聽神經(jīng)瘤患者Ki-67、PCNA、TGF-β 1水平及其臨床意義研究

王穎，溫曉慧，辛忠海北京市昌平區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院耳鼻喉科，北京008首都醫(yī)科大學(xué)北京朝陽醫(yī)院耳鼻喉頭頸外科，北京00069中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院耳鼻喉科，北京000

聽神經(jīng)瘤是指起源于聽神經(jīng)鞘的一類腫瘤，為良性腫瘤，是常見顱內(nèi)腫瘤之一，占顱內(nèi)腫瘤的8%～10%，占橋小腦角腫瘤的80%[1]。聽神經(jīng)瘤多發(fā)于成年人，高峰發(fā)病年齡為30～50歲，兒童單發(fā)性聽神經(jīng)瘤十分少見，該病無明顯性別差異，左、右側(cè)發(fā)生率相仿，偶見雙側(cè)性[2]。臨床以橋小腦角綜合征和顱內(nèi)壓增高征為主要表現(xiàn)[3]。治療手段包括外科手術(shù)治療和立體定向放射治療，其中聽神經(jīng)瘤首選手術(shù)治療，可以完全切除，徹底治愈[4]。本研究選取接受治療的聽神經(jīng)瘤患者為研究對象，與同期接受手術(shù)治療的腦外傷患者作為對比，觀察兩組患者細胞核相關(guān)抗原（Ki-67）、增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（transforming growth factor-β1，TGF-β 1）的表達情況，并分析其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2015年4月至2017年8月在北京市昌平區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院接受治療的聽神經(jīng)瘤患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥18歲；②經(jīng)病理和臨床診斷確診為聽神經(jīng)瘤者；③無其他原發(fā)腫瘤疾病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不全者；②合并免疫功能障礙者。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例50例，男28例，女22例；年齡42～70歲，平均（60.45±3.19）歲。選取在北京市昌平區(qū)中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院接受手術(shù)治療的腦外傷患者為腦外傷組，年齡≥18歲，無嚴重基礎(chǔ)疾病。共納入病例50例，男26例，女24例；年齡45～73歲，平均（60.42±2.98）歲。兩組患者年齡、性別比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本項研究所有患者均知情同意，且簽署知情同意書。

1.2 方法

取患者術(shù)后新鮮聽神經(jīng)瘤標(biāo)本，常規(guī)制備石蠟病理切片。切片置于恒溫電烤箱中烤片過夜，選用二甲苯脫蠟，再進行常規(guī)梯度酒精洗脫，蒸餾水沖洗2次，浸入磷酸鹽緩沖液（PBS）5 min，放置在枸緣酸鹽緩沖液中10 min，再用PBS沖洗3次，在常溫下放入H2O2中孵育。加入一抗后，用PBS沖洗3次，然后加入已經(jīng)標(biāo)記的二抗，再用PBS沖洗3次，最后加入顯色劑顯色，選擇自來水進行充分沖洗，以終止反應(yīng)進行，終止后用蘇木精輕度復(fù)染，再用自來水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，最后用中性樹膠進行封片。由檢驗科醫(yī)師對所得病理切片在顯微鏡下觀察Ki-67、PCNA、TGF-β1的表達情況。

1.3 評價標(biāo)準(zhǔn)

觀察兩組組織中的Ki-67、PCNA、TGF-β1表達情況，比較不同臨床特征聽神經(jīng)瘤患者的Ki-67、PCNA、TGF-β1表達水平，并分析影響聽神經(jīng)瘤患者Ki-67、PCNA、TGF-β1表達的因素。陽性表達判斷標(biāo)準(zhǔn)：石蠟切片染色呈棕黃色或深棕色。根據(jù)陽性細胞百分比計分：0分，陽性細胞百分比＜10%；1分，陽性細胞百分比為10%～20%；2分，陽性細胞百分比為21%～50%；3分，陽性細胞百分比＞50%。根據(jù)染色強度計分：0分，細胞無染色；1分，細胞染色為淺黃色；2分，細胞染色為棕黃色；3分，細胞染色為黃褐色?？偡譃殛栃约毎俜直扔嫹帧寥旧珡姸扔嫹郑种禐?～9分。根據(jù)總分的高低分為3個等級：陰性（－），≤2分；陽性（+），3分≤總分＜6分；強陽性（++），6～9分。腫瘤臨床年生長速率（mm/y）=腫瘤大小/病程，以＜10 mm/y為緩慢生長，≥10 mm/y為快速生長。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 11.5統(tǒng)計-軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗；計數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗；采用Logistic回歸分析法分析影響聽神經(jīng)瘤患者Ki-67、PCNA、TGF-β1表達的因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組組織中Ki-67、PCNA、TGF- β 1表達情況的比較

聽神經(jīng)瘤組患者的Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率均明顯高于腦外傷組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組組織中Ki-67、PCNA、TGF-β 1陽性表達率的比較[ n（%）]

2.2 不同臨床特征聽神經(jīng)瘤患者Ki-67、PCNA、TGF- β 1表達情況的比較

腫瘤大?。?5 mm、生長速度≥10 mm/y、腫瘤性質(zhì)為復(fù)發(fā)性患者的Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率均高于腫瘤大小≤35 mm、生長速度＜10 mm/y、腫瘤性質(zhì)為原發(fā)性患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；而不同年齡、性別的患者 Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

2.3 影響聽神經(jīng)瘤患者Ki-67、PCNA、TGF- β 1表達的多因素分析

將各因素賦值，生長速度：1=≥10 mm/y，0=＜10 mm/y；腫瘤性質(zhì)：1=復(fù)發(fā)性，0=原發(fā)性。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，生長速度和腫瘤性質(zhì)是影響Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達的因素（P＜0.05）。（表3～表5）

3 討論

聽神經(jīng)瘤多源于第Ⅷ腦神經(jīng)內(nèi)耳道段，亦可發(fā)自內(nèi)耳道口神經(jīng)鞘膜起始處或內(nèi)耳道底，聽神經(jīng)瘤極少真正發(fā)自蝸神經(jīng)，而多來自前庭上神經(jīng)，其次為前庭下神經(jīng)，一般為單側(cè)，兩側(cè)同時發(fā)生較少[5]。當(dāng)腫瘤體積小時，患者多會出現(xiàn)一側(cè)耳鳴、聽力減退及眩暈，少數(shù)患者時間稍長后出現(xiàn)耳聾，隨著腫瘤繼續(xù)增大，患者會出現(xiàn)面肌抽搐、淚腺分泌減少、面部麻木、痛觸覺減退、角膜反射減弱等癥狀[6]。患者本身若還有腦脊液循環(huán)梗阻，則會有頭痛、嘔吐、視力減退、視乳頭水腫或繼發(fā)性視神經(jīng)萎縮[7]。治療方式包括外科手術(shù)治療、立體定向放射治療，隨著CT和MRI等影像學(xué)技術(shù)的發(fā)展，使得聽神經(jīng)瘤的定位、定性診斷更加準(zhǔn)確，通過手術(shù)治療，可以完全切除，徹底治愈[8]。

表2 不同臨床特征聽神經(jīng)瘤患者Ki-67、PCNA、TGF-β 1陽性表達情況的比較

表3 影響聽神經(jīng)瘤患者Ki-67表達的多因素分析

表4 影響聽神經(jīng)瘤患者PCNA表達的多因素分析

表5 影響聽神經(jīng)瘤患者TGF-β 1表達的多因素分析

Ki-67是一種核蛋白質(zhì)，由MKI-67基因編碼，又稱之為MKI-67，在病理免疫組化中經(jīng)常用到，提示細胞的增殖活躍程度，在病理報告中的指數(shù)高低與許多腫瘤的分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)[9]。PCNA是促進聚合酶延伸鏈的多聚酶輔助蛋白，為DNA的合成提供物質(zhì)基礎(chǔ)，在細胞增殖期以及非增殖期均有表達，研究發(fā)現(xiàn)PCNA與細胞DNA合成關(guān)系密切，在細胞增殖的啟動上起重要作用，是反映細胞增殖狀態(tài)的良好指標(biāo)，可通過其表達水平反映細胞增殖活性，與腫瘤生長速度呈正相關(guān)[10]。TGF-β1抑制免疫活性細胞的增殖，抑制淋巴細胞的分化，在腫瘤組織中含量高于正常組織[11]?，F(xiàn)如今，免疫組織化學(xué)技術(shù)是研究腫瘤增殖行為的重要手段之一，通過增殖抗原計數(shù)比衡量腫瘤細胞的增殖活性，可通過相關(guān)因子的表達來判斷病理進程[12]。

本研究中，聽神經(jīng)瘤組患者的Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率明顯高于腦外傷組，提示腫瘤細胞增殖行為與Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率存在一定的關(guān)系。表2顯示，腫瘤大?。?5 mm、生長速度≥10 mm/y、腫瘤性質(zhì)為復(fù)發(fā)性患者的Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率高于腫瘤大小≤35 mm、生長速度＜10 mm/y、腫瘤性質(zhì)為原發(fā)性患者，而不同年齡、性別的患者Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。表明Ki-67、PCNA、TGF-β1的陽性強弱可反映腫瘤細胞增殖活性的強弱，同時陽性表達率高也提示患者術(shù)后復(fù)發(fā)的危險較大。有資料顯示，Ki-67、PCNA、TGF-β1含量與良性腫瘤增殖亦有較大相關(guān)性，生長指數(shù)與瘤體大小呈相關(guān)性，表明較大瘤體更易發(fā)生增殖行為[13-15]。Logistic回歸分析結(jié)果顯示，生長速度和腫瘤性質(zhì)是影響Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率的因素，證明了腫瘤的生長速度和病理類型與相關(guān)因子表達之間存在密切關(guān)系，可通過表達程度來預(yù)測患者腫瘤惡性或良性狀態(tài)，更好地選擇治療手段，可作為一類靈敏準(zhǔn)確的檢測方式進行腫瘤診斷及預(yù)后評估。

綜上所述，聽神經(jīng)瘤患者的Ki-67、PCNA、TGF-β1陽性表達率較高，且受瘤體生長速度和腫瘤性質(zhì)的影響，可用于聽神經(jīng)瘤的診斷。

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