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    宮頸癌患者癌組織中內(nèi)皮特異性分子-1和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子蛋白的表達(dá)及意義

    2018-07-18 09:57:02宋曉環(huán)
    中國老年學(xué)雜志 2018年13期
    關(guān)鍵詞:研究進(jìn)展

    宋曉環(huán)

    (長春醫(yī)學(xué)高等??茖W(xué)校病理教研室,吉林 長春 131300)

    宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤,與高危型人乳頭狀病毒(HPV)感染密切相關(guān),發(fā)病率僅次于乳腺癌〔1,2〕。近年相關(guān)文獻(xiàn)〔3~6〕報(bào)道內(nèi)皮特異性分子(ESM)-1和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)都與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究探索ESM-1和VEGF是否參與宮頸癌的發(fā)病機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1對象與分組 選取2016~2018年經(jīng)吉林省人民醫(yī)院病理科確診的宮頸癌組織150例和癌旁宮頸組織30例作為研究對象,平均年齡分別為(52.6±1.4)歲和(53.3±1.9)歲。宮頸癌組織根據(jù)臨床分期:Ⅰ期51例、Ⅱ期59例、Ⅲ期40例,根據(jù)病理類型:高分化62例、中分化45例、低分化43例,根據(jù)有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移:有轉(zhuǎn)移63例、無轉(zhuǎn)移87例。全部病例在術(shù)前均未接受任何放、化療,不合并其他臟器官疾病,兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,具有可比性(P>0.05)。

    1.2主要試劑和儀器 兔抗人ESM-1、VEGF抗體、SP9710和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑盒購于福州邁新生物有限公司。Trizol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)熒光定量試劑盒購于塔克拉公司。Leica切片機(jī)(德國Leica公司);OLYMPUS BX51光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS公司);7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國ABI公司)。

    1.3ESM-1和VEGF mRNA水平檢測 首先設(shè)計(jì)、合成引物,由上海生物工程有限公司合成,序列為GADPH引物(371 bp):上游5′-GATTGTTGCCATC-AACGACC-3′,下游5′-GTGCAGGATGCATTGCTGAC-3′;ESM-1引物(523 bp):上游5′-AACTATGCTGAAGTCTTAGGA-3′,下游5′-TCAGAACTGAGTAAGGCCTG-3′;VEGF引物(287 bp):上游5′-TGGGCCAGCAATTGTTCACA-3′,下游5′-ATTGTCTTGCCATCATGCTAG-3′。Trizol提取總RNA然后反轉(zhuǎn)錄,通過預(yù)變性、變性、退火、延伸及40個(gè)循環(huán)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測,檢測得Ct值,每個(gè)樣本基因擴(kuò)增3次,取平均值,采用2-ΔΔCt表示目的基因相對表達(dá)水平,ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因,ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對照組。

    1.4樣本中ESM-1、VEGF蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度的檢測 組織石蠟切片3 μm,每個(gè)樣本2張,65℃烤箱烘片2 h,然后常規(guī)脫蠟至水洗,采用檸檬酸抗原修復(fù)液煮沸10 min進(jìn)行抗原修復(fù),分別滴加ESM-1、VEGF抗體,抗體為即用型,其余步驟嚴(yán)格按照SP9710試劑盒說明書進(jìn)行,DAB顯色后,用蘇木精復(fù)染,封片。OLYMPUS顯微鏡觀察,200倍鏡下拍攝圖片連續(xù)5個(gè)視野,采用Motic Images Advanced 3.2圖像分析軟件,檢測光密度值(OD值),OD值越大陽性表達(dá)越強(qiáng)。

    1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0軟件行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、Spearman等級相關(guān)分析。

    2 結(jié) 果

    2.1各組ESM-1和VEGF mRNA水平比較 與癌旁宮頸組織比較,ESM-1和VEGF mRNA水平隨宮頸癌分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期表達(dá)明顯增強(qiáng),隨宮頸癌病理類型高、中、低分化表達(dá)明顯增強(qiáng),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.2各組ESM-1和VEGF蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度比較 與癌旁宮頸組織比較,ESM-1和VEGF的蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度隨宮頸癌分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期表達(dá)明顯增強(qiáng),隨宮頸癌病理類型高、中、低分化表達(dá)明顯增強(qiáng),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1,圖1,圖2。

    2.3ESM-1和VEGF陽性表達(dá)率和臨床病理特征的關(guān)系 ESM-1和VEGF的陽性表達(dá)率在不同臨床分期、病理類型及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表2。

    表1 三組ESM-1、VEGF mRNA及蛋白水平的比較

    與癌旁宮頸組織比較:1)P<0.05;與Ⅰ期比較:2)P<0.05;與Ⅱ期比較;3)P<0.05,與高分化比較:4)P<0.05;與中分化比較:5)P<0.05

    圖1 各組ESM-1蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度(×200,免疫組化SP法染色)

    圖2 各組VEGF蛋白的陽性表達(dá)強(qiáng)度(×200,免疫組化SP法染色)

    臨床病理特征nESM-1+-陽性率(%)VEGF+-陽性率(%)臨床分期Ⅰ期512526 49.0224 2747.06Ⅱ期593920 66.101) 362361.021)Ⅲ期4037392.501)2)35587.501)2)病理類型高分化6227 3543.5525 3740.32中分化4534 1175.563)321371.113)低分化4340 393.023)4)38588.373)4)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有63 59493.6556788.89 無87 424548.285) 394844.835)

    與Ⅰ期比較:1)P<0.05;與Ⅱ期比較:2)P<0.05;與高分化比較:3)P<0.05;與中分化比較:4)P<0.05;與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較:5)P<0.05

    2.4ESM-1和VEGF mRNA水平及蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度的相關(guān)性分析 ESM-1和VEGF mRNA水平及蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度均呈正相關(guān)(r1=0.529,P1=0.026;r2=0.601,P2=0.035)。

    3 討 論

    宮頸癌是婦科最常見的惡性腫瘤之一,僅次于乳腺癌,其發(fā)病率逐年年輕化且發(fā)病率、死亡率高,嚴(yán)重威脅女性患者的生命健康和生活質(zhì)量〔1,2〕。近年來手術(shù)治療雖然有一定的效果,但中、晚期患者術(shù)后仍易于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移,因此尋找新的治療手段是腫瘤專家的熱衷研究課題。ESM-1是1996年從人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNA文庫中克隆出的一種新型內(nèi)皮細(xì)胞,是一種可溶性蛋白多糖,具有調(diào)節(jié)VEGF的功能〔2~4,7〕。眾多研究〔8,9〕證實(shí)在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中轉(zhuǎn)移、浸潤與腫瘤新生血管密切相關(guān)。ESM-1既能促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長又能改善腫瘤細(xì)胞微環(huán)境〔7,10〕;VEGF是促血管生成因子,具有多功能性,能直接刺激內(nèi)皮細(xì)胞生長,促進(jìn)血管生成,還能介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞遷移,誘導(dǎo)血管生成〔11~13〕。因此,ESM-1、VEGF與腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究成為熱點(diǎn),探索ESM-1、VEGF能否成為腫瘤靶向治療的靶點(diǎn)備受關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,ESM-1和VEGF參與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、浸潤,阻斷二者的表達(dá)可能為宮頸癌靶向治療提供新的指導(dǎo)與靶點(diǎn)。

    4 參考文獻(xiàn)

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    9李曉霞,李文良,馬勇杰.肺癌腦轉(zhuǎn)移分子機(jī)制的研究進(jìn)展〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2013;20(5):387-91.

    10向 昕,趙文博.內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子-1與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展〔J〕.廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008;36(6):67-71.

    11龔曉燕,保永亮,黃金玲.血管內(nèi)皮生長因子與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移〔J〕.安徽醫(yī)藥,2013;17(1):3-5.

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    13王立巖,許曉艷,盛敏佳,等.HIF-1α及VEGF在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2009;13(12):1749-52.

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