ATP熒光檢測(cè)技術(shù)對(duì)纖維支氣管鏡清洗消毒效果評(píng)價(jià)的研究

楊紹麗，吳文莉，王靜，徐晶

（昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南　昆明　650000）

隨著纖維支氣管鏡技術(shù)的不斷發(fā)展，其被廣泛應(yīng)用于感染性、非感染性呼吸道疾病的診斷、治療，如不明原因的胸腔積液、膿胸、氣胸、胸腔內(nèi)異物等[1]。對(duì)于感染性呼吸道疾病，常見的病原體有細(xì)菌、病毒、真菌，其中院內(nèi)感染最常見的病原體為克雷伯菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌，且多為耐藥菌，一旦發(fā)生交叉感染，臨床抗感染治療難度極大[2-3]。院外感染常見的病原體為支原體、病毒、軍團(tuán)菌，由于我國(guó)肺結(jié)核的高流行趨勢(shì)，結(jié)核桿菌也是一種常見病原體[5-6]。支氣管鏡作為一種介入診療工具，使用過程中可能對(duì)呼吸道造成一定損傷，因其材質(zhì)特殊、結(jié)構(gòu)復(fù)雜精細(xì)，使用后若清洗消毒不徹底，或?qū)μ厥饣颊呤褂眠^的內(nèi)鏡未進(jìn)行特殊處理，可能會(huì)導(dǎo)致醫(yī)院交叉感染的發(fā)生[4]。三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）熒光檢測(cè)作為一種既可以反映被測(cè)物體微生物負(fù)載量，又可以反映有機(jī)物殘留量的技術(shù)，因其方便、快捷的優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛運(yùn)用于食品衛(wèi)生、環(huán)保、醫(yī)療衛(wèi)生等領(lǐng)域。本研究采用ATP熒光檢測(cè)和濾膜法細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)兩種方法對(duì)纖維支氣管鏡進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比兩種檢測(cè)結(jié)果差異，以探討ATP熒光檢測(cè)技術(shù)對(duì)纖維支氣管鏡清洗消毒效果現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)的可行性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1臨床材料

1.1.1采樣方法選取本院肺病脾胃病科、重癥醫(yī)學(xué)科、內(nèi)鏡中心三個(gè)部門共9支纖維支氣管鏡，隨機(jī)抽取“使用期間清洗消毒后”、“保存?zhèn)溆谩?、“使用后未清洗”三種不同保存狀態(tài)的纖支鏡，沖洗其內(nèi)腔面獲得洗脫樣本，再分別利用ATP熒光檢測(cè)技術(shù)和濾膜法細(xì)菌培養(yǎng)的方法對(duì)洗脫樣本進(jìn)行檢測(cè)。纖支鏡清洗消毒流程按照《軟式內(nèi)鏡清洗消毒技術(shù)規(guī)范》WS507-2016進(jìn)行，采樣依據(jù)《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB15982-2012中要求進(jìn)行。

1.1.2采樣部位從活檢口注入采樣溶液沖洗內(nèi)鏡內(nèi)腔面并全量收集，得到樣本。

1.2采樣步驟

1.2.1ATP熒光檢測(cè)法采用3M Clean-Trace ATP熒光檢測(cè)儀，監(jiān)測(cè)工具包括：水質(zhì)采樣棒、連接器、樣品收集杯、50ml無(wú)菌注射器和無(wú)菌水，采樣方法參照GB15982-2012。檢測(cè)過程：①取出冷藏（2～8℃）的采樣棒包裝袋（使用前需讓其在室溫下平衡10 min），持續(xù)按住ATP檢測(cè)儀器上的紅色按鈕開機(jī)后，使儀器主菜單顯示“測(cè)量樣品”，待用；②將內(nèi)鏡末端插入樣品收集杯中，將連接器寬頭連接到導(dǎo)光部；③用注射器吸取40 ml無(wú)菌水（無(wú)菌水量約為采樣管管腔容積的兩倍），將注射器與連接器進(jìn)行連接，按下吸引閥門，把無(wú)菌水緩慢注入管路（持續(xù)時(shí)間約為5～10 s），然后收集到樣品收集杯中（注意內(nèi)鏡末端不要接觸樣品收集杯中的液體樣本）；④拔下注射器，吸入60 ml空氣后再與連接器進(jìn)行連接，按下吸引閥門，將空氣全部注入管路，以便充分收集采樣液；⑤從包裝袋中取出采樣棒，抽出采樣環(huán)，將其頭部浸入樣液中，并輕輕敲擊采樣環(huán)柄以排出氣泡，此過程中始終確保采樣環(huán)的上領(lǐng)口與液面齊平；⑥將采樣好的采樣環(huán)慢慢插回采樣管，用力向下推壓頂端的紅色手柄使采樣環(huán)徹底插入，激活熒光反應(yīng)；⑦激活后，以45°的幅度迅速振蕩采樣棒至少5 s，以混合底部的反應(yīng)液；⑧打開3M熒光檢測(cè)儀的樣品室，將采樣棒插入其中，將蓋子按下至正好卡住，按下“選擇”鍵，數(shù)秒后屏幕會(huì)將結(jié)果以“相對(duì)光單位（Relative Light Unit，RLU）”顯示出來，讀數(shù)并記錄。

1.2.2實(shí)驗(yàn)室微生物培養(yǎng)法采樣工具包括：由昆明市疾病預(yù)防控制中心配制含相應(yīng)中和劑的液體和采樣瓶、50 ml無(wú)菌注射器、酒精燈和標(biāo)記筆。檢測(cè)過程：①點(diǎn)燃酒精燈制造無(wú)菌環(huán)境，取清洗消毒后的纖維支氣管鏡，用無(wú)菌注射器抽取50 ml含相應(yīng)中和劑的洗脫液，從活檢口注入沖洗內(nèi)鏡管路，然后將其收集于采樣瓶中（注意內(nèi)鏡末端不要接觸采樣瓶），充分混勻，將樣本瓶做好標(biāo)記后4 h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室；②取樣本液1.0 ml接種平皿，將冷至40～45℃的熔化營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基每皿傾注15～20 ml，（36±1）℃恒溫箱培養(yǎng)48 h，測(cè)定細(xì)菌總數(shù)（CFU/件）；③剩余樣本液在無(wú)菌條件下用濾膜（0.45μm）過濾濃縮后，將濾膜接種于凝固的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，置（36±1）℃溫箱培養(yǎng)48 h，測(cè)定細(xì)菌總數(shù)。由市疾控中心出具相應(yīng)的檢測(cè)結(jié)果報(bào)告。

1.3評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1ATP熒光檢測(cè)法按3M公司器械產(chǎn)品說明書推薦閾值，軟式內(nèi)鏡腔面≤200 RLU為合格。

1.3.2實(shí)驗(yàn)室微生物培養(yǎng)法依據(jù)GB15982-2012，消毒內(nèi)鏡細(xì)菌菌落數(shù)≤20 CFU/件為合格。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法結(jié)果采用SPSS 20.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

本研究利用ATP熒光檢測(cè)與濾膜法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定兩種方法檢測(cè)，共獲得樣本各522例。其中，清洗消毒后纖支鏡內(nèi)面樣本各488例，保存?zhèn)溆美w支鏡內(nèi)面樣本各25例，使用后經(jīng)床側(cè)預(yù)處理但未清洗消毒纖支鏡內(nèi)面樣本各9例。濾膜法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定：清洗消毒后488例樣本，不合格6例，保存?zhèn)溆脴颖?5例，不合格0例，總合格率98.83%；使用后經(jīng)床側(cè)預(yù)處理但未清洗消毒樣本9例，不合格6例，不合格率66.67%。ATP熒光檢測(cè)法：清洗消毒后488例樣本，不合格8例，保存?zhèn)溆脴颖?5例，不合格0例，總合格率98.44%，使用后經(jīng)床側(cè)預(yù)處理但未清洗消毒樣本9例，不合格9例，不合格率100.00%。兩種方法檢測(cè)結(jié)果差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1　兩種檢測(cè)方法不同時(shí)機(jī)檢測(cè)結(jié)果Table 1　Results of two detection methods at different times

纖支鏡清洗消毒后ATP熒光檢測(cè)不合格的樣本8個(gè)，檢測(cè)數(shù)值最高為550.00 RLU、最低為225.00 RLU，中值為296.00 RLU；濾膜法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定不合格樣本6個(gè)，均為25.00 CFU/件。使用后未清洗纖支鏡內(nèi)面沖洗樣本ATP熒光檢測(cè)不合格樣本9個(gè)，結(jié)果數(shù)值最高為6822.00 RLU，最低為430.00 RLU，中值為2 930.00 RLU；濾膜法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定不合格樣本6個(gè)，最高菌落數(shù)6 300.00 CFU/件，最低菌落數(shù)為530.00 CFU/件，菌落數(shù)中值為5 000.00 CFU/件。濾膜法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定結(jié)果有466個(gè)樣本的菌落數(shù)為0 CFU/件，ATP熒光檢測(cè)結(jié)果至少為1.00 RLU，但不超過200.00 RLU；其中有36個(gè)樣本兩種檢測(cè)方法的結(jié)果均不為零，但在允許范圍內(nèi)。從兩種檢測(cè)結(jié)果數(shù)值的四分位間距看，ATP熒光檢測(cè)結(jié)果波動(dòng)較大，微生物數(shù)量超標(biāo)的樣本ATP熒光檢測(cè)的結(jié)果顯著增高，見表2。

表2　兩種檢測(cè)方法不同狀態(tài)不合格樣本檢測(cè)結(jié)果Table 2 Test results of unqualified samples in different states of two detection methods

3　討論

有研究對(duì)清洗消毒處理不合格的內(nèi)鏡進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)后，檢出的病原體有銅綠假單胞菌、鮑氏不動(dòng)桿菌、肺炎克雷伯菌、真菌、結(jié)核桿菌等[5]。而現(xiàn)行《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》GB-15982～2012對(duì)纖維支氣管鏡的監(jiān)測(cè)僅為3個(gè)月1次，細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)所需時(shí)間為48 h，耗時(shí)長(zhǎng)，不及時(shí)，滯后性等原因，無(wú)法指導(dǎo)現(xiàn)場(chǎng)清洗消毒工作的改進(jìn)，因此，找到一種快捷、高效、準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)方法尤為重要。2016年國(guó)家衛(wèi)計(jì)委頒布并執(zhí)行的《軟式內(nèi)鏡清洗消毒技術(shù)規(guī)范》WS 507-2016推薦可采用ATP生物熒光測(cè)定等方法對(duì)內(nèi)鏡的清洗質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究結(jié)果顯示：纖維支氣管鏡清洗消毒后的腔面，濾膜法細(xì)菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)和ATP檢測(cè)合格率分別為98.83%和98.44%，與有學(xué)者報(bào)道經(jīng)規(guī)范、集中清洗消毒的纖維支氣管鏡合格率為98.75%～99.08%[6]的結(jié)果相近。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，兩種檢測(cè)方法的樣本合格率差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ATP熒光檢測(cè)可作為一種有效的快速檢測(cè)方法，對(duì)于纖維支氣管鏡清洗消毒效果的現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)具有一定的應(yīng)用價(jià)值，與其他學(xué)者研究結(jié)果一致[7]。同時(shí)，我們還從兩種檢測(cè)不合格樣本四分位間距進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)不合格樣本使用ATP檢測(cè)結(jié)果波動(dòng)較大，有學(xué)者認(rèn)為，可能是受到其他有機(jī)物或體細(xì)胞ATP的影響[8]，也可能是因?yàn)椴煌⑸锏腁TP含量不同所致[9]，但都從另一個(gè)側(cè)面說明ATP檢測(cè)靈敏度較高。當(dāng)然，ATP的檢測(cè)方法也有不足之處，例如：當(dāng)檢測(cè)結(jié)果不合格時(shí)不能甄別病原菌種類，不能鑒定該細(xì)菌的耐藥性；使用ATP檢測(cè)時(shí)，室內(nèi)溫度、樣本中的微生物量過低或過高均會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，需要根據(jù)檢測(cè)目的選擇不同靈敏度的檢測(cè)儀器[10]。此外，目前關(guān)于該檢測(cè)技術(shù)的采樣方法、閾值判斷標(biāo)準(zhǔn)等尚無(wú)權(quán)威的標(biāo)準(zhǔn)或指南，需要進(jìn)一步進(jìn)行探索。