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    栽培及野生粗莖秦艽質(zhì)量研究
    ——兼論秦艽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

    2018-06-29 06:21:18陶愛恩張曉燦羅丹丹段寶忠
    大理大學(xué)學(xué)報(bào) 2018年4期
    關(guān)鍵詞:秦艽浸出物藥典

    陶愛恩,張曉燦,李 楊,羅丹丹,段寶忠

    (大理大學(xué)藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院,云南大理 671000)

    粗莖秦艽(Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.)是傳統(tǒng)大宗商品藥材,需求量大,為2015年版藥典秦艽收載的基原物種之一,被列入《國(guó)家重點(diǎn)保護(hù)野生藥材物種名錄》,具有祛風(fēng)濕、清濕熱、止痹痛、退虛熱之功效〔1〕。粗莖秦艽在云南已有超過(guò)60年的種植歷史〔2〕,近年來(lái),對(duì)云南栽培粗莖秦艽的質(zhì)量研究已有報(bào)道〔3-7〕,這些研究資料表明,其有效成分與秦艽(G.macrophylla Pall.)相近,抗炎、鎮(zhèn)痛效果優(yōu)于藥典收載的另外3種秦艽〔8-9〕,且產(chǎn)量有明顯優(yōu)勢(shì)〔3,5,8,10〕。因此,大力發(fā)展粗莖秦艽栽培是推進(jìn)秦艽產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的必然途徑。在研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn),粗莖秦艽栽培品性狀與中國(guó)藥典秦艽性狀描述有差異,一定程度上阻礙了粗莖秦艽藥材的市場(chǎng)流通。鑒于此,對(duì)粗莖秦艽栽培品及野生品的質(zhì)量進(jìn)行比較研究,以期為秦艽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供參考。

    1 儀器、試劑與材料

    1.1 儀器與試劑 1200 HPLC高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)、Agilent Zorbax SB C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);KQ-5200DB 型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);GH-252型電子分析天平(A&D,深圳市盛美儀器有限公司);Nikon E-400顯微鏡(日本尼康公司);TS-12D生物組織自動(dòng)脫水機(jī)(上海隆拓儀器設(shè)備有限公司);BM-Ⅶ生物組織包埋機(jī)(北京佳源興業(yè)科技有限公司);QS-Ⅳ生物組織切片機(jī)(武漢宏強(qiáng)醫(yī)療器械有限公司);CS-Ⅵ生物組織攤片烤片機(jī)(孝感市電子儀器廠);SmartV250D數(shù)字?jǐn)z像機(jī);OLYMPUSBX-41生物顯微鏡;Canon EOS 70D數(shù)碼單反相機(jī)。甲醇、乙腈為色譜純(Fish?er Scientific,F(xiàn)airlawn New Jersey),水為超純水,其他試劑為分析純。

    1.2 材料 粗莖秦艽樣品采集或購(gòu)于云南、西藏及四川等地,經(jīng)大理大學(xué)段寶忠副教授鑒定為粗莖秦艽(Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.),憑證標(biāo)本保存于大理大學(xué)中藥標(biāo)本館,樣品信息見表1;對(duì)照品購(gòu)于成都曼斯特有限公司。

    2 方法

    2.1 性狀及顯微鑒別 取栽培和野生粗莖秦艽藥材,觀測(cè)藥材的形狀、大小、顏色、質(zhì)地、斷面、氣味等性狀特征。采用常規(guī)石蠟制片法制作石蠟切片〔11〕,觀察橫切面組織結(jié)構(gòu),藥材粉碎后觀察顯微粉末特征。

    表1 粗莖秦艽樣品表

    2.2 浸出物測(cè)定 用乙醇作為提取溶劑,參照醇溶性浸出物測(cè)定法(《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版通則2201)項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定〔1〕。

    2.3 含量測(cè)定及指紋圖譜數(shù)據(jù)分析 色譜條件、供試品溶液制備等參照文獻(xiàn)〔6〕進(jìn)行,采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》2004 A版軟件分析指紋圖譜數(shù)據(jù)。

    3 結(jié)果

    3.1 藥材性狀

    3.1.1 野生品 呈類圓柱形,上粗下細(xì),扭曲不直,長(zhǎng)10~30 cm,直徑1~3 cm。表面黃棕色或灰黃色,有縱向或扭曲的縱皺紋,頂端有殘存莖基及纖維狀葉鞘。質(zhì)硬而脆,易折斷,斷面略顯油性,皮部黃色或棕黃色,木部黃色。氣特異,味苦、微澀。

    3.1.2 栽培品 與野生品比較,栽培品較長(zhǎng),支根多。表面顏色較淺,栓皮膜質(zhì),易脫落;斷面皮部和木部顏色較淺,質(zhì)地較野生柔韌。野生品及栽培品藥材性狀見圖1。

    圖1 野生及栽培粗莖秦艽藥材性狀圖

    圖2 野生品及栽培品根橫切顯微特征

    3.2.2 粉末特征 二者粉末顏色有微小差異,野生品粉末呈暗棕黃色,栽培品粉末呈白色。從顯微特征來(lái)看,二者無(wú)明顯差異,見圖3。其特征為:栓化細(xì)胞較多,淡黃色,表面觀呈類多角型、類長(zhǎng)方形或不規(guī)則形,直徑20~180 μm,壁薄,略彎曲,平周壁有橫向細(xì)紋理,胞腔內(nèi)含油滴狀物。內(nèi)皮層細(xì)胞大,長(zhǎng)可達(dá)500 μm,多破碎,表面觀呈類長(zhǎng)方形,側(cè)壁細(xì)波狀彎曲,平周壁可見纖細(xì)的橫向線狀紋理。導(dǎo)管較多,直徑10~50 μm。草酸鈣晶體散存于薄壁細(xì)胞中。

    3.2 顯微結(jié)構(gòu)特征

    3.2.1 橫切面特征 與栽培品相比,野生品外周皮以外的組織多脫落,其他結(jié)構(gòu)特征無(wú)明顯差異,見圖2??梢钥闯觯簝烧吒鶛M切面結(jié)構(gòu)從外到內(nèi)分別為表皮、內(nèi)皮層、韌皮部及木質(zhì)部,中心無(wú)髓,射線不明顯。根外周皮木栓細(xì)胞縱向略延長(zhǎng),內(nèi)皮層細(xì)胞表面觀呈類方形,壁近平直;韌皮部寬闊,細(xì)胞多呈類圓形,外側(cè)的較大,細(xì)胞間隙明顯,內(nèi)側(cè)細(xì)胞排列整齊和緊密;形成層明顯,由3~4列切向延長(zhǎng)的扁平薄壁細(xì)胞組成,排列緊密整齊;木質(zhì)部由不木化木薄壁細(xì)胞和木化的導(dǎo)管組成,導(dǎo)管散在或數(shù)個(gè)成群。

    圖3 野生及栽培品粉末顯微特征圖

    3.3 化學(xué)指紋圖譜與相似度 將12批野生品色譜圖(樣品號(hào)CY-1~CY-12)導(dǎo)入中藥指紋圖譜軟件,生成野生品指紋圖譜,見圖4A。以CY-8號(hào)藥材圖譜作為參照譜進(jìn)行匹配,生成野生品共有模式指紋圖譜,見圖4B。將12批野生品及10批栽培品與共有模式指紋圖譜比較計(jì)算相似度,結(jié)果顯示,12批野生品和10批栽培品的相似度均大于0.942,見圖5,表明二者化學(xué)指紋相似度較高。

    圖4 野生品色譜指紋及共有模式圖

    圖5 栽培及野生品與共有模式圖譜比較相似度結(jié)果圖

    3.4 浸出物及含量 研究結(jié)果顯示,12批野生品及10批栽培品的浸出物含量在27.41%~40.46%之間,平均值33.25%,其中30%以上有20批,占90.90%,全部符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版秦艽“浸出物”規(guī)定(≥20%)。見表2。

    含量測(cè)定結(jié)果顯示,12批野生品及10批栽培品中馬錢甘酸和龍膽苦苷總含量在4.15%~16.80%之間,所有樣品均符合《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版秦艽“含量要求”(≥2.5%)。10批栽培品的含量在7.42%~13.92%之間,可見栽培品的含量范圍較野生品小,表明栽培粗莖秦艽的質(zhì)量更趨于穩(wěn)定。

    表2 22批樣品浸出物及含量測(cè)定結(jié)果

    4 討論

    本研究對(duì)粗莖秦艽野生品及栽培品的性狀、顯微特征、化學(xué)指紋、浸出物和含量進(jìn)行了比較,結(jié)果顯示二者在顯微結(jié)構(gòu)、化學(xué)指紋、浸出物和有效成分含量等方面均無(wú)明顯差異,僅在性狀方面有微小差異。生長(zhǎng)環(huán)境、采挖年限等可能是形成栽培品與野生品性狀差異的原因。對(duì)照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版秦艽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),栽培品除性狀特征不符合標(biāo)準(zhǔn)外,其他項(xiàng)目均符合要求,且有效成分含量為藥典標(biāo)注的2倍之多。栽培品指紋圖譜與野生品共有模式比較,相似度均大于0.942,表明栽培品質(zhì)量均一。大量的研究已表明無(wú)論是栽培還是野生撫育的粗莖秦艽,其藥材質(zhì)量均較好〔3-4〕。粗莖秦艽藥材根粗大、較長(zhǎng),色黃,品質(zhì)較西北出產(chǎn)者為佳〔2〕,產(chǎn)量也具有明顯優(yōu)勢(shì)。鑒于此,建議秦艽質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)修訂時(shí),對(duì)性狀進(jìn)行補(bǔ)充和完善,這將對(duì)推進(jìn)秦艽藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用具有重要意義。

    〔1〕國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:一部〔M〕.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2015:270-271.

    〔2〕曾育麟.云南的秦艽〔J〕.中藥通報(bào),1959,5(2):66.

    〔3〕段寶忠,黃林芳,尚飛能,等.云南野生撫育粗莖秦艽藥材的品質(zhì)評(píng)價(jià)〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(21):82-86.

    〔4〕吳靳榮,趙志禮,王妍妍,等.云南麗江產(chǎn)粗莖秦艽栽培品種的品質(zhì)評(píng)價(jià)〔J〕.中成藥,2010,32(2):250-252.

    〔5〕曹曉燕,王喆之.云南粗莖秦艽不同采收期4種環(huán)烯醚萜苷類成分的測(cè)定〔J〕.藥物分析雜志,2010,30(4):623-625.

    〔6〕張曉燦,李楊,羅丹丹,等.基于指紋圖譜和化學(xué)計(jì)量學(xué)的多基原秦艽藥材化學(xué)品質(zhì)比較研究〔J〕.大理大學(xué)學(xué)報(bào),2017,2(6):37-40.

    〔7〕張曉燦,段寶忠,羅丹丹,等.不同海拔粗莖秦艽環(huán)烯醚萜苷類成分含量研究〔J〕.大理大學(xué)學(xué)報(bào),2017,2(8):13-17.

    〔8〕曹曉燕.秦艽種質(zhì)資源研究〔D〕.西安:陜西師范大學(xué),2010.

    〔9〕崔景榮,趙喜元,張建生,等.四種秦艽的抗炎和鎮(zhèn)痛作用比較〔J〕.北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1992,24(3):225-227.

    〔10〕聶燕瓊,李海彥,孫娜,等.粗莖秦艽資源研究進(jìn)展〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代中藥,2012,14(5):37-40.

    〔11〕楊月娥,劉亞玲,田新雁,等.五種云南黃芪屬植物的生藥學(xué)研究〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2014,25(12):2924-2927.

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