ibm.com/software/analytics/spss/)做方差分析和兩個(gè)剪接體及空白對(duì)照載體轉(zhuǎn)化T3代株系間的多重比較。

1.5 實(shí)時(shí)定量PCR檢測

將兩個(gè)可變剪接體轉(zhuǎn)化的T3株系及野生型對(duì)照的葉片樣品，經(jīng)液氮研磨后，用RNAiso plus kit(TaKaRa,大連)提取總RNA，用RNase-free DNase(TaKaRa,大連)去除可能的基因組DNA污染后，用PrimeScriptTMⅡ 1st Strand cDNA Synthesis kit(TaKaRa,大連)反轉(zhuǎn)錄成cDNA，用于實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time Quantitative PCR,RT-qPCR)檢測。用Primer-BLAST軟件(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast)設(shè)計(jì)兩對(duì)引物，P1(5′-GAGCGGTGAAGAGGGGTTAC-3′)/P2(5′-CCCAATGCCCCTAGACACTG-3′)擴(kuò)增ZmPP2C26基因cDNA第599至891堿基長293 bp片段，P3(5′-AGTATTGTTGGCCGTCCTCG-3′)/P4(5′-GGGTTAAGAGGCGCTTCAGT-3′)擴(kuò)增擬南芥肌動(dòng)蛋白基因AtAct1 cDNA第210到 448堿基長239 bp片段作為內(nèi)參。用RT-qPCR試劑盒SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ(TliRNaseH Plus)(Takara,大連)在定量PCR系統(tǒng)CFX96TMReal-Time System(Bio-Rad,美國)中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。用兩步法RT-qPCR溫度循環(huán)程序：95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，55 ℃ 30 s，循環(huán)39次。然后，將溫度以0.5 ℃/s升高至95 ℃，繪制熔解曲線，用于區(qū)別特異與非特異擴(kuò)增。用定量系統(tǒng)原配CFX MangerTM軟件(Version 2.0)的2-ΔΔCt法對(duì)內(nèi)參基因與目的基因的表達(dá)量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化[26]。用IBM-SPSS軟件(http://www-01.ibm.com/software/analytics/spss/)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.6 生物信息學(xué)分析與亞細(xì)胞定位

用ExPASy軟件(http://web.expasy.org)[27]在線預(yù)測兩個(gè)可變剪接體的推導(dǎo)氨基酸序列及其物理化學(xué)特性。用I-TASSER軟件(http://zhanglab.ccmb.med.umich.edu/I-TASSER)[28], 預(yù)測其推導(dǎo)蛋白的三維結(jié)構(gòu)。用TargetP 1.1軟件(http://www.cbs.dtu.dk/services/TargetP/)[29]，對(duì)較長剪接體保留的ZmPP2C26基因第一內(nèi)含子的推導(dǎo)氨基酸序列進(jìn)行亞細(xì)胞定位預(yù)測。

按Sparkes等[30]的方法，分別挑取含有ZmPP2C26(LV)和ZmPP2C26(SV)的農(nóng)桿菌陽性單克隆搖菌，調(diào)節(jié)至OD600=0.5，用微量注射器注入煙草葉片背面，培養(yǎng)2 d后，在90 I 型熒光顯微鏡(Nikon，日本)下檢測增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因eGFP瞬時(shí)表達(dá)的綠色熒光信號(hào)。

2 結(jié)果與分析

2.1 ZmPP2C26兩個(gè)可變剪接體的克隆

以玉米自交系B73的cDNA為模板，用ZmPP2C26基因開放閱讀框特異引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，凝膠電泳分離出兩條清晰的特異條帶，條帶大小

與1 000 bp的DNA標(biāo)記相當(dāng)(圖2)。序列分析表明，兩條特異條帶分別長1 164和951 bp，其重疊區(qū)域的序列完全相同。與B73基因組DNA序列比對(duì)結(jié)果表明，在較短剪接體中切除的213 nt第一內(nèi)含子，在較長剪接體的剪接中被保留(圖3)。第一個(gè)內(nèi)含子的剪接位點(diǎn)為5′-CC..CG-3′，與植物中通常的組成型剪接位點(diǎn)5′-GT..AG-3′不同。保留內(nèi)含子及其側(cè)翼序列的G/C含量較高，相當(dāng)于其他內(nèi)含子及其側(cè)翼序列的2倍(表1)。兩個(gè)剪接體推導(dǎo)氨基酸序列比對(duì)結(jié)果表明，PP2C蛋白的保守結(jié)構(gòu)域和活性位點(diǎn)均保持不變，保留內(nèi)含子在近N-端編碼一段71個(gè)氨基酸冗余序列，其中不包含PP2C蛋白的保守序列或活性位點(diǎn)(圖4)。

M.DNA分子標(biāo)記；1.約1 000 bp的兩個(gè)特異條帶M.DNA molecular Marker;1.Two specific bands beside 1 000 bp圖2 ZmPP2C26基因開放閱讀框擴(kuò)增片段Fig.2 Amplified fragments of open reading frame of ZmPP2C26 gene

圖3 ZmPP2C26基因兩個(gè)可變剪接體的外顯子/內(nèi)含子結(jié)構(gòu)Fig.3 Exon and intron structures of two alternative transcripts of ZmPP2C26 gene

內(nèi)含子Intron長度Length剪接位點(diǎn)及側(cè)翼序列Splice sites and flanking sequences內(nèi)含子G/C含量/%G/C content of intron sequence側(cè)翼序列G/C含量/%G/C content of flanking sequences1213 nt5'-GCGGCG//CCCGCG..GCGGCG//GTGGCC-3'82.1695.832126 nt5'-AAGTG//GTAATTT..CTCAG//GCACTGT-3'35.9541.673119 nt5'-ATTTG//GTATGTC..TTCAG//GGTGGAT-3'41.1741.67

注：雙斜線(//)表示內(nèi)含子5′-端和3′-端的剪接位點(diǎn)。

Note:Double slash (//) indicates intron 5′- and 3′- splice sites.

2.2 轉(zhuǎn)基因株系的表型

經(jīng)T1和T2代抗性培養(yǎng)基篩選后，跨ZmPP2C26基因和eGFP基因特異PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示，長、短兩個(gè)剪接體表達(dá)載體轉(zhuǎn)化分別獲得8和9個(gè)純合的T3代株系，而且根尖切片在熒光顯微鏡下均可檢測到綠色熒光信號(hào)(圖5)。在兩個(gè)表達(dá)載體中，ZmPP2C26基因的長、短兩個(gè)剪接體均與增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因eGFP處于同一開放閱讀框，說明這兩個(gè)剪接體也在T3代株系中異源表達(dá)。進(jìn)一步的RT-qPCR檢測表明，兩個(gè)剪接體在擬南芥中的相對(duì)表達(dá)水平比野生型擬南芥高6倍以上，而兩個(gè)剪接體各轉(zhuǎn)化株系之間的差異不顯著(P>0.05)(圖6)。

方差分析及多重比較表明，長、短兩個(gè)剪接體轉(zhuǎn)化T3代株系的相對(duì)含水量均顯著低于野生型擬南芥，而兩個(gè)剪接體各轉(zhuǎn)化株系間無顯著差異(圖7)。停止?jié)菜?周以后，兩個(gè)轉(zhuǎn)基因株系開始顯現(xiàn)萎蔫癥狀，5周后萎蔫明顯，而野生型擬南芥保持正常生長(圖8)。

Mu.野生型(空白對(duì)照)；LV1～LV8.較長剪接體轉(zhuǎn)化的T3代株系；SV1～SV9.較短剪接體轉(zhuǎn)化的T3代株系。*、**分別表示P<0.05、P<0.01顯著性。圖7同Mu.Wild type;LV1-LV8.T3 lines transformed by the longer alternative spliced variant;SV1-SV9.T3 lines transformedby the shorter alternative spliced variant.*,** indicates the statistical significance at P<0.05,P<0.01.The same as Fig.7圖6 兩個(gè)剪接體在T3代株系中的相對(duì)表達(dá)水平Fig.6 Relative expressions of the two alternative spliced variants in the T3 lines

圖7 T3株系及野生型的相對(duì)含水量Fig.7 Relative water contents of the T3 lines and the mutant

A.較長剪接體轉(zhuǎn)化的T3代株系;B.較短剪接體轉(zhuǎn)化的T3代株系;C.野生型(空白對(duì)照)A.T3 lines transformed by the longer alternative spliced variant;B.T3 lines transformed by the shorter alternative spliced variant;C.Wild type (negative control)圖8 T3株系及野生型對(duì)干旱脅迫的表型應(yīng)答Fig.8 Phenotypic responses of the T3 lines and the mutant to drought stress

2.3 ZmPP2C26兩個(gè)可變剪接體的理化特性與亞細(xì)胞定位

生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)果表明，較長和較短剪接體分別編碼長388和317個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，分子量分別為40.79和34.04 ku，等電點(diǎn)分別為5.97和5.27。兩個(gè)推導(dǎo)蛋白的三維結(jié)構(gòu)均相似于PPM1K基因編碼的人類蛋白磷酸酶1 K(GenBank注冊(cè)號(hào)：BC037552)[31]。較長剪接體保留內(nèi)含子編碼的71個(gè)冗余氨基酸保持隨機(jī)螺旋狀態(tài)(圖9)，其中58個(gè)氨基酸為葉綠體定位信號(hào)肽，預(yù)測保證概率為0.855。

1K.人類PPM1K基因編碼的蛋白磷酸酶1K；A.較長剪接體推導(dǎo)蛋白的三維結(jié)構(gòu)；B.較短剪接體推導(dǎo)蛋白的三維結(jié)構(gòu)1K.PP2C domain of the protein phosphatase 1K encoded by the PPM1K gene of human;A.The predicted 3-dimensional structure of putative protein of the longer spliced variant;B.The predicted 3-dimensional structure of putative protein of the short spliced variant圖9 ZmPP2C26兩個(gè)可變剪接體推導(dǎo)蛋白的三維結(jié)構(gòu)Fig.9 Predicted 3-dimensional structures of putative proteins of two alternative spliced variants of ZmPP2C26

熒光信號(hào)檢測表明，注射較長剪接體表達(dá)載體的煙草葉片，可在細(xì)胞核、細(xì)胞膜和細(xì)胞器檢測到增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因eGFP瞬時(shí)表達(dá)的綠色熒光信號(hào)，而注射較短剪接體表達(dá)載體的煙草葉片，只在細(xì)胞核和細(xì)胞膜檢測到增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因eGFP瞬時(shí)表達(dá)的綠色熒光信號(hào)(圖10)。

圖10 ZmPP2C26基因兩個(gè)可變剪接體的亞細(xì)胞定位Fig.10 Subcellular location of two alternative spliced variants of the ZmPP2C26 gene

3 討 論

可變剪接是真核生物應(yīng)答發(fā)育過程和環(huán)境脅迫，增加轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組多樣性的重要機(jī)制[13-17]。在動(dòng)植物中，由內(nèi)含子保留引起的可變剪接可改變剪接體編碼蛋白的亞細(xì)胞定位和生理活性[32-35]。本研究中，較長剪接體轉(zhuǎn)化在煙草葉片中瞬時(shí)表達(dá)的熒光信號(hào)，不僅與較短剪接體瞬時(shí)表達(dá)的煙草葉片一樣在細(xì)胞核和細(xì)胞膜上檢測到，還可在細(xì)胞器上檢測到。生物信息學(xué)預(yù)測表明，在較長剪接體保留內(nèi)含子近N-端編碼的71個(gè)氨基酸中，有58個(gè)為葉綠體定位信號(hào)肽。較長剪接體中保留第一內(nèi)含子編碼蛋白的功能，有可能使整個(gè)酶蛋白的活性由細(xì)胞核和細(xì)胞膜延伸到葉綠體，這有待構(gòu)建攜帶葉綠體標(biāo)記基因的載體進(jìn)行進(jìn)一步定位。

可變剪接的機(jī)制復(fù)雜多樣[15-16]，可變內(nèi)含子的剪接位點(diǎn)在脊椎動(dòng)物物種間高度可變[33,36-37]。但在植物中，可變剪接最主要的形式是內(nèi)含子保留[13,17,38-39]。剪接位點(diǎn)附近的G/C含量影響可變剪接中內(nèi)含子剪接位點(diǎn)的利用，可能與初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物二級(jí)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性有關(guān)[40-41]。保留內(nèi)含子及其側(cè)翼序列的G/C含量，一般高于其他剪接形式的內(nèi)含子[13,42]。在本研究中，ZmPP2C26基因的第一個(gè)內(nèi)含子在較長可變剪接體中被保留，保留內(nèi)含子及其側(cè)翼序列的G/C含量比同一基因的其他兩個(gè)內(nèi)含子及其側(cè)翼序列高出 1 倍，且保留內(nèi)含子的剪接位點(diǎn)(5′-CC..CG-3′)也與同一基因的其他兩個(gè)內(nèi)含子不同，而且有別于植物通常的組成型剪接位點(diǎn)(5′-GT..AG-3′)[43-45]。這些證據(jù)都說明，ZmPP2C26基因的第一個(gè)內(nèi)含子可能是一個(gè)特殊的保留型可變內(nèi)含子，這有待進(jìn)一步深入研究。

蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)預(yù)測表明，兩個(gè)可變剪接體的推導(dǎo)蛋白均保持PP2C的活性中心。在新近的研究報(bào)道中，ZmPP2C26基因的較長可變剪接體被命名為orphan42基因，編碼孤兒轉(zhuǎn)錄因子家族的一個(gè)成員[46]。PP2C家族的部分成員被證實(shí)參與ABA介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[47-49]，在逆境脅迫應(yīng)答中起負(fù)調(diào)控作用[50-51]。在本研究中，長、短兩個(gè)可變剪接體的異源表達(dá)，均使擬南芥野生型對(duì)干旱脅迫的敏感性增強(qiáng)。這一結(jié)果暗示，雖然ZmPP2C26基因不屬于大多數(shù)成員參與ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的第I亞家族[50-51]，但很可能通過可變剪接改變其功能，參與ABA介導(dǎo)的逆境脅迫轉(zhuǎn)導(dǎo)，起負(fù)調(diào)控作用[2,12]。由于玉米基因組的復(fù)雜性，參與ABA信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的ZmPP2C家族成員，還有待進(jìn)一步深入鑒定。

4 結(jié) 論

玉米蛋白磷酸酶2C基因ZmPP2C26在轉(zhuǎn)錄后發(fā)生可變剪接，較短剪接體中剪除的長213 nt的第一內(nèi)含子在較長剪接體中被保留。保留內(nèi)含子不改變編碼蛋白的蛋白磷酸酶活性，預(yù)測編碼一段葉綠體信號(hào)肽，有可能使其功能由細(xì)胞核和細(xì)胞膜延伸到葉綠體。兩個(gè)剪接體的異源表達(dá)，均可使擬南芥野生型對(duì)干旱脅迫的敏感性增強(qiáng)，說明其在ABA介導(dǎo)的逆境信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起負(fù)調(diào)控作用。