廈門市售貝類中氯霉素殘留情況調(diào)查分析

林功師，鄭冬云，洪 江，劉麗麗

(廈門市海洋與漁業(yè)研究所，福建 廈門 361008)

海洋物種多樣、資源豐富，長期以來是人類食物的重要來源之一。其中貝類產(chǎn)品，因其肉味鮮美、營養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)和不飽和脂肪酸含量較高，脂肪含量低，易被人體消化吸收，并且富含鈣、鐵、鎂、硒、鋅、碘等多種人體必需的微量元素和維生素[1]，可作為人類的營養(yǎng)食品，而深受廣大消費(fèi)者的喜愛。據(jù)漁業(yè)部門相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，目前我國是貝類養(yǎng)殖大國，養(yǎng)殖規(guī)模和產(chǎn)量均居于世界前列，其中牡蠣(Ostreagigastnunberg)、貽貝(Mytilusedulis)、菲律賓蛤仔(Ruditapesphilippinarum)、文蛤(Meretrixmeretrix)、扇貝(Chlamysfarreri)等品種占貝類養(yǎng)殖總產(chǎn)量的60%以上[2-3]。

氯霉素是一種可人工合成的抑菌性廣譜抗生素，因其抗菌效果好，曾長期用于防治漁業(yè)病害、水體消毒等水產(chǎn)養(yǎng)殖過程。但氯霉素在動(dòng)物可食用組織中的殘留量會(huì)通過食物鏈進(jìn)入到人體，人類如果長期食用含有氯霉素殘留的食品，不僅會(huì)使人體腸道正常菌群失調(diào)[4]，還會(huì)導(dǎo)致再生障礙性貧血和粒狀白細(xì)胞缺乏等疾病[5]。鑒于氯霉素的毒副作用，其殘留問題已經(jīng)引起美國、歐盟、中國等國家及國際組織的高度重視，并相繼出臺(tái)了相關(guān)的規(guī)定，要求水產(chǎn)品中氯霉素殘留的限量為不得檢出[6-7]。但氯霉素類藥物具有價(jià)格低廉、抑菌效果好、容易獲得等優(yōu)點(diǎn)，使一些養(yǎng)殖戶、商販仍違法違規(guī)使用。因此，開展貝類中氯霉素殘留量的監(jiān)測，有利于及時(shí)了解貝類食用的安全性，為廣大消費(fèi)者的健康提供保障。

本次開展的貝類中氯霉素殘留量的檢測所使用的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法是在GB/T 20756—2006國家標(biāo)準(zhǔn)方法上建立的[8]，該方法在濃度0.5～20 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，線性方程y= 0.601 59x+ 0.043 27，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 8，氯霉素殘留量檢出限為0.1 μg/kg。

1 材料與方法

1.1 樣品

采集廈門市水產(chǎn)品批發(fā)市場、超市、養(yǎng)殖場等場地的菲律賓蛤仔、文蛤、牡蠣、縊蟶(Sinonovaculaconstricta)、貽貝、泥蚶(Tegillarcagranosa)、尋氏肌蛤(Musculussenhousei)、扇貝共8種常見貝類，169份樣品。牡蠣和縊蟶樣品每份重約2.0 kg，其余貝類樣品每份重約4.0 kg。貝類樣品的產(chǎn)地主要來自廣西、廣東、江蘇、遼寧、浙江、福建等省份。

1.2 儀器與試劑

超高效液相色譜(1290 Infinity UHPLC，美國 Agilent 公司)；三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(AB SciexTriple Quad 4500，美國AB公司，配有電噴霧 ESI 離子源)；MS3 Digital 漩渦振蕩器(德國IKA公司)；BS110S電子天平和TE212電子天平(德國Sartorius公司)；Sorvall Stratos高速冷凍離心機(jī)(美國Thermo公司)；Milli-Q Gradient超純水儀(美國Millipore公司)；20 μL、50 μL、100 μL、1000 μL移液器(法國Gilson公司)。乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈均為色譜純(德國MERCK公司)。氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品(純度為98.5%， Dr.Ehrenstorfer公司)， 氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)溶液(100 μg/mL，Dr.Ehrenstorfer公司)。

1.3 方法

1.3.1 儀器條件

色譜柱為Zorbax Eclipse Plus-C18(2.1 mm×100 mm，1.8 μm)；流動(dòng)相A為乙腈，流動(dòng)相B為超純水；柱溫40℃；流速0.40 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；液相色譜流速及梯度洗脫程序見表1。離子源為電噴霧離子源ESI，毛細(xì)管電壓為-4 500 V，離子源氣流量為50.0 mL/min，錐孔氣流量35.0 mL/min。采用負(fù)離子掃描方式，多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)。質(zhì)譜定性定量離子對(duì)信息見表2。

表1 液相色譜梯度洗脫條件

注：流動(dòng)相A 為乙腈，流動(dòng)相B 為超純水。

Note：The mobile phase A was acetonitrile，while the mobile phase B was water.

表2 目標(biāo)化合物液質(zhì)測定條件

注：*定量離子。

Note：The asterisk represented the quantitation ion.

1.3.2 樣品處理

準(zhǔn)確稱取攪碎的濕樣品5.0 g于50 mL離心管中，加入20 μL 100 ng/mL內(nèi)標(biāo)工作溶液渦旋混合1 min，再加入15 mL乙酸乙酯渦旋1 min，以4 500 r/min離心5 min。將上層清液轉(zhuǎn)移至含有5 g無水硫酸鈉并用乙酸乙酯潤洗的漏斗中，漏斗下方放置100 mL雞心瓶以便收集提取液。再往50 mL離心管中加入15 mL乙酸乙酯并渦旋混合1 min，重復(fù)上述操作一次，合并全部提取液于雞心瓶中，然后用10 mL乙酸乙酯將殘留在無水硫酸鈉中的目標(biāo)物沖洗至雞心瓶中。搖勻后，將提取液于40℃溫度下旋轉(zhuǎn)濃縮至干。殘?jiān)? mL水溶解，超聲3 min，加入適量正己烷渦旋混合1 min，靜置分層，棄掉上層的正己烷。將水相過0.22 μm濾膜后，待測。

本次檢測過程，每10批次樣品加測2份樣品的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，加標(biāo)水平為1.0 μg/kg。加標(biāo)回收率在88%～104%之間。

1.3.3 貝類中氯霉素的判定標(biāo)準(zhǔn)

農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》中規(guī)定[9]，氯霉素為禁止使用的藥物，在動(dòng)物性食品中不得檢出。

2 結(jié)果

8種貝類中氯霉素殘留總體檢出情況：169份貝類樣品中，共有6份樣品有檢出氯霉素殘留，氯霉素總檢出率為3.6%(6/169)，含量最高為7.05 μg/kg；以菲律賓蛤仔檢出率最高，檢出率為7.7%(3/39)，其次為文蛤，檢出率為6.7%(2/30)；貽貝的檢出率為5.3%(1/19)；牡蠣、縊蟶、泥蚶、尋氏肌蛤、扇貝共計(jì)81份樣品中均未檢出氯霉素殘留。氯霉素殘留檢出率為：菲律賓蛤仔>文蛤>貽貝>牡蠣、縊蟶、泥蚶、尋氏肌蛤、扇貝，具體情況見表3。依據(jù)農(nóng)業(yè)部235號(hào)公告，在動(dòng)物性食品中氯霉素不得檢出的規(guī)定，則樣品中檢出氯霉素殘留，即為超標(biāo)，判定樣品不合格。

表3 氯霉素的總體檢出情況

注：N.D.指的是低于檢出限(0.1 μg/kg)。

Note：N.D.represented the result below detection limit (0.1 μg/kg).

3 討論

從本次監(jiān)測的數(shù)據(jù)可以看出，8種貝類中以菲律賓蛤仔(Ruditapesphilippinarum)和文蛤(Meretrixmeretrix)樣品中的氯霉素殘留檢出率較高，貽貝(Mytilusedulis)樣品中的氯霉素殘留量僅在檢出限附近。氯霉素添加到鮮活貝類產(chǎn)品養(yǎng)殖水體中，具有延長貝類存活時(shí)間，抑制病情、消毒等作用。部分養(yǎng)殖戶及經(jīng)營者對(duì)氯霉素流入市場的危害性認(rèn)識(shí)不足，在貝類育苗階段、運(yùn)輸過程和零售市場暫存暫養(yǎng)過程可能違規(guī)使用氯霉素，而雙殼貝類特殊的生長習(xí)性也導(dǎo)致其吸收的有害物質(zhì)更容易積累，從而出現(xiàn)貝類中氯霉素殘留量超標(biāo)的情況。本次抽樣檢測的貝類樣品中，6批次的檢出樣品均來自于批發(fā)市場和超市，而采自養(yǎng)殖產(chǎn)地的24批次樣品均未檢出氯霉素殘留。由于本次采集的貝類樣品，每個(gè)貝類品種檢測樣品的數(shù)量有限，個(gè)別貝類品種檢測數(shù)量比較少，故檢出率、檢出品種不一定完全有代表性，但檢測結(jié)果已顯示市面上的貝類中確實(shí)含有氯霉素殘留，相關(guān)管理部門應(yīng)該加強(qiáng)宣傳和監(jiān)管監(jiān)控，從而保障廣大消費(fèi)者的身體健康。

參考文獻(xiàn)：

[1]李蘋蘋.五種經(jīng)濟(jì)貝類的營養(yǎng)成分及蛋白質(zhì)質(zhì)量分析[J].食品研究與開發(fā)，2014，35(15)：99-101.

[2]農(nóng)業(yè)部漁業(yè)局.中國漁業(yè)年鑒(2011)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2012：185.

[3]王增煥，王許諾.華南沿海貝類產(chǎn)品重金屬含量及其膳食暴露評(píng)估[J].中國漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2014，4(1)：14-20.

[4]文衛(wèi)，鈕偉民，許偉芳.氯霉素殘留檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，34(1)：67-68.

[5]吳永寧，邵兵，沈建忠.獸藥殘留檢測與監(jiān)控技術(shù)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2007：189.

[6]湯軼偉，勵(lì)建榮，孟良玉，等.水產(chǎn)品中氯霉素藥物殘留檢測方法研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2013，34(11)：333-337.

[7]譚磊，施遠(yuǎn)國，羅燕，等.動(dòng)物源性食品中氯霉素殘留檢測方法的優(yōu)化[J].國外畜牧學(xué)，2015，35(7)：66-68.

[8]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 20756—2006可食動(dòng)物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2006.

[9]中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)[EB/OL].(2005-10-28).[2018-03-05].http：//jiuban.moa.gov.cn/zwllm/nybz/200803/t20080304_1028649.htm.