枳殼不同產(chǎn)地傳統(tǒng)與一體化飲片主要成分含量比較*

★ 王鳳嬌 鐘凌云* 祝婧（江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 南昌 330004）

枳殼是中醫(yī)臨床上常用的理氣藥，其為蕓香科植物酸橙及其栽培變種的干燥未成熟果實。枳殼，味苦、辛、酸、性微寒；歸脾、胃、大腸經(jīng)。具有理氣寬中，行滯消脹的功效［1］；常用于治療胸脅氣滯，脹滿疼痛，食積不化，痰飲內(nèi)停，胃下垂， 脫肛，子宮脫垂等癥狀［2］。枳殼的主要有效成分為黃酮類、生物堿、揮發(fā)油，其中黃酮類化合物柚皮苷、新橙皮苷可抑制平滑肌收縮，生物堿類化合物辛弗林具有升壓、抗休克等藥理作用［3-4］。枳殼生品中含有較多的揮發(fā)油，其作用峻烈，易傷元氣，體虛者不宜服用，且刺激人體胃腸道，會產(chǎn)生惡心、嘔吐等副作用；麥麩性平，味甘淡，能和中益脾，且能吸收部分揮發(fā)油，因此枳殼經(jīng)麥麩炒后，揮發(fā)油成分減少，燥性緩和，療效增強，在臨床上多以炮制品入藥［5］。

目前枳殼的產(chǎn)地加工方法為：7月果皮尚綠時采收，自中部橫切為兩半，曬干或低溫干燥［6］。而枳殼傳統(tǒng)炮制飲片加工方法為：取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，去瓤，切薄片，干燥，篩去碎落的瓤核［6］。中藥材一體化加工則是從鮮藥材直接到炮制飲片的過程。枳殼一體化飲片加工方法為：取鮮藥材，除去雜質(zhì)，對半切開，去瓤，切薄片，干燥。與枳殼傳統(tǒng)加工工藝比較，一體化加工工藝減少了中間干燥、水洗、浸潤過程，縮短了加工時間，避免了中間儲存環(huán)節(jié)，同時也避免了枳殼成分的損失。因此本研究主要從枳殼傳統(tǒng)與一體化飲片主要成分含量的差異進行比較，以期為枳殼飲片的一體化加工提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Ultimate 3000 高效液相色譜儀（Ultimate 3000柱溫箱，VWD 檢測器，Chromeleon 7.10色譜工作站）；TDL-60B低速臺式離心機（上海安亭科學(xué)儀器廠）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；KQ-500E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；十萬分之一電子分析天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；FW135中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)水式真空泵（鞏義市子華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 材料 柚皮苷（批號：BCTG-0808）；橙皮苷（批號：BCTG-0092）；新橙皮苷（批號：BCTG-0713）；辛弗林（批號：BCTG-0709，）；上述對照品純度均大于98%，均購自中藥固體制劑制造技術(shù)國家工程研究中心。甲醇、乙腈均為色譜純，水為雙蒸水，其他試劑為分析純。枳殼藥材由江西中醫(yī)藥大學(xué)葉喜德老師從四個不同產(chǎn)地采購并由中藥鑒定學(xué)葛菲老師鑒定為蕓香科植物酸橙的干燥未成熟果實。

2 方法與結(jié)果

2.1 枳殼加工炮制方法 傳統(tǒng)生品枳殼：取原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，潤透，去瓤，切薄片，干燥，篩去碎落的瓤核。

一體化生品枳殼：取鮮藥材，除去雜質(zhì)，對半切開，去瓤，切薄片，干燥。

2.2 色譜條件

2.2.1 黃酮苷類測定［7］色譜柱：Inertsil ODS-3（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-水（用磷酸調(diào)pH=3）（18∶82），檢測波長：283nm，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃，進樣量：10μL，樣品及對照品色譜圖見圖1。

圖1 枳殼中黃酮苷類HPLC圖

2.2.2 生物堿類測定［8］色譜柱：Inertsil ODS-3（250mm×4.6mm，5μm）；流動相為乙腈-水（0.1%十二烷基硫酸鈉和0.1%磷酸）（32∶68），檢測波長：224nm，柱溫25℃，流速：1.0mL/min，進樣量：10μL，樣品及對照品色譜圖見圖2。

圖2 枳殼中生物堿類HPLC圖

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 黃酮苷類制備［7］取枳殼飲片粉末（40目）約0.2g，置100mL圓底燒瓶中，加甲醇25mL，水浴加熱回流1.5h后，趁熱濾過，濾液置50mL容量瓶中，殘渣再用甲醇提取2次，每次加甲醇10mL提取10min，濾液置同一容量瓶中，冷卻，最后加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取該溶液5mL置50mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3.2 生物堿類制備［8］取枳殼飲片粉末（40目）約0.5g，精密稱定，置50mL離心管中，加體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇25mL，超聲處理30min（240W），取出。于3000r/min離心5min，將上清液轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，重復(fù)提取1次，合并提取液。用體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇定容至刻度，搖勻，過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 對照品溶液的制備 （1）精密稱取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷適量，置于10mL的容量瓶中，加甲醇溶解并定容到刻度，搖勻，即得柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的對照品儲備溶液。精密吸取1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每mL分別含柚皮苷0.413mg，橙皮苷0.180mg，新橙皮苷0.185mg）。

（2）精密稱取辛弗林對照品適量，置于10mL的容量瓶中，加50%的乙醇溶解并定容到刻度，搖勻，作為辛弗林的對照品儲備溶液。精密吸取1mL，置10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液（每mL含辛弗林0.114mg）。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷混合對照品溶液0.5，1，2，4，5mL分別置于5mL容量瓶中，加入甲醇稀釋定容至刻度，搖勻，即得不同濃度對照品混合溶液。按照

2.2.1項下色譜條件進樣，以對照品含量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)作曲線，進行回歸分析，求得回歸方程。柚皮苷：Y=428.5X+1.0491，r=0.9995；橙皮苷：Y=93.139X+0.3746，r=0.9992；新橙皮苷：Y=517.47X+1.3197，r=0.9993。結(jié)果表明柚皮苷進樣量在0.826～8.26μg，橙皮苷進樣量在0.36～3.6μg，新橙皮苷進樣量在 0.37～3.7μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

精密吸取辛弗林對照品溶液0.1，0.5，1，1.5，2mL分別置于10mL容量瓶中，加入50%的乙醇稀釋定容至刻度，搖勻，即得不同濃度辛弗林對照品溶液。按照2.2.2項下色譜條件進樣，以對照品含量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)作曲線，進行回歸分析，求得回歸方程。辛弗林：Y=816.22X+1.3571，r=0.9992。結(jié)果表明辛弗林進樣量在0.0114～0.228μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度實驗 精密吸取柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷對照品溶液，按照2.2.1項下色譜條件連續(xù)進樣6次，每次10μL，測定峰面積，計算得RSD。柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷分別為0.61%，0.78%，0.57%，表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取黃酮苷類供試品溶液適量，分別于0，4，8，12，16，20，24h按照 2.2.1項下色譜條件進樣，測定柚皮苷，橙皮苷，新橙皮苷面積，計算RSD（n=6）分別為0.98%，1.66%，1.10%。表明樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性試驗 按照2.3.1項下方法制備6份黃酮苷類供試品溶液，再按照2.2.1項下色譜條件進樣，測定柚皮苷，橙皮苷，新橙皮苷峰面積，計算RSD（n=6）分別為0.81%，1.44%，1.60%。表明此方法的重復(fù)性好。

2.9 加樣回收試驗 取已知柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量的枳殼粉末0.2g，精密稱定，共6份，加入含柚皮苷0.925mg/mL、橙皮苷0.336mg/mL、新橙皮苷0.671mg/mL混合對照品溶液20mL，按照2.3.1項下方法制備供試品溶液，再按照2.2.1項下色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷平均加樣回收率（n=6）分別為95.73%、95.60%、94.56%，RSD分 別 為1.68%、1.92%、1.71%。 同理測得辛弗林平均加樣回收率（n=6）為97.82%，RSD為0.88%。說明加樣回收率良好，符合要求。

2.10 樣品含量測定 取四個不同產(chǎn)地傳統(tǒng)飲片與一體化飲片分別按照2.3.1、2.3.2項下方法制備供試品溶液，然后再分別按照2.2.1、2.2.2項下色譜條件進樣，采用外標(biāo)法測定，計算四個不同產(chǎn)地傳統(tǒng)飲片與一體化飲片中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林的含量，測定結(jié)果見表1。

表1 枳殼不同產(chǎn)地傳統(tǒng)與一體化飲片中主要成分的含量測定

使用SPSS 21.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，對枳殼傳統(tǒng)飲片與一體化飲片柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林含量，進行兩組配對樣本t檢驗，傳統(tǒng)飲片與一體化飲片主要成分比較檢驗結(jié)果：柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林P值分別為0.859、0.9157、0.8447、0.7657，均大于0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明枳殼兩種工藝飲片主要成分含量無顯著差別。

從文獻查閱［9-14］以及枳殼加工炮制的實際操作可知，一體化加工工藝節(jié)省了中間操作，避免了枳殼成分的損失，理論上枳殼一體化飲片主要成分含量要高于傳統(tǒng)飲片的含量，但是從上述實驗及結(jié)果分析可知，新干、重慶產(chǎn)地枳殼一體化飲片主要成分含量高于傳統(tǒng)飲片含量；陜西產(chǎn)地枳殼兩種飲片主要成分含量相近；金華產(chǎn)地枳殼一體化飲片主要成分含量低于傳統(tǒng)飲片含量。進而綜合枳殼加工炮制實際操作及本研究結(jié)果，可以說明枳殼一體化飲片具有替代傳統(tǒng)飲片的可能性。

3 討論

本研究結(jié)果表明，不同產(chǎn)地枳殼主要成分含量有明顯的差異，而金華枳殼傳統(tǒng)飲片含量高于一體化飲片含量，可能是金華枳殼一體化飲片處理不當(dāng)，造成了主要成分的流失。但是結(jié)合生產(chǎn)需要及實驗結(jié)果可知枳殼一體化生產(chǎn)飲片應(yīng)具有替代傳統(tǒng)工藝飲片的可能性。

綜上，枳殼一體化飲片無論是在加工過程還是主要成分含量上均優(yōu)于傳統(tǒng)飲片，并且能節(jié)省時間、人力、物力、財力，提示枳殼一體化飲片在使用過程中具有可行性。

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