微小RNA-203抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞的干細(xì)胞特性分析

劉家凱 曾海勇 祝 剛

膠質(zhì)母細(xì)胞瘤為星形細(xì)胞瘤的一種常見(jiàn)類(lèi)型, 也是惡性程度最高的的一種膠質(zhì)瘤, 具有預(yù)后不佳的特點(diǎn)［1］?，F(xiàn)階段,該疾病的治療以手術(shù)、放療、化療及其他綜合治療為主, 病死率仍處于較高水平。為改善膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者的預(yù)后, 近年來(lái)國(guó)內(nèi)外醫(yī)療領(lǐng)域不斷深入探索該疾病的發(fā)病機(jī)制。目前對(duì)該疾病發(fā)生及發(fā)展機(jī)制的研究已經(jīng)進(jìn)入基因領(lǐng)域［2］。微小RNA是一類(lèi)由內(nèi)源基因編碼的單鏈RNA分子, 國(guó)內(nèi)外大量實(shí)踐研究已經(jīng)證實(shí)微小RNA與多種腫瘤疾病的發(fā)生、發(fā)展存在明顯關(guān)系［3］。早期有研究發(fā)現(xiàn)微小RNA-203在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中的表達(dá)降低, 但尚無(wú)較多更深入的研究?；谏鲜霈F(xiàn)狀, 本研究分析微小RNA-203對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞特性的影響, 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2014年1月～2016年12月收治的、接受手術(shù)治療的30例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者作為研究對(duì)象?；颊咧心?18 例 , 女 12 例 , 年齡 22～71 歲 , 平均年齡 (45.19±9.06)歲。本研究在獲取醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后開(kāi)展。

1.2 方法

1.2.1 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞培養(yǎng)、分離 取30例患者術(shù)后新鮮病理組織, 剪碎后, 使用胰蛋白酶消化, 制作成單細(xì)胞懸液, 經(jīng)過(guò)濾、離心后, 使用干細(xì)胞培養(yǎng)基、放置在含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 溫度37℃, 待細(xì)胞成熟后, 分離細(xì)胞, 隨機(jī)分為研究組和對(duì)照組, 每組15例。

1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 向研究組干細(xì)胞轉(zhuǎn)染微小RNA-203, 向?qū)φ战M細(xì)胞轉(zhuǎn)染無(wú)意義寡核苷酸鏈, 轉(zhuǎn)染后24 h, 在熒光顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù), 計(jì)算轉(zhuǎn)染效率。

1.2.3 CD133 mRNA、Nestin mRNA 檢測(cè) 轉(zhuǎn)染 3 d 后 , 采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)兩組干細(xì)胞中CD133 mRNA、Nestin mRNA 的表達(dá) , 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢默沙克生物科技有限公司, 嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)操作。

1.2.4 細(xì)胞成球試驗(yàn) 將轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞以每孔1000個(gè)的密度接種于96孔培養(yǎng)板上, 1周后計(jì)算兩組細(xì)胞一次成球、二次成球的細(xì)胞球數(shù)量。

1.3 觀察指標(biāo) 比較兩組干細(xì)胞轉(zhuǎn)染3 d后 CD133 mRNA、Nestin mRNA表達(dá)水平以及轉(zhuǎn)染1周后一次成球、二次成球的細(xì)胞球數(shù)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差(s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組干細(xì)胞轉(zhuǎn)染 3 d 后的 CD133 mRNA、Nestin mRNA比較 轉(zhuǎn)染 3 d 后 , 研究組干細(xì)胞的 CD133 mRNA、Nestin mRNA的表達(dá)水平均低于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=89.80、55.80, P＜0.05)。見(jiàn)表 1。

2.2 兩組干細(xì)胞轉(zhuǎn)染1周后的一次成球、二次成球的細(xì)胞球數(shù)量比較 轉(zhuǎn)染1周后, 研究組干細(xì)胞一次成球、二次成球的細(xì)胞球數(shù)量均低于對(duì)照組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=35.39、145.52, P＜0.05)。見(jiàn)表 2。

表1 兩組干細(xì)胞轉(zhuǎn)染 3 d 后的 CD133 mRNA、Nestin mRNA 比較 (

表1 兩組干細(xì)胞轉(zhuǎn)染 3 d 后的 CD133 mRNA、Nestin mRNA 比較 (

注 ：與對(duì)照組比較 , aP＜0.05

?

表2 兩組干細(xì)胞轉(zhuǎn)染1周后的一次成球、二次成球的細(xì)胞球數(shù)量比較(s, %)

表2 兩組干細(xì)胞轉(zhuǎn)染1周后的一次成球、二次成球的細(xì)胞球數(shù)量比較(s, %)

注：與對(duì)照組比較, aP＜0.05

?

3 討論

研究證實(shí), 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞具有相似的生理作用, 且能夠在誘導(dǎo)分化環(huán)境中發(fā)生細(xì)胞分化, 因此對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞的特性進(jìn)行深入研究具有重要意義［4］。國(guó)內(nèi)外近年來(lái)開(kāi)展的細(xì)胞功能學(xué)研究證實(shí), 微小RNA-203對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞特性具有一定程度的調(diào)節(jié)作用［5］。此外, 早期開(kāi)展的研究還證實(shí), 微小RNA-203在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)降低, 并能通過(guò)抑制相關(guān)基因信號(hào)通路對(duì)膠質(zhì)瘤組織細(xì)胞的侵襲能力產(chǎn)生抑制作用［6,7］。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞的自我更新能力和多向分化能力的強(qiáng)弱與患者的預(yù)后存在明顯相關(guān)性, 可以說(shuō)是細(xì)胞的重要特性。

本研究分析微小RNA-203對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞自我更新能力和多向分化能力的影響。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞自我更新能力評(píng)估指標(biāo)為轉(zhuǎn)染1周后一次成球、二次成球的細(xì)胞球數(shù)量, 多向分化能力的評(píng)估指標(biāo)為CD133 mRNA、Nestin mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染3 d后, 研究組干細(xì)胞的CD133 mRNA、Nestin mRNA 的表達(dá)水平均低于對(duì)照組 , 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (t=89.80、55.80, P＜0.05)。轉(zhuǎn)染 1 周后 , 研究組干細(xì)胞一次成球、二次成球的細(xì)胞球數(shù)量均低于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=35.39、145.52, P＜0.05)。上述研究結(jié)果表明, 微小RNA-203能夠抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞的自我更新能力, 促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞進(jìn)行多向分化。深入分析得到上述結(jié)果的原因?yàn)椋合蚰z質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞轉(zhuǎn)染微小RNA-203后, 能夠使一定比例的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞轉(zhuǎn)換為一般細(xì)胞, 失去干細(xì)胞本身的生理作用, 最終導(dǎo)致腫瘤干細(xì)胞群體難以維系。

綜上所述, 微小RNA-203是一種能夠抑制膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞自我更新能力、促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤干細(xì)胞多向分化的單鏈RNA分子。針對(duì)微小RNA-203進(jìn)行膠質(zhì)母細(xì)胞瘤基因治療可作為一種新的研究思路, 具有較高的研究?jī)r(jià)值。