子宮內(nèi)膜樣腺癌中CD74和細(xì)胞周期蛋白A1的表達(dá)及關(guān)聯(lián)性

梁曉紅 段廣庭 袁 穎

(青海省交通醫(yī)院婦科，青海 西寧 810001)

子宮內(nèi)膜樣腺癌是子宮內(nèi)膜上皮來(lái)源的腫瘤中最常見(jiàn)的類型。近年顯示其發(fā)病率有升高趨勢(shì)〔1〕。CD74是在小鼠及人類體內(nèi)被發(fā)現(xiàn)，通過(guò)與CXC趨化因子受體、CD44和CD95等分子結(jié)合成為蛋白復(fù)合體介導(dǎo)下游分子通路，并在細(xì)胞組裝和肽類抗原遞呈方面發(fā)揮重要作用。近年研究顯示CD74在多種腫瘤中的表達(dá)升高〔2〕。細(xì)胞周期蛋白A1(CyclinA1)作為細(xì)胞周期正調(diào)控因子，在G1晚期到有絲分裂期均有表達(dá)，是維持正常細(xì)胞周期所必需的因子〔3,4〕。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜樣腺癌術(shù)后組織中CD74和CyclinA1的表達(dá)，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 2015年1月至2017年6月青海省交通醫(yī)院經(jīng)病理學(xué)確診為子宮內(nèi)膜樣腺癌，并行手術(shù)根治的患者82例為觀察組，年齡40～83歲，平均62.7歲。納入均符合WHO新版的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①林奇綜合征；②先天性疾病；③伴有風(fēng)濕免疫性疾病。34例子宮肌瘤行子宮全切的患者為對(duì)照組，留取術(shù)后的子宮內(nèi)膜組織，其中增生期18例，分泌期16例，年齡41～60歲，平均47.3歲。兩組均留取術(shù)后新鮮組織，均應(yīng)用70%的酒精固定保存。

1.2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD74和CyclinA1的表達(dá) CD74和CyclinA1蛋白均為濃縮液，先應(yīng)用免疫組化方法進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，由顯微鏡觀察后選擇最理想的表達(dá)濃度用于正式實(shí)驗(yàn)。CD74和CyclinA1的正式檢測(cè)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)。將酒精固定的組織剪成碎末，用銅網(wǎng)過(guò)濾后，制備成單細(xì)胞懸液(1×106/ml)。取1 ml單細(xì)胞懸液，分別加入CD74或CyclinA1一抗、磷酸鹽緩沖液(PBS)及異硫氰酸熒光素(FITC)-IgG二抗(均嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟操作)。流式細(xì)胞儀為美國(guó)BC公司生產(chǎn)，采用系統(tǒng)自帶軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.3結(jié)果分析 以熒光指數(shù)(FI)表示CD74或CyclinA1蛋白表達(dá)的半定量。FI=(腫瘤中蛋白表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度-對(duì)照樣品平均熒光強(qiáng)度)/正常對(duì)照樣品平均熒光強(qiáng)度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t、F檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1CD74和CyclinA1在兩組中表達(dá) 兩組CD74和CyclinA1表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。見(jiàn)表1。

2.2CD74和CyclinA1表達(dá)在觀察組不同臨床病理特征中的比較 CD74和CyclinA1表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度和增殖指數(shù)相關(guān)，CD74表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)。見(jiàn)表2。

2.3觀察組中CD74和CyclinA1相關(guān)性 CD74和CyclinA1表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。

表1 CD74和CyclinA1在兩組中表達(dá)

表2 CD74和CyclinA1表達(dá)在觀察組不同臨床病理特征中的比較

3 討 論

子宮內(nèi)膜樣腺癌是一種腺上皮腫瘤，由腺泡狀、乳頭狀或部分實(shí)性結(jié)構(gòu)構(gòu)成，缺乏子宮內(nèi)膜漿液性癌的細(xì)胞核特征〔5〕。子宮內(nèi)膜樣腺癌患者雌激素水平較高，平均年齡約63歲，90%的患者有一定程度的陰道排液，典型的病變特點(diǎn)為腺性或絨毛腺性結(jié)構(gòu)，襯覆復(fù)層柱狀上皮，并伴有擁擠、復(fù)雜的分支結(jié)構(gòu)，襯覆細(xì)胞一般為柱狀，相鄰細(xì)胞的頂部邊界平齊，所形成的腺腔輪廓光滑〔6〕。腫瘤細(xì)胞嗜酸性、顆粒狀，核可見(jiàn)輕到中度不典型性，核仁不明顯。腫瘤在生長(zhǎng)和進(jìn)展時(shí)可以表現(xiàn)出增殖相關(guān)蛋白的失調(diào)〔7〕。CD74是一種非多形性糖基化蛋白，分子量為31～45 kD，通過(guò)選擇性剪切及成熟mRNA經(jīng)過(guò)選擇性翻譯起始密碼子產(chǎn)生了P33、P35、P41和P43這4種異型體蛋白〔8〕。P33是細(xì)胞內(nèi)CD74蛋白的主要存在形式，其一級(jí)結(jié)構(gòu)由胞內(nèi)段、跨膜區(qū)及胞外段組成。研究認(rèn)為CD74作為促炎細(xì)胞因子的受體，與促炎因子結(jié)合后啟動(dòng)細(xì)胞下游信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤性病變形成〔9,10〕。CyclinA1是細(xì)胞周期家族的重要成員，屬于高度保守的Cyclin家族，具有組織特異性，可以結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子E2F-1、P21家族蛋白等，CyclinA1可以與Cyclin依賴性蛋白質(zhì)激酶2形成復(fù)合物，引起E2F-1的磷酸化，調(diào)節(jié)細(xì)胞周期〔11,12〕。

流式細(xì)胞術(shù)是新型檢測(cè)技術(shù)，組織制備單細(xì)胞懸液后應(yīng)用抗體及熒光二抗標(biāo)記，結(jié)果客觀，準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示CD74和CyclinA1二者對(duì)腫瘤的形成有明顯的促進(jìn)作用，即二者類似癌基因樣的作用。CD74和CyclinA1二者參與腫瘤的浸潤(rùn)過(guò)程及增殖過(guò)程。CD74和CyclinA1高表達(dá)使腫瘤細(xì)胞具有明顯的直接蔓延能力，同時(shí)使腫瘤細(xì)胞對(duì)肌層的侵襲破壞能力明顯增強(qiáng)，這可能是由于CyclinA1和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(CDK)2結(jié)合后引起CyclinA1活化有關(guān)，同時(shí)引起CDK2磷酸化，進(jìn)而抑制CDK2活性〔13,14〕。CyclinA1和CyclinB間也有相互作用，這可以引發(fā)Cyclin銷毀路徑并終止有絲分裂。CyclinA1在CyclinB之前也有相互作用，這可以引發(fā)Cyclin銷毀路徑并終止有絲分裂。也有觀點(diǎn)認(rèn)為CyclinB可以誘導(dǎo)泛素介導(dǎo)的Cyclin家族成員的降解，CyclinA1可以阻止這種降解。這些作用均與促腫瘤作用密切相關(guān)〔15〕。CD74表達(dá)的變化使腫瘤浸潤(rùn)模式發(fā)生改變，能引起細(xì)胞極性紊亂，使腫瘤細(xì)胞的形態(tài)更加彌漫，細(xì)胞體積更小，易于浸潤(rùn)〔16〕。本結(jié)果提示CD74可以調(diào)節(jié)腫瘤性的分化過(guò)程，其表達(dá)升高可以使腫瘤細(xì)胞停滯在幼稚狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)CD74和CyclinA1的相關(guān)性，提示二者在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的作用可能是通過(guò)獨(dú)立的通路發(fā)揮的，其具體調(diào)控機(jī)制有待更多實(shí)驗(yàn)證實(shí)。