霉菌性陰道炎患者體內(nèi)真菌分布、T淋巴細(xì)胞及相關(guān)細(xì)胞因子水平變化特點(diǎn)及意義

雷　放，宋　玲

在35～45歲的育齡期女性中，霉菌性陰道炎的發(fā)病率呈顯著的上升趨勢(shì)[1]。流行病學(xué)研究證實(shí)，霉菌性陰道炎的發(fā)病率可達(dá)272/10萬(wàn)～372/10萬(wàn)，同時(shí)在長(zhǎng)期使用抗生素的人群中，其發(fā)病率顯著增加[2]。越來(lái)越多的研究顯示，免疫細(xì)胞功能紊亂或者自身免疫因子的紊亂，是促進(jìn)霉菌性陰道炎患者病情進(jìn)展的重要因素[2]。CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞的激活，能夠誘導(dǎo)抗原提呈表位的激活，促進(jìn)自身T淋巴細(xì)胞免疫力的激活和維持，降低陰道內(nèi)病原體感染的風(fēng)險(xiǎn)；CD8+T淋巴細(xì)胞的激活，能夠直接分泌相關(guān)效應(yīng)因子，增加自然殺傷性T淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用，促進(jìn)霉菌等病原體的清除[3-4]。為了進(jìn)一步揭示不同的T淋巴細(xì)胞亞群及其分泌的細(xì)胞因子在霉菌性陰道炎中的作用，本次研究選取2017年1月—12月在我院治療的霉菌性陰道炎患者182例，探討霉菌性陰道炎患者T淋巴細(xì)胞及相關(guān)效應(yīng)因子的水平、意義，從而為臨床霉菌性陰道炎的診療和復(fù)發(fā)的預(yù)防提供參考。

1　對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 選取2017年1月—12月在成都市第二人民醫(yī)院治療的霉菌性陰道炎患者182例（觀察組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合霉菌性陰道炎診斷標(biāo)準(zhǔn)（外陰灼痛白帶量多，呈凝乳狀或豆腐渣樣，分泌物光鏡下可觀察到芽生孢子及假菌絲）；②患者知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并有免疫缺陷疾病，糖尿病，肺結(jié)核，惡性腫瘤，嚴(yán)重肝、腎疾病等；②近1個(gè)月內(nèi)使用過(guò)抗生素、糖皮質(zhì)激素者；③妊娠期或哺乳期；④合并其他病原菌感染，如淋球菌等。同時(shí)選取女性健康志愿者110例作為對(duì)照組，2組受試者一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 2組一般資料比較Table 1 Comparison of general data between 2 groups

1.2 材料 Bio-Bad全自動(dòng)酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)飛利浦公司；IL-2、IL-4和IL-10抗體試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；TNF-α、INF-γ抗體試劑盒和流式細(xì)胞抗體購(gòu)自羅氏檢測(cè)公司；FACS流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器購(gòu)自美國(guó)ABI公司。

1.3 方法

1.3.1 病原菌培養(yǎng)及檢測(cè) 用一次性毛刷采集患者的陰道分泌物，嚴(yán)格按照全國(guó)性的臨床標(biāo)本采集操作規(guī)程進(jìn)行標(biāo)本的采集和培養(yǎng)，采用南京伯塞康公司生產(chǎn)的真菌快速檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)卡由黃色變?yōu)榧t色為陽(yáng)性。

1.3.2 T淋巴細(xì)胞及細(xì)胞因子檢測(cè) 采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)IL-2、IL-4和IL-10。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)TNF-α和INF-γ；采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS 19.0軟件，計(jì)量資料采用±s表示，組間年齡、體質(zhì)量指數(shù)、T淋巴細(xì)胞、細(xì)胞因子比較用成組t檢驗(yàn)（組間方差齊），P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1 病原菌檢測(cè)結(jié)果 182例患者陰道分泌物的真菌培養(yǎng)結(jié)果顯示病原菌分布以白色念珠菌為主，占43.41%。見(jiàn)表2。

表2 真菌菌群分布Table 2 Distribution of fungal flora

2.2 2組陰道分泌物T淋巴細(xì)胞比較 觀察組陰道分泌物中CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞水平明顯低于對(duì)照組（P均＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 2組陰道分泌物T淋巴細(xì)胞比較（%）Table 3 Comparison of T lymphocytes in vaginal secretion of 2 groups(%)

2.3 2組陰道分泌物細(xì)胞因子比較 觀察組陰道分泌物IL-2、TNF-α和INF-γ明顯低于對(duì)照組（P均＜0.05），而IL-4和IL-10明顯高于對(duì)照組（P均＜0.05）。見(jiàn)表4。

2.4 觀察組不同患者T淋巴細(xì)胞及細(xì)胞因子比較 觀察組中有26例患者為復(fù)雜性霉菌性陰道炎（反復(fù)發(fā)作）。復(fù)雜性霉菌性陰道炎患者陰道分泌物CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明顯低于普通霉菌性陰道炎患者（P均＜0.05），而IL-4和IL-10明顯高于普通霉菌性陰道炎患者（P均＜0.05）。見(jiàn)表5。

3　討　論

長(zhǎng)期使用抗生素、不潔性生活、自身免疫力下降等，均能夠?qū)е旅咕躁幍姥椎陌l(fā)生。特別是自身免疫力的改變，能夠增加霉菌感染的機(jī)會(huì)，降低陰道對(duì)于霉菌的清除能力[5]。霉菌性陰道炎的長(zhǎng)期進(jìn)展，能夠增加宮頸病變的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致繼發(fā)性的人乳頭瘤狀病毒感染風(fēng)險(xiǎn)的增加[6-8]。近年來(lái)越來(lái)越多的隨訪研究顯示，霉菌性陰道炎患者局部陰道內(nèi)的免疫細(xì)胞或者免疫因子的改變是導(dǎo)致患者治療敏感性下降及治療后復(fù)發(fā)的重要因素。免疫細(xì)胞的功能紊亂，能夠使霉菌對(duì)于陰道黏膜屏障的突破作用的增強(qiáng)，并增加其過(guò)度繁殖引起的陰道內(nèi)菌群紊亂的發(fā)生率[9]。

本次研究中通過(guò)對(duì)陰道分泌物的培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，不同類(lèi)型的真菌感染均能夠促進(jìn)霉菌性陰道炎的發(fā)生，其中以白色念珠菌的感染比例最高。臨床上對(duì)于霉菌性陰道炎患者，應(yīng)早期使用針對(duì)白色念珠菌較為敏感的氟康唑或者咪康唑等抗真菌藥物；對(duì)于長(zhǎng)期使用抗真菌藥物后病情反復(fù)，或者抗真菌治療效果不佳時(shí)，可以考慮進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和藥物敏感試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行抗真菌藥物的調(diào)整。

同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn)，霉菌性陰道炎患者陰道分泌物中，CD3+、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞百分比均明顯減少。CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞的下降提示陰道內(nèi)環(huán)境對(duì)于霉菌等病原體的抗原提呈作用不足，失去了其誘導(dǎo)下游T淋巴細(xì)胞免疫效應(yīng)因子激活的能力。而CD8+T淋巴細(xì)胞的下降則影響自然殺傷性T淋巴細(xì)胞或者巨噬細(xì)胞的活性，導(dǎo)致其抵抗外來(lái)病原體或者吞噬殺傷霉菌能力的下降。龔婭婷等[9]報(bào)道了在霉菌性陰道炎患者中，陰道分泌物中的CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞可平均下降20%以上，同時(shí)霉菌性陰道炎患者的病程越長(zhǎng)，陰道炎癥狀表現(xiàn)越為嚴(yán)重，CD3+、CD4+T淋巴細(xì)胞的下降越為明顯。但須要注意的是，部分研究者認(rèn)為CD8+T淋巴細(xì)胞百分比在霉菌性陰道炎患者中可顯著的上升，與本次研究存在一定的差異。這主要由于霉菌性陰道炎患者既往可能有不同的治療病史，同時(shí)與相關(guān)研究T淋巴細(xì)胞的檢測(cè)時(shí)機(jī)的不同等有關(guān)。IL-2和IFN-γ是Th1淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，其能夠穩(wěn)定T淋巴細(xì)胞的功能，降低因?yàn)镃D4+T淋巴細(xì)胞功能過(guò)度活化導(dǎo)致的免疫性損傷[10-11]。IL-4、IL-10是Th2淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，IL-4、IL-10能夠直接誘導(dǎo)下游TNF的激活，提高對(duì)病原體的吞噬能力[12]。穩(wěn)定的Th1/Th2免疫功能的平衡對(duì)于提高患者的抵抗力，降低感染的風(fēng)險(xiǎn)均具有重要的價(jià)值[13-14]。本研究中IL-2和INF-γ的表達(dá)濃度明顯下降，而IL-4和IL-10表達(dá)濃度明顯上升，提示了Th1/Th2淋巴細(xì)胞免疫平衡的右移和紊亂，進(jìn)一步提示了T淋巴細(xì)胞功能紊亂與霉菌性陰道炎的關(guān)系。復(fù)雜性霉菌性陰道炎患者陰道分泌物CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞以及IL-2、TNF-α和INF-γ水平明顯下降，而IL-4和IL-10水平明顯的上升，提示了在復(fù)雜性霉菌性陰道炎患者中，相關(guān)淋巴細(xì)胞免疫紊亂的表現(xiàn)更為明顯，這也表明淋巴細(xì)胞免疫功能的紊亂是影響陰道炎患者病情復(fù)發(fā)的重要因素[15]。

表4 2組陰道分泌物細(xì)胞因子比較（pg/ml）Table 4 Comparison of cytokines in vaginal secretion of 2 groups(pg/ml)

表5 觀察組不同患者T淋巴細(xì)胞及細(xì)胞因子比較Table 5 Comparison of T lymphocytes and cytokines in different patients of the observation group