超臨界流體色譜技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用研究進(jìn)展

張?jiān)￠Z加慶　劉敏　周偉娥　吳文杰　劉佳　李國輝

中圖分類號(hào) R275.9 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2018）02-0283-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.02.33

摘 要 目的：為更好地促進(jìn)超臨界流體色譜（SFC）技術(shù)在藥物分析工作中的應(yīng)用提供參考。方法：以“超臨界流體色譜”“SFC”“合相色譜”“UPC”“中藥”“Supercritical fluid chromatography”“UltraPerformance convergence chromatography”等為關(guān)鍵詞，組合查詢?cè)谥袊W(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)庫、維普數(shù)據(jù)庫、Web of Science等數(shù)據(jù)庫中收錄的2012年1月-2017年6月發(fā)表的相關(guān)研究文獻(xiàn)，進(jìn)行歸納和總結(jié)。結(jié)果與結(jié)論：共檢索到相關(guān)研究文獻(xiàn)315篇，其中有效文獻(xiàn)38篇。SFC技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離主要原理是根據(jù)待測物在固定相和流動(dòng)相兩相中的分配系數(shù)不同，繼而實(shí)現(xiàn)對(duì)待測物的先后洗脫。SFC技術(shù)在手性藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用主要涉及化學(xué)藥手性成分拆分和中藥手性成分拆分兩個(gè)方面；在非手性藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用主要涉及天然產(chǎn)物分離及制備、代謝組學(xué)研究、維生素分離及測定和指紋圖譜研究等方面。具有快速、高效、靈敏、環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)的SFC及其聯(lián)用技術(shù)給藥物成分的定性與定量分析提供了一條新的思路。

關(guān)鍵詞 超臨界流體色譜；藥物分析；手性藥物；非手性藥物；研究進(jìn)展

超臨界流體色譜（Supercritical fluid chromatography，SFC）是指以超臨界流體為流動(dòng)相的一種色譜類型。考慮到超臨界流體兼具液體的高密度和氣體的低黏度，在分析化學(xué)領(lǐng)域，其可作為氣相色譜（Gas chromatography，GC）和高效液相色譜（High performance liquid chromatography，HPLC）的有力補(bǔ)充，應(yīng)用于多種不同種類化合物的分離測定。

SFC最早于20世紀(jì)60年代被分析化學(xué)工作者提出[1]。經(jīng)過近20年的緩慢發(fā)展，空心毛細(xì)管柱式SFC于20世紀(jì)80年代早期被成功開發(fā)[1]，其出現(xiàn)加速了SFC技術(shù)的發(fā)展。隨后，新型填充柱式SFC也應(yīng)運(yùn)而生，進(jìn)一步加速了SFC技術(shù)在應(yīng)用領(lǐng)域的發(fā)展。至21世紀(jì)初期，許多針對(duì)SFC技術(shù)在不同領(lǐng)域應(yīng)用的研究文章相繼發(fā)表[2-3]。2012年3月，美國Waters公司推出了新型商品化的超臨界流體色譜系統(tǒng)——超高效合相色譜（UltraPerformance convergence chromatography，UPC2）系統(tǒng)，同時(shí)，基于亞2 μm粒徑填料的色譜柱也被開發(fā)出來[4]。自此，SFC技術(shù)的應(yīng)用得到飛速發(fā)展，且在實(shí)踐中成功與蒸發(fā)光散射檢測器、紅外檢測器、熒光檢測器等多種檢測器聯(lián)用[5-6]。其中，SFC與質(zhì)譜（MS）聯(lián)用具有靈敏度高、綠色環(huán)保等優(yōu)勢，在分析化學(xué)領(lǐng)域引起了極大的關(guān)注[7-8]。目前，SFC技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域，如食品安全領(lǐng)域、環(huán)境分析領(lǐng)域、臨床及生物樣本分析領(lǐng)域[9-10]，而在藥品及制劑質(zhì)量控制與分析領(lǐng)域亦得到了廣泛的應(yīng)用，為推動(dòng)該領(lǐng)域的技術(shù)進(jìn)步作出了貢獻(xiàn)[11-12]。本研究中，筆者以“超臨界流體色譜”“SFC”“合相色譜”“UPC”“中藥”“Supercritical fluid chromatography”“UltraPerformance convergence chromatography”等為關(guān)鍵詞，組合查詢?cè)谥袊W(wǎng)、萬方數(shù)據(jù)庫、維普數(shù)據(jù)庫、Web of Science等數(shù)據(jù)庫中收錄的2012年1月-2017年6月發(fā)表的相關(guān)研究文獻(xiàn)（共檢索到相關(guān)研究文獻(xiàn)315篇，其中有效文獻(xiàn)38篇），進(jìn)行歸納和總結(jié)，以期為更好地促進(jìn)SFC技術(shù)在藥物分析工作中的應(yīng)用提供參考。

1 SFC基本原理及特點(diǎn)

SFC對(duì)待測物實(shí)現(xiàn)分離主要原理是根據(jù)待測物在固定相和流動(dòng)相兩相中的分配系數(shù)不同，繼而實(shí)現(xiàn)對(duì)待測物的先后洗脫。早期SFC系統(tǒng)由于設(shè)備很難控制超臨界流體壓力，常導(dǎo)致色譜分離性能不穩(wěn)定，限制了該技術(shù)的推廣和應(yīng)用[13]。近些年來，隨著流體傳輸設(shè)計(jì)、溫度和壓力控制等技術(shù)的創(chuàng)新，SFC系統(tǒng)壓力得以精準(zhǔn)控制，加之超臨界流體具有擴(kuò)散和傳質(zhì)速率快、黏度低的特點(diǎn)，可彌補(bǔ)GC和HPLC系統(tǒng)在分析功能上的不足。

不同于傳統(tǒng)的GC和HPLC，SFC流動(dòng)相是一種介于氣體和液體之間的超臨界流體[13]，兼有液體的高密度和氣體的低黏度優(yōu)勢。很多物質(zhì)均已被證明能夠達(dá)到超臨界流體狀態(tài)，目前，已有超過1 000種物質(zhì)被確定了超臨界參數(shù)，常見的包括CO2、CCl2F2、N2O等[14]。由于SFC中流動(dòng)相的使用量很小，早期很多物質(zhì)均被采用作為SFC的流動(dòng)相，甚至一些有毒、貴重的流體。但隨著新型設(shè)備被成功開發(fā)，絕大多數(shù)流體現(xiàn)已很少采用，而考慮到CO2無毒無害、易于獲得且達(dá)到超臨界所需溫度和壓力條件較容易實(shí)現(xiàn)，目前絕大多數(shù)情況下均采用其作為SFC的流動(dòng)相。既往SFC多用于非極性或弱極性物質(zhì)的測定，主要考慮到超臨界CO2流體的極性較低。近年來通過將甲醇等極性試劑加入CO2中，以增加超臨界流動(dòng)相的極性，從而增加了SFC對(duì)極性物質(zhì)的溶解和洗脫能力，使其應(yīng)用范圍大大擴(kuò)展。

同時(shí)，填充柱的出現(xiàn)也很大程度推動(dòng)了SFC的發(fā)展。相比HPLC流動(dòng)相為液體，SFC所用超臨界流體具有高擴(kuò)散性和低黏性的優(yōu)勢，因此分離速度顯著加快；并且，與液體流動(dòng)相密度受溫度和壓力影響較小不同，超臨界流體密度隨溫度和壓力的變化會(huì)出現(xiàn)較大的變化，導(dǎo)致流動(dòng)相的溶劑化能力出現(xiàn)較大程度的變化。鑒于此，除了可通過改變流動(dòng)相種類以及調(diào)整添加劑的使用量對(duì)待測化合物的保留情況進(jìn)行調(diào)節(jié)以外，還可以通過調(diào)整溫度、壓力（通過控制系統(tǒng)內(nèi)背壓實(shí)現(xiàn)）等影響流動(dòng)相密度的因素較輕松地對(duì)待測化合物的保留情況進(jìn)行調(diào)節(jié)。

2 SFC技術(shù)在手性藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用

手性物質(zhì)在自然界中廣泛存在[15]，目前臨床使用的藥物中約有50%為手性藥物。關(guān)于手性對(duì)藥物藥效的影響目前已有較多研究，手性藥物中一對(duì)對(duì)映異構(gòu)體不僅在臨床療效方面有較大差異，而且會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重程度不一的不良反應(yīng)，部分手性異構(gòu)體不良反應(yīng)甚至完全不同[16]。與此同時(shí)，在進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究時(shí)，手性藥物在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)可呈現(xiàn)完全不同的特點(diǎn)。鑒于此，對(duì)手性藥物進(jìn)行拆分測定，不僅對(duì)藥物的質(zhì)量評(píng)定、治療效果和不良反應(yīng)預(yù)測有重要意義，而且對(duì)于新藥開發(fā)也能發(fā)揮重要的作用[17]。

目前，SFC技術(shù)在手性藥物拆分方面已取得了較大進(jìn)展，在化學(xué)藥對(duì)映異構(gòu)體拆分、天然產(chǎn)物手性分析以及藥物代謝組學(xué)研究和藥物指紋圖譜研究等方面，均獲得了較廣泛的應(yīng)用。在手性藥物拆分時(shí)，SFC流動(dòng)相主要采用CO2，而固定相則種類較多，早期其手性固定相填料主要參考GC和HPLC手性固定相，此后一些新型的手性固定相則相繼問世。據(jù)報(bào)道，目前使用的SFC手性固定相已逾1 000種，常見的有多聚糖衍生物類手性固定相、環(huán)糊精類手性固定相、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素類手性固定相、Pirkle型手性固定相等[12]。

2.1 SFC技術(shù)在化學(xué)藥手性成分拆分中的應(yīng)用

既往在進(jìn)行化學(xué)藥手性成分拆分的時(shí)候較多考慮傳統(tǒng)HPLC方法，但隨著SFC技術(shù)發(fā)展，研究者發(fā)現(xiàn)相較傳統(tǒng)HPLC方法，SFC方法在分離手性藥物的時(shí)候具有很大優(yōu)勢：對(duì)于部分手性藥物SFC不僅分離效能比HPLC更高，而且能顯著縮短分離時(shí)間。因此，目前很多研究者在進(jìn)行手性藥物拆分時(shí)均會(huì)首先考慮進(jìn)行SFC方法的嘗試。

戴濤等[18]采用SFC技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)齊留通對(duì)映異構(gòu)體的有效分離，試驗(yàn)中對(duì)比了5款不同類型色譜柱，最終選定Chiral-pak? AD H色譜柱作為分離柱；同時(shí)在該柱上考察了改性劑的種類、濃度、溫度及背壓等不同因素對(duì)分離效果的影響，最終選定改性劑為18%異丙醇，背壓為140 bar（1 bar=100 kPa），溫度為303 K。在該條件下，可實(shí)現(xiàn)對(duì)齊留通對(duì)映異構(gòu)體最佳分離，分離度高達(dá)11.5。金薇等[19]建立了拆分左乙拉西坦及其右旋異構(gòu)體的SFC方法，分別考察了改性劑、背壓、柱溫和流速等因素對(duì)分離效果的影響，采用Chiralcel OD色譜柱，12%無水乙醇的CO2為改性劑，流速為2.0 mL/min，背壓為15 MPa，柱溫為40 ℃，使待測化合物得到最好的分離。金薇等[20]還建立了對(duì)依折麥布及其R-對(duì)映體的SFC手性拆分方法，同樣采用Chiralcel OD色譜柱，以超臨界CO2 -含0.1%三氟乙酸的0.1%三乙胺的甲醇（90 ∶ 10，V/V）為流動(dòng)相，背壓為15 MPa，柱溫為35 ℃，流速為3.0 mL/min分離依折麥布及其R-對(duì)映體，取得了較好的拆分效果。羅英豪[21]采用SFC方法對(duì)萘普生對(duì)映體進(jìn)行拆分，以萘普生對(duì)映體的分離時(shí)間、容量因子、分離度為考察指標(biāo)，優(yōu)選手性色譜柱、流動(dòng)相中極性添加劑種類及占比、背壓和柱溫等條件，最終選用Chiralpak? AD-H手性色譜柱，20%異丙醇為改性劑，背壓170 bar，柱溫20 ℃。在此條件下萘普生對(duì)映體分離度高達(dá)4.31，分離因子為1.90，且精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性等相關(guān)指標(biāo)均滿足檢測需求。楊杰鋒等[22]采用SFC方法分離和測定了碘帕醇的對(duì)映異構(gòu)體的含量，選用Chiralpak? OD-H手性色譜柱，以CO2-甲醇（89 ∶ 11，V/V）為流動(dòng)相，結(jié)果R-碘帕醇與S-碘帕醇分離度良好，該法對(duì)R-碘帕醇質(zhì)量濃度在0.2～1.2 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度、回收率等方法學(xué)參數(shù)均滿足檢測需求。研究者還對(duì)比了現(xiàn)行R-碘帕醇含量限制的標(biāo)準(zhǔn)，提出可考慮將直接定量方法引入對(duì)R-碘帕醇含量的控制。

SFC方法相比HPLC方法在拆分手性異構(gòu)體時(shí)具有較多優(yōu)勢，不僅對(duì)單對(duì)手性化合物分離效能高、分析時(shí)間短，對(duì)于多對(duì)手性化合物的同時(shí)分離也能取得較為滿意的效果。庾莉菊等[23]建立了同時(shí)測定鹽酸蘭地洛爾中立體異構(gòu)體含量的SFC方法。鹽酸蘭地洛爾具有2個(gè)手性中心，除臨床常用的S，S-異構(gòu)體外，還有3個(gè)立體異構(gòu)體。該法選用Chiralpak? IF手性色譜柱，以CO2為流動(dòng)相，甲醇-正丁醇-乙腈（1 ∶ 1 ∶ 1，V/V/V）+0.5%氨水為助溶劑，梯度洗脫。在該色譜條件下，鹽酸蘭地洛爾的R，R-異構(gòu)體、R，S-異構(gòu)體和S，R-異構(gòu)體可以達(dá)到基線分離，方法檢測限分別為0.3、0.4和0.3 mg/L，能滿足鹽酸蘭地洛爾樣品中3個(gè)立體異構(gòu)體檢測的相關(guān)要求。李冬艷等[24]采用6種多糖類手性固定相實(shí)現(xiàn)了對(duì)11種手性化合物的分離，試驗(yàn)以鍵合型多糖系列柱i-chiral 6：ChiralpakIA、IB、IC、ID、IE、IF分別為手性固定相，在SFC模式下對(duì)11種手性化合物進(jìn)行手性分離，同時(shí)探討了改性劑種類、濃度、堿性添加劑以及特殊改性劑對(duì)手性分離的影響。結(jié)果，6種手性柱對(duì)11種化合物的識(shí)別能力如下：IA可以識(shí)別其中的10個(gè)，IB可以識(shí)別5個(gè)，IC可以識(shí)別7個(gè)，ID可以識(shí)別9個(gè)，IE可以識(shí)別8個(gè)，IF可以識(shí)別8個(gè)。試驗(yàn)結(jié)果表明i-chiral 6系列手性柱手性識(shí)別能力具有一定的互補(bǔ)性，對(duì)不同手性化合物的分離提供了更多的選擇。Huang J等[25]應(yīng)用多糖手性固定相成功分離了6對(duì)苯基哌嗪衍生物對(duì)映異構(gòu)體，色譜柱選用Chiralpak? IA CSP柱，改性劑選用異丙醇，優(yōu)化了柱溫、背壓等條件后，6對(duì)化合物均能在10 min內(nèi)達(dá)到基線分離。

2.2 SFC技術(shù)在中藥手性成分拆分中的應(yīng)用

臨床常用的中藥中很多成分都存在手性異構(gòu)體，但既往中藥中手性成分拆分及相關(guān)研究并未得到足夠重視。考慮原因可能與中藥本身成分復(fù)雜，在進(jìn)行藥物分離時(shí)已然面對(duì)著較大困難，若進(jìn)一步進(jìn)行手性成分拆分難度更大；與此同時(shí)，手性藥物拆分技術(shù)的不足也桎梏著中藥手性成分分離的發(fā)展。伴隨著對(duì)中藥手性成分認(rèn)識(shí)的提高和手性成分拆分技術(shù)的進(jìn)步，目前中藥手性成分拆分研究方面已取得了較大發(fā)展。

劉佩等[26]建立了一種新型丹參素異丙酯和冰片酯的合成途徑并采用SFC方法對(duì)兩者的對(duì)映異構(gòu)體進(jìn)行了拆分研究。所得混旋丹參素異丙酯的手性拆分SFC分離條件為：Chiralpak? AD-H手性柱，乙醇-水（40 ∶ 60，V/V）為改性劑，溫度為35 ℃，流速為125 mL/min。在該條件下混旋丹參素異丙酯拆分后收率高達(dá)93%，10 g混旋物約可得到4.8 g S-丹參素異丙酯（光學(xué)純度為99.6%）和4.5 g R-丹參素異丙酯（光學(xué)純度為99.5%）。所得混旋丹參素冰片酯的手性拆分SFC分離條件為：Chiralpak? AD-H手性柱，乙醇-水（20 ∶ 80，V/V）為改性劑，溫度為35 ℃，流速為130 mL/min。在該條件下混旋丹參素冰片酯拆分后收率達(dá)90%，15 g混旋物分別得到6.9 g S-丹參素冰片酯（光學(xué)純度為99.5%）和6.6 g R-丹參素冰片酯（光學(xué)純度為99.5%）。陳海等[27]采用新型SFC成功拆分了反式-二苯乙烯氧化物（TSO）、安息香手性物質(zhì)，兩種手性異構(gòu)體分離度均達(dá)到3以上，實(shí)現(xiàn)了較好的分離。試驗(yàn)中考察了不同因素對(duì)化合物分離效果的影響，結(jié)果表明，有機(jī)改性劑種類及濃度對(duì)分離效果均有影響，洗脫能力隨著改性劑濃度的增大而增大，分離度隨著改性劑濃度的增大而增大。

3 SFC技術(shù)在非手性藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用

對(duì)于少數(shù)非手性藥物的分離和定量，目前傳統(tǒng)的GC或者HPLC方法還存在較多困難，如分離效能偏低、靈敏度不高、有機(jī)試劑消耗量大等，而采用SFC方法可有效提高分離效能和靈敏度，減小有機(jī)試劑消耗量。而對(duì)于大多數(shù)非手性藥物而言采用GC或者HPLC方法即可進(jìn)行分離和分析，但相比較采用SFC方法可大大縮短分離時(shí)間；同時(shí)SFC方法所用改性劑為CO2，更為綠色環(huán)保，符合分析科學(xué)發(fā)展的理念。

3.1 SFC技術(shù)在天然產(chǎn)物分離及制備中的應(yīng)用

近年來，伴隨著天然產(chǎn)物功能性成分的市場需求量逐年提升，對(duì)于天然產(chǎn)物中活性成分和有效成分的研究越來越多[28]。因此天然產(chǎn)物中相關(guān)成分分離及制備技術(shù)取得了較大進(jìn)展，尤其是隨著SFC技術(shù)的飛速發(fā)展，制備型和半制備型SFC技術(shù)也應(yīng)運(yùn)而生，并在天然產(chǎn)物相關(guān)成分分離及制備中得到了較廣泛的應(yīng)用[29]。

莫緒飛等[30]將SFC技術(shù)用于Z-藁本內(nèi)酯的制備純化，采用ZorBax SB-C18色譜柱，分別優(yōu)化了改性劑、流速、壓力、溫度等，從而確定了最適宜的色譜提純條件：CO2流速為10 g/min，柱溫為313.15 K，背壓為14 MPa。在此工藝條件下提純制備Z-藁本內(nèi)酯單體，得到的產(chǎn)品純度為98.5%。朱玲玲等[31]對(duì)SFC技術(shù)在天然產(chǎn)物分離分析中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行了綜述，指出該技術(shù)在維生素類、脂肪酸和甘油酯類、生物堿類、黃酮類、苯丙素類、萜類化合物等天然產(chǎn)物分離方面均具有很大的優(yōu)勢，同時(shí)還能低成本、高效率地獲得高純度的單一化合物，大大提高了工作效率。徐永威等[32]綜述了UPC2技術(shù)在中藥研究和質(zhì)量控制中的應(yīng)用，指出UPC2技術(shù)在分析揮發(fā)性成分、熱敏性成分和天然動(dòng)植物油等方面可作為GC技術(shù)的有效互補(bǔ)技術(shù)，在分析天然產(chǎn)物中大極性產(chǎn)物、小極性產(chǎn)物及手性異構(gòu)體方面可以與HPLC技術(shù)有效互補(bǔ)；且此技術(shù)利用選擇性的差異改善了現(xiàn)有HPLC分析方法。同時(shí)該綜述還指出，UPC2技術(shù)可以與HPLC技術(shù)結(jié)合，構(gòu)建2D或3D分析分離平臺(tái)，從而使分離效能進(jìn)一步提高。

不僅制備型SFC技術(shù)在天然產(chǎn)物分析中取得了較大的應(yīng)用進(jìn)展，分析型SFC技術(shù)在天然產(chǎn)物分離中的應(yīng)用也得到了較廣泛的關(guān)注。鄧亮等[33]建立了同時(shí)測定厚樸中厚樸酚及和厚樸酚成分的SFC方法，厚樸樣品經(jīng)微波提取后直接上機(jī)檢測，選用Kramasil色譜柱，甲醇為改性劑，背壓為200 bar，柱溫為50 ℃。在此條件下，該法的檢測限達(dá)到3～4 μg/mL，且對(duì)目標(biāo)化合物分離良好，滿足測定需求。李振宇等[34]建立了一種對(duì)吳茱萸中吲哚類生物堿的SFC快速分析方法，并比較了不同色譜柱、進(jìn)樣體積、改性劑、添加劑、溫度和背壓對(duì)保留行為的影響，指出了進(jìn)樣體積對(duì)峰形影響顯著，降低溫度和升高背壓會(huì)使保留時(shí)間減??；優(yōu)化后采用UPC2 BEH色譜柱，甲醇為改性劑，柱溫為35 ℃，背壓為2.07×107 Pa。在該條件下，全部化合物在15 min內(nèi)完成分離，滿足快速檢測的需求。王波等[35]基于SFC方法快速測定了黃芪中5種黃酮類化合物，選用UPC2 CSH 柱，甲醇溶液（含0.2% H3PO4）為改性劑，柱溫為40 ℃，僅需15 min即可實(shí)現(xiàn)5種黃酮類化合物的基線分離，相比傳統(tǒng)的HPLC方法，分析速度提高3倍以上。王波等[36]還采用UPC2系統(tǒng)快速測定了中成藥及原料藥中的香豆素，樣品經(jīng)溶劑誘導(dǎo)相變萃取后上機(jī)檢測，在選定色譜條件下，分析時(shí)間僅為常規(guī)超高效液相色譜（UPLC）系統(tǒng)所需分析時(shí)間的1/4，同時(shí)檢出限、定量限均滿足檢測需求。

3.2 SFC技術(shù)在代謝組學(xué)研究中的應(yīng)用

代謝組學(xué)是以組群指標(biāo)分析為基礎(chǔ)，以高通量檢測和數(shù)據(jù)處理為手段，以信息建模與系統(tǒng)整合為目標(biāo)的系統(tǒng)生物學(xué)的一個(gè)分支，在臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域具有較廣闊的應(yīng)用前景。既往在進(jìn)行代謝組學(xué)研究時(shí)，較多采用HPLC或HPLC-MS技術(shù)，但隨著SFC技術(shù)的發(fā)展，其應(yīng)用于代謝組學(xué)的研究也逐漸被報(bào)道，且其譜圖一定程度上能與HPLC譜圖形成互補(bǔ)，共同促進(jìn)一些新生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)。

張淑麗等[37]利用UPC2-Q/TOF-MS技術(shù)對(duì)果糖誘導(dǎo)高尿酸血癥大鼠血清脂質(zhì)代謝組學(xué)進(jìn)行了研究，分別通過該技術(shù)分析高尿酸血癥大鼠和正常大鼠血清代謝譜圖，采用多元統(tǒng)計(jì)分析方法比較兩組的代謝譜圖差異，從而篩選出差異性代謝物。結(jié)果顯示，兩組大鼠代謝譜圖存在明顯差異，并篩選出11個(gè)差異代謝物，利用精確質(zhì)量數(shù)結(jié)合二級(jí)質(zhì)譜圖初步確定了花生四烯酸、棕櫚酸、油酸、亞油酸等8種潛在生物標(biāo)記物。朱健等[38]利用UPC2方法研究了異甜菊醇鈉在大鼠小腸各腸段的吸收特征，試驗(yàn)建立的方法所用分析時(shí)間為7 min，可顯著節(jié)省時(shí)間成本，同時(shí)專屬性較高，靈敏度滿足檢測需求。

3.3 SFC技術(shù)在維生素分離及測定中的應(yīng)用

近年來，采用SFC技術(shù)對(duì)維生素類化合物進(jìn)行測定的方法報(bào)道較多，SFC方法相較于傳統(tǒng)HPLC方法具有分離時(shí)間短、分離效能高等優(yōu)勢。竹弘等[39]建立了同時(shí)測定復(fù)合維生素片中4種不同水溶性維生素的SFC方法，樣品經(jīng)碾碎、超聲提取后上機(jī)檢測，并對(duì)4種不同色譜柱、不同提取溶劑及改性劑的種類和濃度等影響因素進(jìn)行了考察，最終選擇Kromasil 60-5 CN色譜柱，0.1%甲醇為改性劑，實(shí)現(xiàn)了對(duì)4種水溶性維生素的良好分離及測定。該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高，較好地滿足了檢測需求。張春蘭等[40]則建立了測定維生素復(fù)方制劑中3種水溶性維生素的SFC方法，選用Cyano填充柱，以含有少量二乙胺的甲醇為改性劑。優(yōu)化后的SFC方法不僅分離效能高，而且分析速度快，樣品分析在5 min內(nèi)即可完成，專屬性、重復(fù)性和線性關(guān)系較好，檢測靈敏度滿足需求。周圍等[41]亦建立了同時(shí)測定11種脂溶性維生素及衍生物的UPC2方法，最終選擇Waters Acquity UPC2 HSS C18 SB為色譜柱，乙腈作為助溶劑，動(dòng)態(tài)背壓為1 900 psi（1 psi=6.895 kPa），柱溫為50 ℃。所建立方法的檢測限在1.5～2.0 mg/L之間，線性范圍分別為3～300 mg/L，加樣回收率范圍為97.31%～98.76%，可以滿足復(fù)雜基質(zhì)中11種脂溶性維生素及其衍生物的檢測要求。劉倩倩等[42]采用SFC方法直接測定橘子、鮮棗、干棗及飲料中的維生素C含量，分別對(duì)色譜柱等因素進(jìn)行考察優(yōu)化，最終選定Waters CSH Fluoro-Phenyl（3.0 mm×100 mm，1.7 μm）為色譜柱，含有0.05% H3PO4的甲醇為改性劑，方法檢測限達(dá)到1.5 mg/kg。該法具有高效、檢測速度快、靈敏度高、重復(fù)性好、試驗(yàn)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

3.4 SFC技術(shù)在指紋圖譜研究中的應(yīng)用

SFC技術(shù)因其不同于GC和HPLC技術(shù)分離機(jī)制的原因，亦可應(yīng)用于藥物指紋圖譜研究領(lǐng)域，并與GC和HPLC圖譜形成互補(bǔ)，對(duì)更多有效成分進(jìn)行發(fā)掘。朱瑞娟等[43]采用SFC方法建立了補(bǔ)腎健腦顆粒及其組成藥材的指紋圖譜，歸屬分析了補(bǔ)腎健腦顆粒指紋圖譜中的主要色譜峰，并建立β-蛻皮甾酮和松果菊苷的含量測定方法。該方法能將β-蛻皮甾酮和松果菊苷有效分離，與HPLC和UPLC方法相比，更簡便、快速，且分離度高、重復(fù)性好。

4 結(jié)語

通過對(duì)SFC技術(shù)在手性和非手性藥物分析中的應(yīng)用進(jìn)行歸納和總結(jié)，可以發(fā)現(xiàn)SFC因其獨(dú)有的以下優(yōu)勢在藥物分析中將會(huì)占據(jù)越來越重要的地位：（1）SFC技術(shù)對(duì)于手性成分的分析相較于HPLC-MS技術(shù)等具有較大優(yōu)勢，故在進(jìn)行手性化合物拆分時(shí)可考慮作為首選；（2）SFC技術(shù)環(huán)保、綠色，且分離效能高，對(duì)于部分藥物分離時(shí)間顯著縮短，可作為GC和HPLC技術(shù)的有效補(bǔ)充應(yīng)用于更多藥物的常規(guī)分離分析；（3）伴隨著UPC2系統(tǒng)的開發(fā)成功，SFC技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域的應(yīng)用范圍顯著拓展，且隨著SFC技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)的飛速發(fā)展，今后SFC-MS聯(lián)用技術(shù)在藥物分析領(lǐng)域必將取得更大的研究進(jìn)展。然而，SFC技術(shù)在藥物分析中仍有不足，如對(duì)于強(qiáng)極性化合物的洗脫仍不理想，相關(guān)色譜方法開發(fā)仍較少，不能完全滿足各種檢測需求。

綜上所述，隨著SFC技術(shù)的發(fā)展，越來越多的學(xué)者專家已認(rèn)可SFC技術(shù)在手性藥物拆分和高通量藥物分離分析中的價(jià)值，快速、高效、靈敏、環(huán)保的SFC及其聯(lián)用技術(shù)給藥物成分的定性與定量分析提供了一條新的思路。相信隨著SFC技術(shù)難題一個(gè)個(gè)的被攻克，將會(huì)有越來越多的關(guān)于利用SFC技術(shù)進(jìn)行藥物分離分析的研究被發(fā)表。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 陳青，劉志敏. 超臨界流體色譜的研究進(jìn)展[J]. 分析化學(xué)，2004，32（8）：1104-1109.

[ 2 ] 王少芬，魏建謨. 超臨界流體色譜在金屬絡(luò)合物和金屬有機(jī)化合物中的分析應(yīng)用[J].分析化學(xué)，2001，29（6）：725-730.

[ 3 ] 郭亞東. 超臨界流體色譜同時(shí)測定維生素B2、B3和煙酰胺[J].色譜，2003，21（6）：603-605.

[ 4 ] 袁野. 沃特世超高效合相色譜再次重新定義色譜分離科學(xué)[J].分析化學(xué)，2012， 40 （5） ：674.

[ 5 ] TAKAHASHI K，MATSUYAMA S， SAITO T， et al. Calibration of an evaporative light-scattering detector as a mass detector for supercritical fluid chromatography by using uniform poly（ethylene glycol） oligomers[J]. J Chromatogr A， 2008， 1193（1/2）：146-50.

[ 6 ] LECOEUR M，DECAUDIN B，GUILLOTIN Y，et al. Com- parison of high-performance liquid chromatography and supercritical fluid chromatography using evaporative light scattering detection for the determination of plasticizers in medical devices[J]. J Chromatogr A，2015，1417：104-115.

[ 7 ] 朱文星，楊銳，徐永威，等. 超高效合相色譜串聯(lián)四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜定性分析中/長鏈結(jié)構(gòu)甘油三酯組成[J]. 中國藥學(xué)雜志，2016，51（15）：1324-1329.

[ 8 ] WOLRAB D，F(xiàn)R?HAUF P，GERNER C. Direct coupling of supercritical fluid chromatography with tandem mass spectrometry for the analysis of amino acids and related compounds： comparing electrospray ionization and atmospheric pressure chemical ionization[J]. Anal Chim Acta， 2017，981：106-115.

[ 9 ] SUZUKI M， NISHIUMI S， KOBAYASHI T， et al. Use of on-line supercritical fluid extraction-supercritical fluid chromatography/tandem mass spectrometry to analyze disease biomarkers in dried serum spots compared with serum analysis using liquid chromatography/tandem mass spectrometry[J]. Rapid Commun Mass Spectrom， 2017， 31（10）：886-894.

[10] FUJITO Y，HAYAKAWA Y，IZUMI Y， et al. Importance of optimizing chromatographic conditions and mass spectrometric parameters for supercritical fluid chromatography/mass spectrometry[J]. J Chromatogr A，2017，1508：138-147.

[11] 趙娜，雷勇勝，蔣慶峰，等. 超臨界流體色譜法在藥物分析中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代儀器，2012，18（5）：7-10.

[12] 夏爽，袁圓，潘桂湘，等. 超臨界流體色譜在手性藥物拆分中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2015，21（12）：217-220.

[13] 吳夏青，齊建平，王欣然，等. 超臨界流體色譜分離手性藥物研究進(jìn)展[J].分析儀器，2014，45（3）：1-6.

[14] DESFONTAINE V， GUILLARME D， FRANCOTTE E， et al. Supercritical fluid chromatography in pharmaceutical analysis[J]. J Pharm Biomed Anal， 2015，113：56-71.

[15] BOUSSOUAR I，CHEN Q，CHEN X， et al. Single nanochannel platform for detecting chiral drugs[J]. Anal Chem， 2017， 89（2）：1110-1116.

[16] ZHAO D， DUAN LH， WANG FY， et al. Chiral recognition of doxazosin enantiomers in 3 targets for therapy as well as adverse drug reactions in animal experiments[J]. Can J Physiol Pharmacol，2012， 90（12）：1623-1633.

[17] 楊沐，鐘文英，侯雯. 手性藥物分析方法研究進(jìn)展[J]. 藥學(xué)進(jìn)展，2014，38（3）：209-214.

[18] 戴濤，黃珺珺，季紅，等. 超臨界流體色譜拆分齊留通對(duì)映體[J]. 華西藥學(xué)雜志，2012，27（1）：67-69.

[19] 金薇，楊新磊，陸丹，等. 超臨界流體色譜法手性拆分左乙拉西坦及其右旋異構(gòu)體[J]. 藥物分析雜志，2013，33（5）：822-826.

[20] 金薇，林華，陳陽，等. 依折麥布及其R-對(duì)映體的超臨界流體色譜手性拆分方法研究[J]. 中國藥學(xué)雜志，2015，50（1）：68-71.

[21] 羅英豪. 超臨界流體色譜法拆分萘普生對(duì)映體[J]. 中國藥房，2016，26（34）：4789-4791.

[22] 楊杰鋒，徐川龍，張潔，等. 超臨界流體色譜法測定碘帕醇的對(duì)映異構(gòu)體[J]. 中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2016，33（12）：1566-1569.

[23] 庾莉菊，黃海偉，李秀梅，等. 超高效合相色譜法測定鹽酸蘭地洛爾中立體異構(gòu)體的含量[J]. 分析化學(xué)，2016，44（9）：1348-1353.

[24] 李冬艷，吳錫，郝芳麗，等. 多糖類手性固定相超臨界流體色譜法分離手性化合物[J]. 色譜，2016，34（1）：80-84.

[25] HUANG J， YUAN M. Separation of substituted phenylpiperazine derivatives with immobilized polysaccharide- based chiral stationary phases by supercritical and subcritical fluid chromatography[J]. J Chin Pharm Sci， 2013， 22 （3）： 244-250.

[26] 劉佩，秦方剛，白亞軍，等. 丹參素異丙酯/冰片酯的合成及手性拆分研究[J]. 西北大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，45 （3）：413-417.

[27] 陳海，韓海峰，劉大偉，等. 新型超臨界流體色譜儀在手性物質(zhì)拆分中的應(yīng)用研究[J]. 分析儀器，2017（3）：73-76.

[28] DE MONTAIGU A， OELJEKLAUS J， KRAHN JH， et al. The root growth-regulating brevicompanine natural products modulate the plant circadian clock[J]. ACS Chem Biol，2017， 12（6）：1466-1471.

[29] WU DR， YIP SH， LI P， et al. Additive free preparative chiral SFC separations of 2，2-dimethyl-3-aryl-propanoic acids[J]. J Pharm Biomed Anal， 2016， 131：54-63.

[30] 莫緒飛，呂惠生，張敏華，等. 超臨界流體色譜純化Z-藁本內(nèi)酯的研究[J]. 高校化學(xué)工程學(xué)報(bào)，2013，27（5）：737-742.

[31] 朱玲玲，趙陽，孫欣光，等. 超臨界流體色譜在天然產(chǎn)物分離分析中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 藥物分析雜志，2016，36（8）：1317-1323.

[32] 徐永威，黃靜，孫慶龍，等. 超高效合相色譜技術(shù)在中藥研究和質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J]. 世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2014，16（3）：543-548.

[33] 鄧亮，郭亞東，楊敏，等. 超臨界流體色譜同時(shí)測定厚樸中厚樸酚及和厚樸酚[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2013，25（12）：1696-1698、1708.

[34] 李振宇，傅青，李奎永，等. 超臨界流體色譜對(duì)吳茱萸中吲哚類生物堿的快速分析[J]. 色譜，2014，32（5）：506- 512.

[35] 王波，周圍，劉小花，等. 基于超高效合相色譜對(duì)黃芪中5種主要黃酮類化合物的快速檢測[J]. 分析化學(xué)，2016，44（5）：731-739.

[36] 王波，周圍，馮靜，等. 溶劑誘導(dǎo)相變萃取-UPC2快速測定中成藥及原料藥中的香豆素[J]. 分析測試學(xué)報(bào)，2016，35（12）：1622-1627.

[37] 張淑麗，王怡萍，杜振霞，等. 基于UPC2-Q/TOF-MS技術(shù)的果糖誘導(dǎo)高尿酸血癥大鼠血清脂質(zhì)代謝組學(xué)研究[J]. 中國中藥雜志，2016，41（6）：1135-1139.

[38] 朱健，鄒承娟，于子桐，等. 大鼠外翻腸囊法研究異甜菊醇鈉的吸收特征[J]. 中國新藥雜志，2016，25（22）：2637-2640.

[39] 竹弘，梁初燕，陳新雷. 超臨界流體色譜同時(shí)測定4 種水溶性維生素[J]. 廣東化工，2013，40（12）：187-188.

[40] 張春蘭，郭亞東，鄧亮，等. 超臨界流體色譜測定復(fù)合維生素中3種水溶性維生素[J]. 昆明學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，35（6）：81-82.

[41] 周圍，王波，劉倩倩，等. 超高效合相色譜法同時(shí)測定復(fù)合維生素片中11 種脂溶性維生素及其衍生物[J]. 分析化學(xué)，2015，43（1）：115-120.

[42] 劉倩倩，周圍，王波，等. 超高效合相色譜法直接檢測VC方法[J]. 食品科學(xué)，2014，35（16）：208-211.

[43] 朱瑞娟，王波，胡芳，等. 超高效合相色譜法定性與定量分析補(bǔ)腎健腦顆粒[J]. 分析化學(xué)，2015，43（2）：288-293.

（收稿日期：2017-07-17 修回日期：2017-12-11）

（編輯：周 箐）