痰熱清對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)致急性肺損傷肺微血管通透性的保護(hù)作用

肖仲祥，鄭海珍，趙樂萍

(樂清市人民醫(yī)院 藥劑科，浙江 樂清 325600)

急性肺損傷(acute lung injury, ALI)是以肺內(nèi)彌漫性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肺組織循環(huán)障礙、肺毛細(xì)血管通透性增加以及低氧血癥為特征的常見臨床綜合征，可迅速發(fā)展為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)[1]。由于急性肺損傷的高病死率和致病因素的多樣性，一直以來都是研究的熱點(diǎn)與難點(diǎn)。目前臨床上治療急性肺損傷主要依賴于支持性治療，治療手段主要包括采用抗生素、腎上腺皮質(zhì)激素、機(jī)械通氣及吸氧等措施[2]，尋找更安全有效的ALI治療和預(yù)防藥物是臨床急危重病研究領(lǐng)域急需解決的難題[3]。痰熱清注射液具有清熱、解毒和化痰的功效，是一種純中藥注射液，由黃岑、金銀花、熊膽粉、山羊角、連翹制備而成[4]。本研究采用內(nèi)毒素建立急性肺損傷模型，通過觀察痰熱清注射液對(duì)大鼠肺微血管通透性和肺含水量的變化，分析痰熱清注射液對(duì)內(nèi)毒素所致大鼠肺損傷血管通透性的影響。

1　材料與方法

1.1動(dòng)物96只成年健康清潔級(jí)SD大鼠，雄性，體重250±50 g，由溫州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性喂養(yǎng)2～3 d，實(shí)驗(yàn)前8 h禁食。

1.2主要試劑與儀器痰熱清注射液(10 mL/支，上海凱寶藥業(yè)股份有限公司)，甲基潑尼松龍注射液(40 mg/瓶，輝瑞投資有限公司)，大腸桿菌內(nèi)毒素(美國(guó)Sigma公司)，伊文思藍(lán)(evans blue，EB)(美國(guó)Sigma公司)，甲酰胺(美國(guó)Amresco公司)，KH-45BA實(shí)驗(yàn)用烤箱(吉首市中誠(chéng)制藥機(jī)械廠)，UV-2802H型紫外分光光度計(jì)(日本島津公司)，AB204-A分析天平(梅特勒-托利多上海儀器公司)。

1.3大鼠ALI模型的制備[5]腹腔注射10 %水合氯醛(5 mL/kg)麻醉大鼠后，經(jīng)尾靜脈注射內(nèi)毒素(6 mL/kg)，然后禁食12 h，自由飲水。

1.4分組及給藥將96只SD大鼠隨機(jī)分為四組：正常對(duì)照組、內(nèi)毒素組、痰熱清組和甲基潑尼松龍組，每組各24只。除正常對(duì)照組外，其余各組均建立ALI模型。正常對(duì)照組：尾靜脈注射6 mL/kg生理鹽水后腹腔注射10 mL/kg生理鹽水；內(nèi)毒素組：尾靜脈注射內(nèi)毒素建模后立即腹腔注射10 mL/kg生理鹽水；痰熱清組：尾靜脈注射內(nèi)毒素建模后后立即腹腔注射痰熱清注射液2.5 mL/kg；甲基潑尼松龍組：尾靜脈注射內(nèi)毒素建模后后立即腹腔注射甲基潑尼松龍20 mg/kg。各組加生理鹽水配齊至10 mL/kg進(jìn)行腹腔注射。每組24只大鼠分別于術(shù)后2、6、12 h分批處死，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各8只，取右肺組織測(cè)定肺微血管通透性，左肺組織測(cè)定肺含水量。

1.5肺微血管通透性測(cè)定15 mg/mL EB在各時(shí)間點(diǎn)前20 min經(jīng)舌下靜脈注射(50 mg/kg)，注射EB后15min由頸動(dòng)脈處放血處死動(dòng)物，打開胸腔并經(jīng)左心室灌注300 mL生理鹽水將血液及器官中殘存的EB沖出。然后取肺組織，定位稱取右下肺葉組織0.1～0.3 g，剪去周圍組織后放入甲酰胺內(nèi)(甲酰胺的用量按照組織重量給予，1 mL/100 mg)，置37℃溫箱中溫育72 h，待肺組織中的色素全部浸出以后取出，4 000 r/min離心5 min后取上清液，采用分光光度計(jì)選擇波長(zhǎng)為620 nm進(jìn)行比色，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算組織中EB含量，EB含量越高代表肺微血管通透性越大。

1.6肺含水量檢測(cè)在各時(shí)間點(diǎn)處死大鼠后，準(zhǔn)確稱量整個(gè)左肺組織的濕重，放入90 ℃烤箱中72 h后稱量干重，計(jì)算含水量。肺組織含水量(%)=(濕重-干重)濕重×100%。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1肺微血管通透性的改變建立大鼠ALI模型后，經(jīng)內(nèi)毒素處理的各組肺微血管通透性增加，6 h時(shí)達(dá)到峰值。內(nèi)毒素組、痰熱清組、甲基潑尼松龍組各時(shí)間點(diǎn)的EB含量均高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；痰熱清組和甲基潑尼松龍組各時(shí)間點(diǎn)的EB含量均低于內(nèi)毒素組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2 h時(shí)，痰熱清組與甲基潑尼松龍組比較，EB含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1　各組大鼠伊文思藍(lán)含量比較±s, mg/L)

注：*與正常組比較，△與內(nèi)毒素組比較，▲與甲基潑尼龍組比較，均P<0.05；下同。

2.2肺含水量變化建立大鼠ALI模型后，經(jīng)內(nèi)毒素處理的各組肺含水量增加，6 h時(shí)達(dá)到峰值。內(nèi)毒素組、痰熱清組、甲基潑尼松龍組各時(shí)間點(diǎn)的肺含水量均高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；痰熱清組和甲基潑尼松龍組各時(shí)間點(diǎn)的肺含水量均低于內(nèi)毒素組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；2 h時(shí)，痰熱清組與甲基潑尼松龍組比較肺含水量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2　各組大鼠肺含水量比較±s, %)

3　討論

由于革蘭氏陰性菌感染的敗血癥患者越來越多，敗血癥導(dǎo)致的ALI日益成為臨床醫(yī)生關(guān)注的焦點(diǎn)[6]。革蘭陰性菌細(xì)胞壁主要成分是內(nèi)毒素，研究證實(shí)[7]，動(dòng)物靜脈輸注內(nèi)毒素可復(fù)制ALI模型，內(nèi)毒素作用于肺泡毛細(xì)血管膜引起肺損傷，造成肺毛細(xì)血管通透性增加，肺臟內(nèi)血管與組織之間液體交換功能紊亂，使肺間質(zhì)和肺泡內(nèi)聚積大量水分甚至蛋白質(zhì)，導(dǎo)致肺含水量增加，液體在肺臟內(nèi)潴留和氣體交換發(fā)生障礙，肺順應(yīng)性下降，通氣/血流比例失調(diào)，導(dǎo)致低氧血癥，最終發(fā)展成為呼吸衰竭。肺血管的通透性改變是ALI病理生理變化的基礎(chǔ)，有效預(yù)防和控制肺微血管通透性的改變對(duì)ALI患者的治療非常重要。

痰熱清注射液是我國(guó)研制的二類新藥，具有獨(dú)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)，是采用中藥指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)的中藥注射液，由中藥材黃芩、山羊角、熊膽粉、連翹、金銀花等提取精制而成[8]。黃芩具有抗病毒、抗炎、降壓、鎮(zhèn)靜和解熱的功效；山羊角、熊膽粉具有清熱解毒、平肝息風(fēng)、化痰解痙的作用；金銀花、連翹具有清熱解毒、宣肺化痰、疏風(fēng)散結(jié)的功效。諸藥配伍，可增強(qiáng)清熱解毒、化痰止咳、鎮(zhèn)驚安神的作用，通過注射途徑給藥，可以達(dá)到高效、速效的治療效果[9]。痰熱清注射液目前已被廣泛應(yīng)用于臨床，研究表明[10]，痰熱清能有效改善血液循環(huán)、清除體內(nèi)自由基、提高血氧飽和度，減輕喘憋癥狀，加速炎癥的吸收，但尚未見有關(guān)痰熱清對(duì)肺損傷肺微血管通透性影響的研究。

本研究以內(nèi)毒素建立大鼠ALI模型，模擬臨床急性肺損傷的發(fā)展進(jìn)程，建模的同時(shí)注射痰熱清，觀察痰熱清對(duì)肺損傷大鼠肺微血管通透性的影響。本研究結(jié)果顯示，大鼠經(jīng)內(nèi)毒素建模后肺含水量和EB含量增加較快，6 h時(shí)達(dá)到最高，與文獻(xiàn)報(bào)道相一致[11]，表明大鼠肺損傷后6 h時(shí)肺通透性增加最多，隨后的肺通透性下降可能與肺損傷后大鼠的自身免疫恢復(fù)有一定關(guān)系。注入痰熱清和甲基潑尼松龍后2、6、12 h，急性肺損傷大鼠的肺含水量和EB含量明顯低于內(nèi)毒素組而高于正常對(duì)照組，表明痰熱清和甲基潑尼松龍均可降低內(nèi)毒素所致的急性肺損傷大鼠的肺微血管通透性。2 h時(shí)，甲基潑尼松龍組的肺微血管通透性小于痰熱清組，其余時(shí)間點(diǎn)無差異，可能與甲基潑尼松龍的起效時(shí)間比痰熱清快有關(guān)，痰熱清屬中藥注射液，半衰期相對(duì)較長(zhǎng)，而隨著痰熱清的逐漸起效，其保護(hù)肺損傷肺微血管通透性的作用與甲基潑尼松龍相當(dāng)。

綜上所述，痰熱清注射液可降低內(nèi)毒素誘導(dǎo)的大鼠急性肺損傷肺微血管通透性和肺含水量，對(duì)內(nèi)毒素所致的急性肺損傷有保護(hù)作用。