低離子凝聚胺開(kāi)展交叉配血試驗(yàn)在輸血檢驗(yàn)中的應(yīng)用

趙芳賢

(陜西省商洛市中心血站, 陜西 商洛, 726000)

在臨床手術(shù)或搶救中，輸血治療能夠迅速改善患者供血不足、血液循環(huán)障礙等臨床癥狀。隨著輸血醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，輸血的安全性已經(jīng)備受社會(huì)關(guān)注，不僅關(guān)系到患者治療的有效性，還直接影響患者的生命安全[1]。如果輸血期間出現(xiàn)交叉配血錯(cuò)誤，會(huì)導(dǎo)致急性溶血等嚴(yán)重的輸血反應(yīng)，因此保證交叉配血的準(zhǔn)確性、靈敏性十分重要。傳統(tǒng)的鹽水法交叉配血技術(shù)只能檢測(cè)出免疫球蛋白M(IgM)抗體，難以完全、準(zhǔn)確地檢測(cè)出免疫球蛋白G(IgG)抗體，因此漏檢率較高[2]。低離子凝聚胺法作為近年來(lái)新發(fā)展的交叉配血方法，可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出IgM和IgG抗體[3]。低離子凝聚胺技術(shù)不僅可以檢測(cè)出完全I(xiàn)gG抗體，同時(shí)對(duì)不完全I(xiàn)gG抗體和特殊IgG抗體均具有較高的靈敏性，彌補(bǔ)了鹽水法的不足[4]。研究[5-6]顯示，鹽水法的假陰性率較高，易導(dǎo)致患者出現(xiàn)嚴(yán)重的輸血反應(yīng)。本研究探討低離子凝聚胺開(kāi)展交叉配血試驗(yàn)在輸血檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　資料與方法

1.1　一般資料

收集本站血型室2017年2月—2018年2月接受輸血治療的患者樣本126例，隨機(jī)數(shù)字法分為觀察組和對(duì)照組各63例。觀察組患者中男29例，女34例; 年齡16～48歲，平均年齡(23.14±5.36)歲; 輸血原因: 車禍傷24例，肝硬化食管靜脈破裂19例，胃癌11例，產(chǎn)后大出血7例，慢性貧血2例。對(duì)照組患者中男31例，女32例; 年齡17～50歲，平均年齡(23.14±5.36)歲; 輸血原因: 車禍傷23例，肝硬化食管靜脈破裂21例，胃癌10例，產(chǎn)后大出血6例，慢性貧血3例。2組患者在性別、年齡、輸血原因構(gòu)成等一般資料上無(wú)顯著差異(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn): ① 無(wú)嚴(yán)重血液系統(tǒng)疾病; ② 無(wú)傳染性疾病; ③ 無(wú)嚴(yán)重精神性疾病; ④ 已簽署之情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn): ① 嚴(yán)重肝、腎、心、肺功能不全者; ② 妊娠期或哺乳期女性患者。

1.2　試劑與儀器

低離子凝聚胺試劑盒購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司。低離子凝聚胺法試劑組成: R1液為低離子介質(zhì), R2液為凝聚胺，R3液為假凝集清除液。鹽水法所用試劑為0.9%無(wú)菌生理鹽水購(gòu)自南京樂(lè)診生物技術(shù)有限公司。儀器包括: TD4ZB血型血清學(xué)多用離心機(jī)，購(gòu)自上海斯歐醫(yī)療器械有限公司; MM-3D數(shù)碼正置金相顯微鏡，購(gòu)自上海萬(wàn)衡精密儀器有限公司; HS-6001型電熱恒溫水箱，購(gòu)自北京長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠。

1.3　方法

對(duì)照組采用鹽水法開(kāi)展交叉配血試驗(yàn)，具體方法如下: 抽取患者4 mL靜脈血，在試管上注明受血者和供血者的姓名，然后采用離心機(jī)對(duì)血液樣本進(jìn)行離心，分離出血清，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3 000 轉(zhuǎn)/min, 離心時(shí)間為2 min。將紅細(xì)胞調(diào)配成3%～5%紅細(xì)胞鹽水懸液，供血者血液樣本采用相同方式配置為2%紅細(xì)胞鹽水懸液。取一支干凈試管，裝入受血者血清和供血者紅細(xì)胞懸液，并標(biāo)記為主側(cè)管; 再取另一支干凈試管裝入供血者血清和受血者紅細(xì)胞懸液，并標(biāo)記為次側(cè)管。刪除(將1滴供血者血清滴入主側(cè)管, 1滴受血者血清滴入次側(cè)管)混勻后離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為1 000 轉(zhuǎn)/min, 離心時(shí)間為1 min, 觀察結(jié)果。若2支試管中紅細(xì)胞仍處于凝集狀態(tài)，則為陽(yáng)性，若凝集狀態(tài)消失，則為陰性。

觀察組采用低離子凝聚胺法開(kāi)展交叉配血，具體方法如下: 采血方法與對(duì)照組相同，在試管上明確標(biāo)出主、次側(cè)管。在主側(cè)管中加入2滴受血者血清和1滴3%～5%供血者紅細(xì)胞懸液，在次側(cè)管中加入2滴供血者血清和1滴3%～5%受血者紅細(xì)胞懸液。在主、次側(cè)管中分別加入0.5 mL低離子介質(zhì)，充分混勻, 25 ℃靜置1 min。再分別加入2滴凝聚胺試劑，混勻后離心，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3 500 轉(zhuǎn)/min, 離心時(shí)間為15 s。離心結(jié)束后去上清，觀察試管底部凝集狀況。在主、次側(cè)管中加入2滴假凝集清除液，混勻后觀察。若2支試管中紅細(xì)胞處于凝集狀態(tài)且不消失，則為陽(yáng)性，若凝集狀態(tài)60 s后消失，則為陰性。

1.4　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料均采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，并通過(guò)t檢驗(yàn)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析; 計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)(%)表示，并通過(guò)卡方檢驗(yàn)對(duì)計(jì)數(shù)資料和構(gòu)成比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)指標(biāo)設(shè)置為α=0.05,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　果

2.1　2組患者檢測(cè)時(shí)間、陽(yáng)性檢出率及紅細(xì)胞 凝集情況比較

觀察組所需要的檢測(cè)時(shí)間為(2.14±1.36) min, 顯著短于對(duì)照組的(7.33±1.15) min (P<0.05); 觀察組陽(yáng)性檢出率為15.87%(10/63), 且肉眼可見(jiàn)細(xì)胞凝集，而對(duì)照組陽(yáng)性檢出率為4.76%(3/63), 只在顯微鏡下可見(jiàn)2～4個(gè)紅細(xì)胞凝集, 2組比較有顯著差異(P<0.05)。

2.2　2種檢測(cè)方法靈敏度、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性對(duì)比

觀察組靈敏度、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性分別為93.65%、90.48%、90.48%, 對(duì)照組靈敏度、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性分別為79.37%、76.19%、74.60%, 2組比較有顯著差異(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　2種檢測(cè)方法靈敏度、特異性、準(zhǔn)確性對(duì)比[n(%)]

與對(duì)照組比較, *P<0.05。

3　討　論

交叉配血試驗(yàn)是臨床中判斷能否進(jìn)行輸血的重要依據(jù)，其檢測(cè)的準(zhǔn)確與及時(shí)關(guān)系到患者的生命安全。交叉配血的主要原理是將供血者的血清和紅細(xì)胞與受血者的血清和紅細(xì)胞混合，觀察有無(wú)凝集反應(yīng)[7]。配血過(guò)程中包括主側(cè)配血和次側(cè)配血。前者是將受血者血清和供血者紅細(xì)胞相混合，觀察受血者血清中是否含有針對(duì)供血者紅細(xì)胞的抗體，后者是將供血者血清和受血者紅細(xì)胞相混合，觀察供血者血清中是否含有針對(duì)受血者紅細(xì)胞的抗體，若2次試驗(yàn)均發(fā)現(xiàn)無(wú)凝集現(xiàn)象，則配血成功[8]。目前臨床中開(kāi)展交叉配血的方法很多，主要包括鹽水法、抗球蛋白法、凝聚胺法等。鹽水法檢測(cè)方式雖然簡(jiǎn)便，但只能對(duì)ABO血型進(jìn)行粗略檢測(cè)，檢測(cè)的抗體較為局限，以IgM為主，對(duì)IgG抗體無(wú)法有效檢測(cè)[9]。駱建華等[10]研究顯示，鹽水法開(kāi)展交叉配血具有耗時(shí)長(zhǎng)、漏檢率高等缺點(diǎn)，無(wú)法及時(shí)滿足臨床需要。低離子凝聚胺法作為一種新興的交叉配血方法，其原理在于凝聚胺離子溶解后會(huì)產(chǎn)生大量正電荷，能夠有效中和紅細(xì)胞表面唾液酸帶有的負(fù)電荷，有利于凝集。同時(shí)低離子溶液可降低紅細(xì)胞Zeta電位，增加抗原抗體間的引力，促進(jìn)特異性凝集[11]。張紅等[12]研究發(fā)現(xiàn)，低離子凝聚胺法在交叉配血中，檢測(cè)靈敏度和準(zhǔn)確性較高，能及時(shí)、準(zhǔn)確地為臨床提供可靠配血依據(jù)，減少溶血反應(yīng)。

本研究結(jié)果顯示，低離子凝聚胺法所需要的檢測(cè)平均時(shí)間僅為(2.14±1.36) min, 明顯低于鹽水法。同時(shí)對(duì)陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，低離子凝聚胺法陽(yáng)性檢出率高達(dá)15.87%, 且肉眼可見(jiàn)細(xì)胞凝集，而鹽水法檢出率為4.76%, 只在顯微鏡下可見(jiàn)2～4個(gè)紅細(xì)胞凝集。從結(jié)果中可以看出低離子凝聚胺法相比鹽水法，靈敏度較高，凝聚現(xiàn)象明顯，具有快速、高效、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。臨床中在保證輸血安全性的同時(shí)，減少配血時(shí)間并提高輸血效率可以有效降低患者死亡率。在低離子凝聚胺技術(shù)中所用到的假凝集清除液可將非特性凝集消除，減少假陽(yáng)性配血的發(fā)生。文獻(xiàn)[13]報(bào)道稱，該方法不僅能快速的檢測(cè)出紅細(xì)胞表面的相應(yīng)抗體，同時(shí)也可避免非特異性凝集的發(fā)生，有效降低假陽(yáng)性率。通過(guò)統(tǒng)計(jì)2種檢測(cè)方法靈敏度、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性也可以看出，低離子凝聚胺法靈敏度、穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性分別為93.65%、90.48%、90.48%, 均明顯高于鹽水法。結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明了低離子凝聚胺法靈敏度、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性均較高。有研究顯示，低離子凝聚胺法容易受氯化鉀、維生素C等外界藥物影響，從而產(chǎn)生假陰性、假陽(yáng)性結(jié)果，因此檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)采取有效措施避免其發(fā)生。

總之，低離子凝聚胺法開(kāi)展交叉配血試驗(yàn)臨床價(jià)值十分明顯，可快速檢測(cè)出IgG和IgM抗體，促進(jìn)紅細(xì)胞與不規(guī)則抗體發(fā)生反應(yīng)，陽(yáng)性檢出率高，耗時(shí)較短，具有簡(jiǎn)便、高效、準(zhǔn)確性高等優(yōu)勢(shì)。在臨床配血中可有效降低溶血反應(yīng)的發(fā)生，提高患者輸血的安全性，同時(shí)也可減少受血者的醫(yī)療費(fèi)用，在臨床實(shí)踐中具有良好的應(yīng)用前景。