雙氯芬酸鈉注射液治療奶牛臨床型乳房炎的試驗(yàn)報(bào)告

文/李世宏 孔曉軍 秦 哲 劉希望 楊亞軍 焦增華 李劍勇*

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室）

奶牛臨床型乳房炎會(huì)造成奶牛產(chǎn)奶量下降，病乳廢棄，嚴(yán)重者乳區(qū)化膿、壞疽、萎縮，致使其永久喪失泌乳能力，淘汰牛占奶?？倲?shù)的10%左右。目前奶牛臨床型乳房炎的治療以抗生素為主，導(dǎo)致抗生素殘留、細(xì)菌耐藥性等問(wèn)題也日漸突出。應(yīng)用抗生素類(lèi)藥物配合抗炎類(lèi)藥物控制炎癥，可迅速緩解患牛的臨床癥狀，同時(shí)減少抗生素使用量，成為治療奶牛乳房炎的新思路和新策略。雙氯芬酸鈉是苯乙酸類(lèi)衍生物，屬于第三代非甾體抗炎藥物，其抗炎鎮(zhèn)痛作用比吲哚美辛強(qiáng)2.0～2.5 倍，比阿司匹林強(qiáng)26～50倍，且具有應(yīng)用劑量小，耐受性好，療效高，個(gè)體差異小等特點(diǎn)，胃腸道副反應(yīng)也比大多數(shù)非甾體抗炎藥物輕。雙氯芬酸鈉是環(huán)氧化酶的強(qiáng)抑制劑，可減少前列腺素、血栓素的合成，從而起到抗炎、鎮(zhèn)痛、解熱作用。雙氯芬酸鈉注射液是由鄭州百瑞動(dòng)物藥業(yè)有限公司聯(lián)合中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所等研制的用于輔助治療奶牛臨床型乳房炎的新制劑。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所于2017年3月1日～2017年4月30日在甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心進(jìn)行了雙氯芬酸鈉注射液防治奶牛臨床型乳房炎臨床擴(kuò)大試驗(yàn)。

表1 試驗(yàn)?zāi)膛７纸M及用藥方法

1 材料

1.1 主要設(shè)備與器材

體細(xì)胞分析儀（FossomaticTM Minor）、冰箱（海爾BCD-257SL）、水浴鍋、動(dòng)物用體溫計(jì)、50 mL離心管、20 mL注射器、超聲波清洗機(jī)等實(shí)驗(yàn)室常用器皿等。

1.2 試驗(yàn)藥品

1.2.1 受試藥物

雙氯芬酸鈉注射液，10 mL/瓶（10 mL∶0.5 g），批號(hào)：20150826，鄭州百瑞動(dòng)物藥業(yè)有限公司。

1.2.2 合用藥物

注射用頭孢噻呋鈉，1 g/瓶，批號(hào)：17021602，鄭州百瑞動(dòng)物藥業(yè)有限公司。

1.3 試驗(yàn)?zāi)膛＿x擇依據(jù)與辦法

1.3.1 診斷標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)?；疾∪閰^(qū)出現(xiàn)紅、腫、熱、痛等癥狀；乳汁中出現(xiàn)絮狀物、凝塊、血液及黃色清水等癥狀；體溫（T）≥39.5 ℃；臨床癥狀評(píng)分＞4 分。

1.3.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)臨床型奶牛乳房炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，在甘肅荷斯坦奶牛繁育示范中心選擇自然發(fā)病的臨床癥狀、年齡、胎次、體重和體況相近的臨床型乳房炎荷斯坦奶牛，且發(fā)病前均未使用任何藥物；對(duì)挑選的試驗(yàn)?zāi)膛Ｔ谠囼?yàn)開(kāi)展之前再次逐一進(jìn)行臨床檢查，剔除乳房和乳頭有外傷、乳房腫硬、乳頭壞死、乳房炎反復(fù)發(fā)作、試驗(yàn)前體溫沒(méi)有升高（T＜39.5 ℃）但伴發(fā)有其它疾病的奶牛。

1.3.3 剔除標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)選中的臨床型乳房炎試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行常規(guī)飼養(yǎng)，試驗(yàn)進(jìn)行中有其它疾病伴發(fā)的試驗(yàn)牛終止試驗(yàn)，交由牛場(chǎng)另選方案治療或做淘汰處理。依據(jù)《中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部公告第1596號(hào)（獸用中藥、天然藥物臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則等5個(gè)技術(shù)指導(dǎo)原則）》及EMEA（歐洲藥品管理局）/CVMP（獸用藥委員會(huì)）/344/1999等制定了臨床型乳房炎奶牛剔除標(biāo)準(zhǔn)。具體如下：（1）試驗(yàn)前30 天，全身或乳房局部使用抗感染藥和抗炎藥、免疫調(diào)節(jié)劑、微生態(tài)制劑、血清抗體及抗生素進(jìn)行過(guò)治療的奶牛。（2）試驗(yàn)前150 天接種過(guò)乳房炎疫苗的奶牛。（3）少于或多于4 個(gè)乳頭的奶牛。（4）乳頭有明顯損傷的奶牛。（5）患有其它疾病的奶牛。（6）病史不明的奶牛。（7）營(yíng)養(yǎng)極度不良的奶牛。

2 方法

2.1 試驗(yàn)分組及用藥方法

將挑選的40 頭奶牛分為試驗(yàn)組和對(duì)照組，每組20 頭。試驗(yàn)組給予雙氯芬酸鈉注射液和注射用頭孢噻呋鈉；對(duì)照組僅給予注射用頭孢噻呋鈉。2 組試驗(yàn)?zāi)膛Ｔ谙嗤瑮l件下飼喂相同日糧。具體分組及用藥方法見(jiàn)表1。

表2 試驗(yàn)?zāi)膛ＥR床癥狀評(píng)分表

表3 試驗(yàn)?zāi)膛Ｓ盟幥昂陀盟幒篌w溫 （X±SD）

2.2 臨床觀察

在整個(gè)試驗(yàn)期間對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行臨床觀察，詳細(xì)記錄給藥前后、停藥后至痊愈轉(zhuǎn)群前各組患病奶牛臨床癥狀的表現(xiàn)及癥狀的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸情況。在給藥前和給藥后的24 h，記錄各試驗(yàn)組奶牛的食欲、乳房、乳汁、直腸體溫等臨床癥狀。在試驗(yàn)中，結(jié)合臨床實(shí)際情況，制定奶牛臨床癥狀評(píng)分表。根據(jù)臨床癥狀評(píng)分表對(duì)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行臨床癥狀評(píng)分，臨床癥狀評(píng)分最嚴(yán)重為17 分，而臨床癥狀評(píng)分為4 分意味著奶牛臨床健康（表2）。

2.3 奶樣采集

分別于用藥前、第3次給藥后24 h無(wú)菌采集單個(gè)患病乳區(qū)奶樣約50 mL于滅菌奶樣管中，標(biāo)明牛號(hào)、乳區(qū)和時(shí)間，置冰盒中送達(dá)實(shí)驗(yàn)室。采集奶樣前先用溫水洗滌乳房，然后用消毒液擦洗，再用碘酒消毒乳頭，棄掉前2～3 把奶。

2.4 檢測(cè)項(xiàng)目

2.4.1 體溫測(cè)定

各試驗(yàn)組分別于用藥前、用藥后第1天和第3天分別測(cè)定試驗(yàn)?zāi)膛Ｖ蹦c體溫。

2.4.2 牛奶體細(xì)胞計(jì)數(shù)

參照FossomaticTMMinor使用指南操作如下：（1）用Foss公司提供的標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)儀器檢測(cè)性能進(jìn)行校正；（2）將待檢樣品自然解凍，搖勻后用校正過(guò)的FossomaticTMMinor進(jìn)行檢測(cè)。

2.5 藥效判定標(biāo)準(zhǔn)

在用藥前、用藥期間及痊愈轉(zhuǎn)群前，每天對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行臨床檢查并詳細(xì)記錄試驗(yàn)?zāi)膛５氖秤?、乳房、乳汁、直腸體溫等臨床癥狀。根據(jù)臨床癥狀評(píng)分表對(duì)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)試驗(yàn)?zāi)膛＿M(jìn)行臨床癥狀評(píng)分和療效評(píng)定（表2）。

2.5.1 治愈

臨床癥狀評(píng)分為4分；患病乳區(qū)紅、腫、熱、痛等臨床癥狀完全消失，乳汁性狀、顏色均恢復(fù)正常；乳汁中體細(xì)胞數(shù)＜50 萬(wàn)個(gè)/mL；體溫37 ℃≤T＜39.5 ℃；停藥5 天后轉(zhuǎn)至健康群。治愈率=治愈數(shù)/總數(shù)×100%。

2.5.2 有效

4≤臨床癥狀評(píng)分＜自身給藥前得分；患病乳區(qū)紅、腫、熱、痛等臨床癥狀減輕或消退；乳汁中體細(xì)胞數(shù)顯著下降。有效率=(有效數(shù)+治愈數(shù))/總數(shù)×100%

表4 試驗(yàn)?zāi)膛Ｓ盟幥昂笕橹械捏w細(xì)胞數(shù)( X±SD) 單位：萬(wàn)個(gè)/mL

表5 試驗(yàn)?zāi)膛ＥR床癥狀評(píng)分（X±SD） 單位：分

2.5.3 無(wú)效

臨床癥狀評(píng)分≥自身給藥前得分；患病乳區(qū)臨床癥狀無(wú)明顯改善甚至加重，或者停藥后2 周內(nèi)復(fù)發(fā)；乳汁中體細(xì)胞數(shù)下降不顯著，視為無(wú)效。無(wú)效率=無(wú)效數(shù)/總數(shù)×100%

2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，應(yīng)用SPSS 19.0應(yīng)用軟件（配對(duì)t檢驗(yàn)或單因素方差）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

3 結(jié)果

3.1 臨床癥狀觀察

給藥前，各組試驗(yàn)?zāi)膛＞憩F(xiàn)明顯的臨床型乳房炎癥狀：乳區(qū)出現(xiàn)紅、腫、熱、痛等癥狀；乳汁分泌不暢，出現(xiàn)絮狀物，嚴(yán)重者腫脹疼痛明顯，乳汁中出現(xiàn)絮狀物、凝塊、血液、黃色清水等癥狀，試驗(yàn)?zāi)膛＞邪l(fā)熱癥狀。實(shí)驗(yàn)室檢查，乳汁中體細(xì)胞數(shù)量明顯升高。首次給藥后，患牛體溫迅速下降至正常范圍，給藥3 天結(jié)束后，絕大部分患牛紅、腫、熱、痛的癥狀消失，乳汁性狀如乳汁顏色、絮狀物、凝塊、血乳、清水樣奶等異?，F(xiàn)象消失，糞便、尿液外觀無(wú)異常。停藥后轉(zhuǎn)至健康群期間，試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ橹腿榉恐饾u恢復(fù)正常。

3.2 體溫測(cè)量

試驗(yàn)?zāi)膛Ｓ盟幥啊⒂盟幒蟮?天和第3天分別用體溫計(jì)于直腸測(cè)量試驗(yàn)?zāi)膛ｓw溫，結(jié)果見(jiàn)表3。

從表3可見(jiàn)，試驗(yàn)組與對(duì)照組奶牛在給藥第1天后，兩組試驗(yàn)?zāi)膛ｓw溫均下降，但試驗(yàn)組奶牛體溫降至奶牛正常值（37～39.5 ℃）范圍內(nèi)，而對(duì)照組還是接近奶牛發(fā)熱體溫閾值（＞39.5 ℃）；試驗(yàn)組與對(duì)照組奶牛體溫在給藥第3天后，體溫均降至正常范圍內(nèi)，且試驗(yàn)組體溫降低差異較顯著（配對(duì)t檢驗(yàn)，p≤0.05），而對(duì)照組差異不顯著。試驗(yàn)結(jié)果表明，雙氯芬酸鈉注射液具有明顯的快速降溫解熱作用。

3.3 奶樣體細(xì)胞數(shù)檢查

試驗(yàn)?zāi)膛Ｓ盟幥啊⒌?次給藥后24 h分別無(wú)菌采集各組發(fā)病乳區(qū)奶樣檢測(cè)體細(xì)胞數(shù)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4。

從表4可以看出，在用藥前，試驗(yàn)組與對(duì)照組奶牛體細(xì)胞數(shù)遠(yuǎn)高于正常奶牛的50 萬(wàn)個(gè)/mL，而停藥后試驗(yàn)組與對(duì)照組奶牛體細(xì)胞數(shù)下降差異均極顯著，但試驗(yàn)組降至小于50 萬(wàn)個(gè)/mL，而對(duì)照組則還高于50 萬(wàn)個(gè)/mL。試驗(yàn)表明，對(duì)患臨床型乳房炎試驗(yàn)?zāi)膛＝o予雙氯芬酸鈉注射液配合用頭孢噻呋鈉與單獨(dú)使用頭孢噻呋鈉相比，更能顯著降低試驗(yàn)牛乳中的體細(xì)胞數(shù)，從而降低炎性細(xì)胞，消除炎癥，促進(jìn)試驗(yàn)病?？焖倩謴?fù)。

3.4 臨床癥狀評(píng)分

根據(jù)奶牛臨床型乳房炎臨床癥狀評(píng)分判斷標(biāo)準(zhǔn)，各組試驗(yàn)?zāi)膛Ｖ委熐昂笈R床癥狀評(píng)分統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表5。

從表5可以看出，在用藥前，試驗(yàn)組與對(duì)照組奶牛臨床癥狀評(píng)價(jià)得分遠(yuǎn)高于健康奶牛的臨床癥狀評(píng)價(jià)得分（4分），而停藥后試驗(yàn)組與對(duì)照組奶牛臨床癥狀評(píng)價(jià)得分下降差異均極顯著，但與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組更接近于正常值。試驗(yàn)結(jié)果表明，與單獨(dú)使用頭孢噻呋鈉相比，對(duì)患臨床型乳房炎的試驗(yàn)?zāi)膛＝o予雙氯芬酸鈉注射液配合使用頭孢噻呋鈉較能顯著加速患牛臨床癥狀恢復(fù)，有效縮短治療時(shí)間。

表6 試驗(yàn)藥物對(duì)奶牛臨床型乳房炎治療效果

3.5 受試藥物對(duì)奶牛臨床型乳房炎的治療效果

根據(jù)奶牛臨床型乳房炎療效判斷標(biāo)準(zhǔn)，各組試驗(yàn)?zāi)膛ＥR床治療療效統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表6。有效率為治愈頭數(shù)加有效頭數(shù)除以試驗(yàn)?？傤^數(shù)。

從表6可以看出，用藥結(jié)束后試驗(yàn)組對(duì)奶牛臨床型乳房炎的治愈率、有效率和無(wú)效率分別為65%、80%和20%，其療效明顯優(yōu)于對(duì)照組的55%、65%和35%。試驗(yàn)結(jié)果表明，雙氯芬酸鈉注射液配合使用注射用頭孢噻呋鈉輔助治療奶牛臨床型乳房炎較僅使用注射用頭孢噻呋鈉療效更加顯著。

4 結(jié)果與討論

奶牛臨床型乳房炎傳統(tǒng)上采用抗生素療法。由于大劑量或不當(dāng)使用青霉素、鏈霉素、四環(huán)素和金霉素等抗生素藥物，致使牛奶中抗生素殘留。當(dāng)人們食用含抗生素的牛奶后，引起過(guò)敏反應(yīng)，嚴(yán)重者發(fā)生過(guò)敏性休克，更多的人因長(zhǎng)期飲用含有抗生素的牛奶，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，給治療帶來(lái)困難。此外，牛奶中殘留抗生素，接種乳酸菌后不易繁殖，使酸乳生成受阻，極大地影響乳制品生產(chǎn)。因此，在保證療效的同時(shí)，選擇新的治療方法以適當(dāng)減少抗生素使用量是治療乳房炎的新期望。

在本試驗(yàn)研究的雙氯芬酸鈉注射液配合注射用頭孢噻呋鈉對(duì)臨床型奶牛乳房炎的臨床擴(kuò)大試驗(yàn)中，試驗(yàn)組用藥后具有明顯的快速降溫解熱作用，以降低對(duì)患牛中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不良影響；試驗(yàn)組能顯著降低試驗(yàn)?zāi)膛Ｈ橹械捏w細(xì)胞數(shù)，從而有效降低炎性細(xì)胞而消除炎癥，促進(jìn)病牛快速恢復(fù)健康；試驗(yàn)組對(duì)奶牛臨床型乳房炎的治愈率和有效率分別為65%和80%，均高于對(duì)照組的55%和65%。試驗(yàn)結(jié)果表明，抗炎藥物雙氯芬酸鈉注射液配合抗生素輔助治療奶牛臨床型乳房炎，其療效優(yōu)于單獨(dú)使用抗生素治療，且其療程也大大縮短。總之，雙氯芬酸鈉注射液配合注射用頭孢噻呋鈉輔助治療奶牛臨床型乳房炎，具有快速解熱、療程短及給藥方便等特點(diǎn)，可以減少抗生素的使用量而降低細(xì)菌耐藥性和藥物殘留，值得應(yīng)用與推廣研究。

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