成釉細(xì)胞瘤中基質(zhì)金屬蛋白酶-12、-14和細(xì)胞角蛋白-7的表達(dá)及相關(guān)性

王禹錕 郭婧玉 孫 越 董文杰

(牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬二院口腔科，黑龍江 牡丹江 157000)

成釉細(xì)胞瘤是發(fā)生于頜骨的牙源性上皮性腫瘤，在口腔科較為常見，其生長(zhǎng)緩慢，但具有復(fù)發(fā)及局部侵襲性，部分腫瘤可以發(fā)生惡變〔1〕。在成釉細(xì)胞瘤的病變形成中可以觀察到相關(guān)蛋白異常表達(dá)，尤其是與腫瘤增殖及轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的高表達(dá)?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)家族是與腫瘤進(jìn)展相關(guān)的蛋白〔2,3〕，MMP-12和MMP-14是家族中的重要成員，可以有效降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，使腫瘤遷移的通路打開，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲〔3,4〕。近年認(rèn)為MMP-14可能具有多向作用，如對(duì)脈管生成的調(diào)控作用，對(duì)細(xì)胞增殖的影響等〔5〕。細(xì)胞角蛋白(CK)-7可以標(biāo)記上皮成分，其對(duì)腺上皮較為敏感，被認(rèn)為是腺上皮標(biāo)志物〔6〕。本研究關(guān)注成釉細(xì)胞瘤術(shù)后組織中MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)及其在不同臨床病理特征中表達(dá)差別及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 2014年1月至2015年12月牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬二院住院行手術(shù)治療、經(jīng)病理學(xué)確診的成釉細(xì)胞瘤患者73例為觀察組，納入均符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且臨床資料完整。均于術(shù)后留取標(biāo)本，并用石蠟包埋。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有其他器官惡性腫瘤；②頭頸手術(shù)史；③先天畸形；④有放、化療病史。其中男39例，女34例，年齡50～70歲，平均64.4歲。21例非腫瘤性口腔黏膜組織為對(duì)照組，均于術(shù)后留取標(biāo)本，并用石蠟包埋。其中男11例，女10例，年齡52～75歲，平均66.9歲。兩組性別、年齡構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)檢測(cè) MMP-12、MMP-14和CK-7的檢測(cè)均基于術(shù)后蠟塊組織，應(yīng)用免疫組化En Vision法檢測(cè)3種蛋白表達(dá)。MMP-12、MMP-14和CK-7均為濃縮液，按不同比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，選擇染色最理想的濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(MMP-12為1∶250，MMP-14為1∶100，CK-7為1∶200)。正式實(shí)驗(yàn)的操作均由同一技師完成，嚴(yán)格按說(shuō)明書進(jìn)行，設(shè)陽(yáng)性質(zhì)控和陰性質(zhì)控，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，減少人為誤差。

1.3MMP-12、MMP-14和CK-7結(jié)果判定方法 MMP-12和MMP-14的陽(yáng)性部位是細(xì)胞質(zhì)，CK-7的陽(yáng)性部位是細(xì)胞膜(3種蛋白在部分間質(zhì)中可觀察到弱表達(dá)，不計(jì)為陽(yáng)性)。陽(yáng)性判定為著色強(qiáng)度和陽(yáng)性率結(jié)合判定。著色強(qiáng)度：無(wú)著色為0分；弱著色為1分，中等著色為2分，強(qiáng)著色為3分。染色較為明顯區(qū)域(熱點(diǎn)區(qū))計(jì)數(shù)，共選擇3個(gè)400倍視野，取平均值：<5%計(jì)為0分，5%～10% 1分，11%～30% 2分，31%～50% 3分，>50% 4分。二者乘積的分值為0～12分，0～3分為陰性，4～12分為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t、χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)陽(yáng)性率在兩組中比較 觀察組中MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。見表1。

2.2MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)的陽(yáng)性率在觀察組不同臨床病理特征分組中的比較 觀察組中MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)陽(yáng)性率與復(fù)發(fā)有關(guān)，MMP-12、MMP-14表達(dá)的陽(yáng)性率與增殖指數(shù)密切相關(guān)。MMP-14表達(dá)陽(yáng)性率與腫瘤最大徑密切相關(guān)，三者均與性別和年齡無(wú)明顯相關(guān)性。見表2。

表1 兩組MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)陽(yáng)性率比較〔n(%)〕

表2 MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)陽(yáng)性率在觀察組不同臨床病理特征分組中的比較〔n(%)〕

2.3觀察組MMP-12、MMP-14和CK-7表達(dá)相關(guān)性 MMP-12、MMP-14表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.53，P<0.05)，MMP-12和CK-7、MMP-14和CK-7之間無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05)。

3 討 論

成釉細(xì)胞瘤的臨床表現(xiàn)是無(wú)痛性腫脹，疼痛或異常的感覺少見，尤其是腫瘤較小時(shí)，臨床表達(dá)非常不明顯。腫瘤直徑通常為1.0～8.5 cm，X線可以表現(xiàn)為圓形、多房性邊界清晰的透光區(qū)、有的透光區(qū)呈蜂窩狀、泡沫狀、單房性清晰的囊腔，透光區(qū)附近有子囊的少見，邊緣骨硬化，有的可見貝殼狀邊緣〔7,8〕。部分病例可見斑駁的透射/阻射混雜影，邊界常不清楚，X線常不能確診，需結(jié)合CT或磁共振成像(MRI)檢查。腫瘤的生長(zhǎng)較為緩慢，具有局部侵襲性〔9〕。病理特征中的組織學(xué)類型主要是濾泡型和叢狀型，但其與臨床行為無(wú)明顯相關(guān)性〔10〕。鏡下觀察到上皮團(tuán)塊為多角形細(xì)胞，排列疏松、似星網(wǎng)狀層，周圍是單層排列的高柱狀細(xì)胞，核遠(yuǎn)離基底膜，似成釉細(xì)胞，單囊成釉細(xì)胞的區(qū)域擴(kuò)大，周圍殘存的為典型的腫瘤結(jié)構(gòu)〔11〕。上皮島的細(xì)胞核深染，并呈極性排列，細(xì)胞質(zhì)常呈空泡狀，上皮島中央的細(xì)胞疏松排列。病變形成中可以伴有囊性變。近年研究認(rèn)為成釉細(xì)胞瘤病變的形成與基因和蛋白的表達(dá)失調(diào)有關(guān)〔12〕。

本研究提示MMP-12、MMP-14和CK-7三者對(duì)成釉細(xì)胞瘤的形成有一定促進(jìn)作用。三者高表達(dá)在一定程度上預(yù)示著病變的復(fù)發(fā)。MMP-12、MMP-14二者可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增生和繁殖。MMP-14促進(jìn)腫瘤血管生成及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖〔13,14〕。MMP-12和MMP-14在腫瘤性改變時(shí)其分泌量增加，同時(shí)引起細(xì)胞外基質(zhì)的降解，對(duì)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和腫瘤進(jìn)展有重要的促進(jìn)作用〔15〕。MMP-12的功能體現(xiàn)在彈性蛋白及組織重塑上，在良性腫瘤時(shí)其表達(dá)輕度上調(diào)，惡性腫瘤時(shí)表達(dá)明顯升高，其可能是良性腫瘤表達(dá)時(shí)的約4倍，對(duì)促進(jìn)腫瘤的多種功能有明顯的加速作用〔16〕。研究顯示MMP-12可以促進(jìn)腫瘤的播散，如MMP-12對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-C有一定的促進(jìn)作用，使腫瘤間質(zhì)的淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，同時(shí)促進(jìn)管腔形成，使腫瘤通過(guò)淋巴道轉(zhuǎn)移的通路更加直接，促進(jìn)惡性腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移〔17〕。近年研究認(rèn)為MMP-14可以促進(jìn)間質(zhì)的血管形成，并引起CD31等血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，并促進(jìn)管腔形成，對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有重要意義，而且MMP-14還可以促進(jìn)VEGF分泌和表達(dá)，并通過(guò)VEGF受體，發(fā)揮促進(jìn)血管生成的作用〔18〕。此時(shí)血流增加，供應(yīng)氧和營(yíng)養(yǎng)增加，對(duì)細(xì)胞增殖起明顯的促進(jìn)作用。MMP-14升高時(shí)可以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的分化，而分化作為細(xì)胞在發(fā)育進(jìn)程中的表達(dá)過(guò)程，其也是細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中不同時(shí)期細(xì)胞形態(tài)的反映，MMP-14的表達(dá)上調(diào)，使成釉細(xì)胞瘤的間質(zhì)細(xì)胞處于較為幼稚的階段，腫瘤細(xì)胞可以表現(xiàn)為細(xì)胞豐富和密集，且具有高度增殖的特征〔19〕。CK是上皮細(xì)胞的中間絲蛋白，具有突出的分子多樣性，其中間絲是由配對(duì)的Ⅰ型和Ⅱ型分子組成，作為上皮細(xì)胞骨架的一部分，角蛋白對(duì)上皮細(xì)胞和組織保持機(jī)械穩(wěn)定性和完整性起著非常重要的作用。CK-7是腺上皮的標(biāo)志物，近年研究顯示其還可能對(duì)調(diào)控相關(guān)功能及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)起一定作用〔20〕。MMP-12、MMP-14和CK-7三者中促進(jìn)腫瘤作用最強(qiáng)的是MMP-14，可能與其對(duì)增殖、血管生成、抑制凋亡等多種作用有關(guān)。本文提示，MMP-12、MMP-14二者具有正向協(xié)同效應(yīng)，共同促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，二者的協(xié)同作用可能與結(jié)構(gòu)同源及功能相關(guān)，但是MMP-12的功能可能較為單一，因此MMP-14可能是上游蛋白，對(duì)MMP-12有明顯的調(diào)節(jié)作用〔21,22〕。

綜上，成釉細(xì)胞瘤中MMP-12、MMP-14和CK-7高表達(dá)，MMP-12、MMP-14對(duì)促進(jìn)病變的增殖有重要作用。MMP-12和MMP-14具有正向協(xié)同作用。聯(lián)合檢測(cè)MMP-12、MMP-14和CK-7的表達(dá)可能對(duì)判定病變復(fù)發(fā)有一定意義。