血液中乙醇濃度測(cè)定方法及影響因素的探究

李春麗，韓文軍，李學(xué)博，李亮亮

(山東政法學(xué)院司法鑒定中心，山東 濟(jì)南 250014)

酒后駕車是導(dǎo)致交通事故的重要因素之一。《刑法修正案》(2011年)將醉酒駕駛機(jī)動(dòng)車納入刑事犯罪，新《道路交通安全法》也規(guī)定，測(cè)定血液中乙醇的濃度含量是認(rèn)定車駕駛?cè)藛T是否飲酒的重要依據(jù)?！盾囕v駕駛?cè)藛T血液、呼氣酒精含量閾值與檢驗(yàn)》中規(guī)定，駕駛?cè)藛T血液中的乙醇含量大于或者等于20 mg/100 mL，小于80 mg/100 mL的行為，為飲酒駕車；駕駛?cè)藛T血液中的乙醇含量大于或者等于80 mg/100 mL的行為，為醉酒駕駛。因此，做好對(duì)血液中乙醇濃度的測(cè)定，在實(shí)際案件中具有重要作用。

乙醇俗稱酒精，分子式為CH3CH2OH，無色易燃易揮發(fā)，具有特殊的芳香氣味。酒精進(jìn)入空胃后， 0.5～1.5 h內(nèi)，血液中酒精濃度值 (blood alcohol concentration，BAC)會(huì)達(dá)到峰值[1]。酒精為揮發(fā)性極強(qiáng)的物質(zhì)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，在血液中的濃度會(huì)快速下降，一般8～10 h后，基本無法再測(cè)定出血液中酒精的含量[2]。在眾多的酒駕判定中，血液中乙醇的濃度最能正確反應(yīng)是否酒駕。本文簡(jiǎn)述常用的血液中乙醇濃度的測(cè)定方法，綜述其利弊，并根據(jù)實(shí)際情況，分析影響測(cè)定血液中其濃度的因素。

1 血液中乙醇濃度測(cè)定方法

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，血液中乙醇濃度的測(cè)定方法不斷進(jìn)步，目前，應(yīng)用比較多的方法有定性化學(xué)法、定量化學(xué)法、乙醇脫氫酶法、頂空氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、近紅外光譜法等[3]。

1.1 定性化學(xué)法

定性化學(xué)法最常見的是碘仿反應(yīng)法。乙醇與碘與氫氧化鉀反應(yīng)，最終生成黃色的碘仿沉淀。此方法靈敏度可達(dá)1:1000，但反應(yīng)具有非特異性。除此之外，定性化學(xué)法還可用苯酰氯反應(yīng)來測(cè)定。

1.2 定量化學(xué)法

常用的主要有酸性重鉻酸鹽氧化分光光度法。原理是乙醇在酸性條件下容易被重鉻酸鹽氧化，可以測(cè)定重鉻酸鹽溶液的吸光度來計(jì)算乙醇的含量。除此之外Widmark法也可用于乙醇濃度測(cè)定。

1.3 乙醇脫氫酶法

在高氯酸的作用下，血樣中的蛋白質(zhì)沉淀，取其上層液加入緩沖液(緩沖液中含有乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶)，產(chǎn)生原型輔酶(NADH)，測(cè)定原型輔酶在340 nm處的吸光光度值，進(jìn)而測(cè)定乙醇的含量[4]。除此之外，可利用乙醇脫氫酶把乙醇轉(zhuǎn)化為乙醛，利用分光光度計(jì)測(cè)定其340 nm處的紫外吸收值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)而測(cè)定血液中的酒精濃度。

1.4 頂空氣相色譜法

氣相色譜法原理是根據(jù)醇類具有易揮發(fā)的特性，用氫火焰離子化測(cè)定器(FID)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較，利用內(nèi)標(biāo)法對(duì)峰面積進(jìn)行定量，以保留時(shí)間進(jìn)行定性。常見的有直接進(jìn)樣法和頂空氣相色譜法。直接進(jìn)樣法最低檢出限為10μL/mL，而頂空法最低出限為1μL/mL。頂空氣相色譜法具體操作為在含有酒精的血樣里，加入叔丁醇，在特定條件下，酒精和叔丁醇揮發(fā)，進(jìn)入瓶子頂空部，當(dāng)達(dá)到氣-液平衡時(shí)，氣體中二者含量與檢材中二者含量成正比。抽取氣體，進(jìn)行氣相色譜分析，根據(jù)色譜峰的峰面積確定酒精的含量。頂空氣相色譜法是公安部發(fā)布的兩個(gè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(GA/T 842-2009 血液酒精含量的檢驗(yàn)方法和GA/T 1073-2013生物樣品血液、尿液中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、異丙醇和正丁醇的頂空-氣相色譜檢驗(yàn)方法) 的首選方法，也是司法部司法鑒定技術(shù)規(guī)范SF/Z JD0107001-2016血液中乙醇的鑒定頂空氣相色譜法中規(guī)定的方法[5]。

1.5 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法主要是利用GC/MS儀的特點(diǎn)。GC/MS儀具有高效的分離能力和準(zhǔn)確的鑒定能力。氣相色譜分離出來的物質(zhì)，在質(zhì)譜儀作用下發(fā)生電離，經(jīng)過加速電場(chǎng)時(shí)，形成粒子束，進(jìn)入分析器。通過測(cè)定離子核質(zhì)比來確定乙醇的含量。相關(guān)研究報(bào)道其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差可保持在7%[6]。

1.6 近紅外光譜法

在700～2500 nm的近紅外波長(zhǎng)范圍內(nèi)，含有C-H，O-H，N-H和S-H化學(xué)鍵的化合物會(huì)產(chǎn)生吸收。不同波段產(chǎn)生不同的諧波，這些諧波組成吸收譜圖-指紋圖。相同的譜圖一定是相同物質(zhì)得到的。近紅外光對(duì)生命組織的穿透深度可達(dá)5 mm。相關(guān)實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明了本試驗(yàn)方法的可行性[7]。

2 不同測(cè)定方法的優(yōu)缺點(diǎn)

化學(xué)法、乙醇脫氫酶法、頂空氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法和近紅外光譜法曾經(jīng)或正在作為血液中乙醇含量測(cè)定的重要方法。它們?cè)诓煌l(fā)展階段和不同實(shí)驗(yàn)室發(fā)揮了不同的作用。下面總結(jié)以上幾種方法的優(yōu)缺點(diǎn)見表1。

表1 血液中乙醇含量的不同測(cè)定方法的優(yōu)缺點(diǎn)

3 血液中乙醇濃度測(cè)定的影響因素

3.1 樣本采集過程中的影響因素

采集部位：一般選擇體表淺靜脈血，如果選擇其他部位的血，可能會(huì)影響血液中乙醇的測(cè)定結(jié)果；采集處理：采集樣品時(shí)，如果使用含有乙醇成分的消毒棉球，就會(huì)污染采集樣本，進(jìn)而影響測(cè)定結(jié)果，因此應(yīng)該選擇不含醇類的消毒棉球消毒；

樣本抗凝：抽取的樣本應(yīng)該添加抗凝劑或使用抗凝管，否則血液凝固后會(huì)影響測(cè)定結(jié)果[8]。

3.2 樣本保存過程中的影響因素

采集后樣本的保存至關(guān)重要，樣本的穩(wěn)定性會(huì)直接影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。保存不佳的樣本，其中的乙醇可能會(huì)氧化或揮發(fā)，血液可能會(huì)因?yàn)楦瘮《a(chǎn)生更多的乙醇。一般認(rèn)為，含乙醇的血樣應(yīng)該保存在0～4℃條件下，并于24 h內(nèi)送檢。如果不能按時(shí)送檢，應(yīng)該保存在-20℃條件下[9]。如果樣本需要較長(zhǎng)時(shí)間的保存，但又沒有冷藏條件，可在樣本中加入1%的防腐劑(例如，氟化鈉)。相關(guān)研究也表明，水平位放置的血漿中酒精濃度明顯低于直立位放置的血漿中酒精濃度，而對(duì)于血清卻沒有太大影響[10]。

3.3 樣本測(cè)定過程中的影響因素

在眾多的測(cè)定方法中，首推頂空氣相色譜法，本方法的測(cè)定結(jié)果可以直接作為法庭證據(jù)。本節(jié)內(nèi)容僅介紹影響頂空氣相色譜法的因素，首先應(yīng)該保證血液樣本新鮮，保存完好，送檢樣本應(yīng)該盡快完成測(cè)定；其次應(yīng)該確定儀器設(shè)備完好，氣相色譜儀和頂空進(jìn)樣器都在標(biāo)準(zhǔn)條件下工作；確定乙醇和叔丁醇應(yīng)該為色譜純，不可用分析純替代；除此之外，確保樣本未被交叉污染，確保實(shí)驗(yàn)過程的環(huán)境條件符合標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該建立專門的檢材保管制度等。

3.4 尸體樣本血液乙醇濃度的影響因素

尸體腐敗：腐敗的尸體可以產(chǎn)生新的乙醇，某些微生物可以分解尸體內(nèi)存在的乙醇，從而造成血液中乙醇濃度降低。尸體保存在0～4℃條件下，將不會(huì)出現(xiàn)明顯乙醇生成現(xiàn)象，再此，通過測(cè)定正丙醇的含量可以判斷死后是否有新乙醇產(chǎn)生[10-11]；

尸體樣本采集：采集尸體血液樣本時(shí)，應(yīng)該避免乙醇彌散作用。所以，對(duì)于一般非腐敗檢材，應(yīng)該選擇遠(yuǎn)離胃部及腸道的外周靜脈血。

其它因素：死者生前患病、服用藥物，或者救治過程中使用甘露醇，或者尸體停放在具有氣霧劑等的地方，都會(huì)對(duì)酒精濃度測(cè)定產(chǎn)生影響。

綜上所述，血液樣本的采集、保存、運(yùn)輸、測(cè)定等都有影響樣本中酒精濃度的因素，因此，在實(shí)際操作中，為了準(zhǔn)確客觀反應(yīng)當(dāng)事人樣本中酒精的濃度，應(yīng)該注意避免各種因素造成的影響。

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