NGX 6與IL-17 F在大腸癌及大腸腺瘤中的表達(dá)及其與VEGF的相關(guān)性分析

張蕾，薛永飛，張敬偉，任中海

南陽(yáng)市中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 南陽(yáng)473000

大腸癌為臨床常見的一種消化道惡性腫瘤，乙狀結(jié)腸和直腸是其主要發(fā)病部位。近年來，隨著社會(huì)的發(fā)展、人們生活方式及環(huán)境的變化，大腸癌的發(fā)病率和病死率均呈逐年升高趨勢(shì)，而且逐漸趨向年輕化[1]。多數(shù)研究認(rèn)為，大腸癌的發(fā)生與基因突變、環(huán)境因素、大腸腺瘤、遺傳和飲食等多因素共同影響有關(guān)。當(dāng)前分子生物學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，大腸癌發(fā)生的進(jìn)展因素為體內(nèi)抑癌基因失活和原癌基因激活間的平衡被破壞。血管內(nèi)皮細(xì)胞生 長(zhǎng) 因 子（vascular endothelial growth factor，VEGF）為加速腫瘤新生血管產(chǎn)生的主要因子，主要對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移產(chǎn)生影響。NGX6為中南大學(xué)腫瘤分子研究所發(fā)現(xiàn)的新抑癌基因，其有表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域，能夠使表皮生長(zhǎng)因子受體磷酸化含量降低，同時(shí)其還可以調(diào)控腫瘤血管形成。白細(xì)胞介素-17F（interleukin-17F，IL-17F）為活化單核細(xì)胞及CD4+T細(xì)胞的促炎性細(xì)胞因子[2-3]。本研究通過探討NGX6與IL-17F在大腸癌及大腸腺瘤中的表達(dá)及其與VEGF的相關(guān)性，旨在為臨床患者的診治提供一些新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年6月至2016年6月于南陽(yáng)市中心醫(yī)院接受手術(shù)的67例大腸癌患者的大腸癌組織存檔標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①手術(shù)前均未接受任何化療、放療；②患者病歷信息完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：有家族遺傳性綜合征相關(guān)疾病者，如家族性幼年性息肉病、家族性大腸腺瘤息肉病等。選取同期于本院接受治療的經(jīng)鏡下活檢或術(shù)后病理學(xué)檢查確診為大腸腺瘤的82例患者的大腸腺瘤組織存檔標(biāo)本；選取同期于本院行健康體檢的經(jīng)腸鏡下活檢并經(jīng)病理證實(shí)的35例健康體檢者的左半結(jié)腸正常組織存檔標(biāo)本（正常結(jié)腸組織）。67例大腸癌患者中，男38例，女29例；年齡40～70歲，平均（59.83±5.14）歲；發(fā)病部位：結(jié)腸28例，直腸39例；TNM分期依據(jù)美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)（NCCN）結(jié)直腸癌指南：Ⅰ～Ⅱ期37例，Ⅲ～Ⅳ期30例；組織分化程度：中低分化32例，高分化35例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移40例；浸潤(rùn)程度：浸潤(rùn)至漿膜層36例，未浸潤(rùn)至漿膜層31例。82例大腸腺瘤患者中，男49例，女33例；年齡38～68歲，平均（58.14±5.29）歲；鋸齒狀腺瘤17例，絨毛狀腺瘤23例，管狀-絨毛狀腺瘤19例，管狀腺瘤23例。35例健康體檢者中，男21例，女14例；年齡39～70歲，平均（57.92±5.07）歲。3組對(duì)象的年齡、性別等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 主要儀器與試劑

RM2145型切片機(jī)購(gòu)自德國(guó)LEICA公司，SPX-250B型電生化培養(yǎng)箱購(gòu)自上海躍進(jìn)醫(yī)療廠，DHG9053A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱購(gòu)自上海蘇進(jìn)儀器廠，VEGF鼠抗人多克隆抗體、抗體稀釋液均購(gòu)自北京中杉金橋公司，NGX6、IL-17F鼠抗人多克隆抗體均購(gòu)自上海柏根生物公司，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer saline，PBS）購(gòu)自福建華燦生物公司。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

所有組織標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定及石蠟包埋，采用免疫組化法檢測(cè)大腸癌組織、大腸腺瘤組織與正常結(jié)腸組織中NGX6、IL-17F及VEGF的表達(dá)情況。染色強(qiáng)度評(píng)分：細(xì)胞未染色為0分；細(xì)胞呈淡黃色染色為1分；細(xì)胞呈棕色染色為2分；細(xì)胞呈棕褐色染色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分：0分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例≤5%；1分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為6%～25%；2分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為26%～50%；3分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為51%～75%；4分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＞75%。免疫組化結(jié)果為將陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度的得分相乘，＞3分為陽(yáng)性，≤3分為陰性[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF、IL-17 F、NGX 6陽(yáng)性表達(dá)率的比較

大腸癌組織中，VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率高于大腸腺瘤組織和正常結(jié)腸組織，IL-17F、NGX6的陽(yáng)性表達(dá)率均低于大腸腺瘤組織和正常結(jié)腸組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；大腸腺瘤組織中，VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常結(jié)腸組織，IL-17、NGX6的陽(yáng)性表達(dá)率均低于正常結(jié)腸組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 VEGF、IL-17 F、NGX 6在不同組織中陽(yáng)性表達(dá)情況的比較

2.2 NGX 6、IL-17 F表達(dá)與大腸癌患者臨床特征的關(guān)系

NGX6的陽(yáng)性表達(dá)與大腸癌患者的浸潤(rùn)深度、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)（P＜0.05）；IL-17F的陽(yáng)性表達(dá)與大腸癌患者的浸潤(rùn)深度、組織分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān)（P＜0.05）。（表2）

2.3 大腸癌中IL-17 F、NGX 6與VEGF的相關(guān)性分析

大腸癌中，IL-17F與VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.72，P＜0.05）；NGX6與VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.63，P＜0.05）。（表3）

3 討論

腫瘤的生長(zhǎng)主要依賴于血管提供的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素。既往研究表明，體內(nèi)多種因子共同對(duì)新生血管的形成起著調(diào)控作用，其中促血管生成因子起主要作用[5-6]。VEGF能特異性地作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，其對(duì)血管的影響最強(qiáng)。在一些基礎(chǔ)因素發(fā)生變化時(shí)，如抑癌基因突變、癌基因激活、缺氧和pH值改變等，均可以使VEGF的表達(dá)上調(diào)，VEGF可以加強(qiáng)微血管通透性，加快血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，同時(shí)刺激多種細(xì)胞因子分解出基質(zhì)金屬蛋白酶，加快組織浸潤(rùn)與腫瘤轉(zhuǎn)移[7-9]。

表2 NGX 6和IL-17 F表達(dá)與大腸癌患者臨床特征的關(guān)系

表3 大腸癌中IL-17 F、NGX 6與VEGF的表達(dá)情況

NGX6為新發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，由于該基因含有表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域，因此含有表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域的蛋白可以通過該結(jié)構(gòu)域調(diào)節(jié)腫瘤血管的形成，從而影響腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展。相關(guān)研究表明，NGX6在結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞中不僅可以使cyclin E和cyclin D1的表達(dá)下調(diào)，還可以使p27的表達(dá)上調(diào)，延緩腫瘤細(xì)胞由G1期到S期的過渡，對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖產(chǎn)生抑制作用[10-12]。張曉梅等[13]采用RT-PCR等檢測(cè)大腸癌組織中NGX6的表達(dá)情況，結(jié)果顯示NGX6在大腸癌組織中的表達(dá)水平低于癌旁正常結(jié)腸組織，且NGX6表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)。采用凝膠遷移實(shí)驗(yàn)研究NGX6對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的NF-κB影響，結(jié)果顯示NGX6可以抑制NF-κB活性，進(jìn)而抑制患者體內(nèi)新生血管的形成。本研究結(jié)果顯示，與大腸腺瘤組織和正常結(jié)腸組織相比，大腸癌組織中的NGX6陽(yáng)性表達(dá)率降低（P＜0.05），VEGF陽(yáng)性表達(dá)率增高（P＜0.05），NGX6與VEGF的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，表明NGX6基因通過下調(diào)VEGF表達(dá)水平對(duì)新生血管產(chǎn)生抑制作用，進(jìn)而抑制腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展。IL-17F是IL-17家族中新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)成員，Starnes等[14]在毛細(xì)血管生成實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，IL-17F能明顯抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)靶細(xì)胞分泌單核細(xì)胞趨化蛋白1、白細(xì)胞介素-2及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β等多種細(xì)胞因子，最終達(dá)到抑制血管生成的目的。此外，IL-17F還能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生多種促炎性細(xì)胞因子和趨化因子，增強(qiáng)粒細(xì)胞和中性細(xì)胞的聚集。盛偉華等[15]對(duì)表達(dá)人IL-17F的重組腺病毒載體（Ad-hIL-17F）的研究發(fā)現(xiàn)，該載體能夠明顯抑制ECV304細(xì)胞的生長(zhǎng)，抑制293A細(xì)胞和ECV304細(xì)胞中血管生成素-1、VEGF的表達(dá)，同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)Ad-hIL-17F能夠通過下調(diào)血管生成素-1和VEGF水平而抑制新生血管的形成。本研究結(jié)果顯示，與大腸腺瘤組織和正常結(jié)腸組織相比，大腸癌組織中IL-17F的陽(yáng)性表達(dá)率降低，IL-17F和VEGF表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，表明大腸癌的發(fā)生與進(jìn)展中有IL-17F的參與，可能通過下調(diào)VEGF表達(dá)抑制新生血管形成而抑制大腸癌的發(fā)生、發(fā)展。

綜上所述，IL-17F、NGX6可以通過下調(diào)VEGF表達(dá)，抑制新生血管形成，從而抑制腫瘤的發(fā)生。

[1]曾進(jìn)龍,王志超,張海良.白介素-2聯(lián)合FOLFOX6方案治療晚期大腸癌的療效分析及對(duì)VEGF的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥科學(xué),2016,6(14):196-198.

[2]何華林,崔巍.化療對(duì)小細(xì)胞肺癌的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、炎性因子及外周血T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué),2016,28(11):1509-1510.

[3]Lereclus E,Tout M,Girault A,et al.A possible association of baseline serum IL-17A concentrations with progressionfree survival of metastatic colorectal cancer patients treated with a bevacizumab-based regimen[J].BMC Cancer,2017,17:220.

[4]劉復(fù)生.免疫組織化學(xué)[J].癌癥進(jìn)展,2004,2(3):28-33.

[5]陳轉(zhuǎn)鵬,曹杰,楊平,等.白介素17對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞侵襲能力的影響[J].中華胃腸外科雜志,2016,19(6):695-701.

[6]莫世友,李玉容,劉新福,等.結(jié)直腸癌患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及白介素-35的水平及臨床意義[J].中國(guó)臨床研究,2017,30(2):178-181.

[7]Mar AC,Chu CH,Lee HJ,et al.Interleukin-1 receptor type 2 acts with c-fos to enhance the expression of interleukin-6 and vascular endothelial growth factor a in colon cancer cells and induce angiogenesis[J].J Biol Chem,2015,290(36):22212-22224.

[8]李冉冉,張鵬飛,袁冰,等.乳腺癌MCF-7細(xì)胞分泌的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞免疫功能抑制[J].山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2016,54(2):38-43.

[9]Wen L,Wang R,Lu X,et al.Expression and clinical significance of vascular endothelial growth factor and fms-related tyrosine kinase 1 in colorectal cancer[J].Oncol Lett,2015,9(5):2414-2418.

[10]李紅林,鄭云會(huì),陸衛(wèi)平,等.干擾素-γ、白介素-6、白介素-17及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1在橋本甲狀腺炎患者血清中的表達(dá)[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2015,25(32):89-92.

[11]Zhu J,Haiyan HE,Hang MA,et al.Changes and implications of interleukin-17 and vascular endothelial growth factor in serum and exhaled breath condensate in nonsmall cell lung cancer[J].Chinese Journal of Difficult Complicated Cases,2015,37(8):261-265.

[12]Nasir A,Reising LO,Nedderman DM,et al.Heterogeneity of vascular endothelial growth factor receptors 1,2,3 in primary human colorectal carcinoma[J].Anticancer Res,2016,36(6):2683-2696.

[13]張曉梅,沈守榮,王曉艷,等.胃癌和大腸癌中腫瘤相關(guān)基因NGX6的表達(dá)[J].世界華人消化雜志,2002,10(8):873-876.

[14]Starnes T,Robertson MJ,Sledge G,et al.Cutting edge:IL-17F,a novel cytokine selectively expressed in activated T cells and monocytes,regulates angiogenesis and endothelial cell cytokine production[J].J Immuno1,2001,167(8):4137-4140.

[15]盛偉華,任蘇勤,謝宇鋒,等.表達(dá)人IL-17F重組腺病毒載體的構(gòu)建及其表達(dá)產(chǎn)物的功能研究[J].中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志,2013,33(9):683-687.