MUM1/IRF4聯(lián)合β2微球蛋白檢測(cè)與外周T細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后的相關(guān)性研究

張琳 ，夏建勝 ，韓方征 ，董巧鳳

1.泰山醫(yī)學(xué)院，山東泰安 271000；2.菏澤市立醫(yī)院，山東菏澤 274000

外周T細(xì)胞淋巴瘤是一組罕見(jiàn)且具有異質(zhì)性的臨床侵襲性疾病，預(yù)后不良[1]。在歐美國(guó)家中PTCL約占非霍奇金淋巴瘤（NHL）的10%，而在亞洲國(guó)家這一比例達(dá)到了20%～35%，且常發(fā)生于青壯年男性[2]，治療反應(yīng)差異大，治療效果總體較差，使其逐漸得到更多的重視。1993年制定的侵襲性非霍奇金淋巴瘤的國(guó)際預(yù)后指數(shù)（IPI）評(píng)分被用來(lái)指導(dǎo)NHL的分層治療、判斷預(yù)后轉(zhuǎn)歸已超過(guò)20年[3]。但I(xiàn)PI主要對(duì)彌漫大B細(xì)胞性淋巴瘤有較好的預(yù)測(cè)價(jià)值，由于PTCL異質(zhì)性較強(qiáng)，相同IPI評(píng)分的淋巴瘤患者其生存狀態(tài)也不盡相同[2]。因此，尋找準(zhǔn)確識(shí)別PTCL預(yù)后的指標(biāo)成為學(xué)界關(guān)注的熱點(diǎn)。隨著研究的進(jìn)展，某些蛋白分子水平標(biāo)志對(duì)PTCL預(yù)后的價(jià)值已初步顯現(xiàn)。很多文獻(xiàn)[4-5]報(bào)道多發(fā)性骨髓瘤癌基因-1/干擾素調(diào)節(jié)因子-4（MUM1/IRF4）的表達(dá)與B細(xì)胞淋巴瘤和多發(fā)性骨髓瘤的侵襲性有關(guān)，但它的表達(dá)與PTCL預(yù)后的關(guān)系研究較少，此外，國(guó)內(nèi)外有研究表明血清β2-微球蛋白（β2-MG）水平與NHL患者預(yù)后有一定的關(guān)系，但這些研究對(duì)象多限于B細(xì)胞淋巴瘤[6-7]，鮮見(jiàn)血清β2-MG與PTCL預(yù)后的專(zhuān)項(xiàng)報(bào)道[8-9]。該研究探討2007年1月—2016年12月菏澤市立醫(yī)院79例PTCL患者標(biāo)本中MUMl/IRF4與β2-MG的表達(dá)，尤其是MUMl/IRF4與β2-MG同時(shí)表達(dá)，并分析其臨床意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

調(diào)取菏澤市立醫(yī)院病理科外周T細(xì)胞淋巴瘤石蠟包埋標(biāo)本79例，所有標(biāo)本均依次經(jīng)過(guò)10%福爾馬林固定、常規(guī)脫水、石蠟包埋切片、HE染色，經(jīng)兩名病理科主任醫(yī)師獨(dú)立進(jìn)行病理學(xué)確診，并按照WHO（2008年）血液和淋巴系統(tǒng)腫瘤分類(lèi)進(jìn)行病理分型。其中結(jié)外NK/T細(xì)胞淋巴瘤 (ENKL)共32例為40.5%，血管免疫母細(xì)胞T細(xì)胞淋巴瘤(AITL)共10例為12.7%，外周T細(xì)胞淋巴瘤NOS(PTCL-NOS)共18例為22.8%，間變大細(xì)胞淋巴瘤 (ALCL)共6例為7.6%，成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤 (ATLL)共5例為6.3%，腸病相關(guān)性T細(xì)胞淋巴瘤(EATCL)共5例為6.3%，肝脾T細(xì)胞淋巴瘤(HSTCL)共 2例為 2.5%，皮下脂膜炎樣T淋巴瘤(SPTCL)共1例為1.3%

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

MUMl/IRF4單克隆抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物公司產(chǎn)品，β2微球蛋白所用試劑盒由天津九鼎醫(yī)學(xué)生物工程有限公司提供。

1.3 檢測(cè)方法

MUMl/IRF4的測(cè)定應(yīng)用免疫組織化學(xué)EnVision二步法，血清β2微球蛋白的測(cè)定采用放射免疫分析法，操作方法均按其說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 結(jié)果判斷

MUMl/IRF4所有染色標(biāo)本均為由單一病理學(xué)家獨(dú)立審查，他們均不了解患者的臨床信息。①陰性：無(wú)腫瘤細(xì)胞顯色或顯色數(shù)＜30%；②陽(yáng)性：腫瘤細(xì)胞顯色數(shù)≥30%。測(cè)定β2微球蛋白的靈敏度為0.15 mg／L，在該研究中超過(guò)3 mg/L時(shí)為陽(yáng)性。

1.5 療效評(píng)價(jià)

近期療效評(píng)價(jià)采用WHO實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)和進(jìn)展(PD)。以CR＋PR定義為有效，以SD＋PD定義為無(wú)效?？偵鏁r(shí)間（OS）為自確診后至死于任何疾病時(shí)間或末次隨訪時(shí)間。

1.6 隨訪

隨訪方式包括查閱病歷和電話(huà)等，末次隨訪時(shí)間為 2017年6月，79例PTCL病例中66例有完整的生存和隨訪資料，其中13例失訪。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件行Kaplan-Meier法計(jì)算生存率，Log-rank法單因素預(yù)后分析，百分?jǐn)?shù)的比較用χ2檢驗(yàn)及Fisher精確檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MUM1/IRF4在各型PTCL中陽(yáng)性結(jié)果及病理圖片

79例PTCL患者中，MUM1/IRF4表達(dá)的陽(yáng)性率為64.6%（51/79）。其中ALCL陽(yáng)性率最高為83.0%（5/6），AITL共 7例為 70.0%，ENKL共 22例為 68.0%，PTCL-NOS共12例為67.0%，ATLL共2例為40.0%，EATCL共2例為40.0%，HSTCL共1例為50.0%。見(jiàn)圖1。

圖1 MUM1/IRF4在PTCL中的陽(yáng)性表達(dá)與對(duì)照（×400）

2.2 MUM1/IRF4和β2-MG在PTCL患者中的表達(dá)及其與臨床資料的相關(guān)性

51例MUM1/IRF4陽(yáng)性表達(dá)的PTCL患者中42例同時(shí)表達(dá)β2-MG，占其總數(shù)的82.3%。將患者按年齡、行為狀態(tài)、Ann Arbor分期、結(jié)外受侵部位數(shù)目、LDH高低以及IPI評(píng)分分組，結(jié)果顯示MUM1/IRF4與β2-MG同時(shí)表達(dá)與Ann Arbor分期、結(jié)外受侵部位數(shù)目、LDH 高低以及 IPI評(píng)分相關(guān)（P＜0.05），而與年齡、行為狀態(tài)評(píng)分無(wú)關(guān)，見(jiàn)表1。

表1 MUM1/IRF表達(dá)和β2-MG同時(shí)表達(dá)與PTCL臨床資料的相關(guān)性

2.3 MUM1／IRF4蛋白及β2MG的表達(dá)與近期療效關(guān)系

79例中66例患者可獲得治療信息，66例患者均接受了不少于2次CHOP方案進(jìn)行化療，其中CR18例，PR21例，SD15例，PD12例，CR 率為 27.3%，有效（CR＋PR）(RR)率為 59.0%。MUMl/IRF4陽(yáng)性表達(dá)者治療有效率為50.0%(23/46)；MUMl/IRF4陰性表達(dá)者治療有效率80.0%(16/20)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.190，P=0.023，P＜0.05)。 β2微球蛋白陽(yáng)性表達(dá)者治療有效率為44.4%(20/45)；β2微球蛋白陰性表達(dá)者治 療 有 效 率 90.5%(19/21)(χ2=12.551，P=0.000)。MUM1＋/β2-MG＋、MUM1-/β2-MG＋、MUM1＋/β2-MG-、MUM1-/β2-MG-表達(dá)的有效率分別為42.1%、57.1%、87.5%、92.3%（χ2=13.344，P=0.003）， 各組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 MUM1/IRF4蛋白及β2MG的表達(dá)與近期療效的關(guān)系

2.4 MUM1／IRF4蛋白及β2微球蛋白表達(dá)與遠(yuǎn)期生存關(guān)系

79例患者中66例可進(jìn)行生存分析，患者隨訪2～33個(gè)月，中位隨訪時(shí)間18個(gè)月，66例中，死亡33例，其余33例仍在隨訪中。全組中位OS為16個(gè)月(95%CI：12～20 個(gè) 月)， 中 位 數(shù) OS Mum1/IRF4 陰 性 和Mum1/IRF4 陽(yáng)性組為 20和 13個(gè)月（P=0.000）(圖 2)。進(jìn)一步比較MUM1＋/β2-MG＋中位數(shù)OS為 13個(gè)月，MUM1＋/β2-MG-中位數(shù) OS 為 15 個(gè)月，MUM1-/β2-MG＋中位數(shù) OS 為 18 個(gè)月，MUM1-/β2-MG-中位數(shù)OS為20個(gè)月，按照Log Rank檢驗(yàn)的結(jié)果，當(dāng)MUM1/IRF4和β2-MG同時(shí)表達(dá)時(shí)生存率最低，而MUM1/IRF4和β2-MG同時(shí)陰性時(shí)，與其他組相比較顯示出較高的生存率（OS,P=0.000）（圖 3）。

圖2 MUM1/IRF4蛋白不同表達(dá)PTCL患者OS的生存曲線

圖3 MUM1、β2-MG分別表達(dá)及共表達(dá)PTCL患者OS的生存曲線

3 討論

PTCL是一組異質(zhì)性腫瘤，診斷時(shí)多為晚期，通常具有更強(qiáng)的臨床侵襲性，預(yù)后不良，許多學(xué)者都從各方面積極尋找能提示預(yù)后的因素。Gallamini等[10]的一項(xiàng)前期研究基于4個(gè)簡(jiǎn)單的臨床變量：年齡，ECOG評(píng)分，LDH水平和BMI，提出了一種新的PTCL-NOS預(yù)后模型，稱(chēng)為PIT。然而，這種模型對(duì)PTCL的預(yù)后價(jià)值尚待進(jìn)一步研究。T細(xì)胞淋巴瘤在國(guó)內(nèi)NHL的比例又高于國(guó)外。目前，國(guó)內(nèi)也有許多研究探討其預(yù)后因素，結(jié)果不盡相同。

Mum1/IRF4是干擾素調(diào)節(jié)因子IRF家族中的一員，通過(guò)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用參與免疫調(diào)控，介導(dǎo)淋系、髓系及樹(shù)突細(xì)胞(DC)等免疫相關(guān)細(xì)胞的發(fā)育和分化。它的癌基因功能最先在多發(fā)性骨髓瘤中被識(shí)別，又被稱(chēng)為多發(fā)性骨髓瘤癌基因1[11]，并且是活化的B細(xì)胞如彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的生物標(biāo)志物[12]，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[4]。該研究通過(guò)MUM1/IRF4在各類(lèi)PTCL中陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)果表明，在所有患者中，MUM1/IRF4陽(yáng)性表達(dá)者51例（64.6%），存在高表達(dá)性，這與孫妍等[11]的研究結(jié)果一致。在該研究中，MUMl/IRF4陽(yáng)性表達(dá)者治療有效率為50.0%，MUMl/IRF4陰性表達(dá)者治療有效率80.0%（P＜0.05），推測(cè)MUMl/IRF4可能參與PTCL的發(fā)病過(guò)程，MUMl/IRF4高表達(dá)可能與PTCL預(yù)后不良有關(guān)。成人T細(xì)胞白血病/淋巴瘤在各類(lèi)PTCL中的MUMl/IRF4表達(dá)率最低為40.0%，由此推測(cè)MUMl/IRF4在T淋巴細(xì)胞的活化中也起到重要作用。MUMl/IRF4蛋白抑制劑有可能成為PTCL新的治療靶點(diǎn)。

已有很多研究證明血清β2-MG水平與大多數(shù)類(lèi)型NHL的預(yù)后相關(guān)，主要包括慢性淋巴細(xì)胞性白血病、濾泡性淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、和彌漫性大細(xì)胞淋巴瘤[6,7,13]。有觀察表明血清β2-MG高水平與腫瘤負(fù)荷相關(guān)[7,8,14]，也有研究表明，血清β2-MG高水平對(duì)預(yù)后的影響有限[15]。該研究中，β2-MG陽(yáng)性表達(dá)者治療有效率為44.4%，β2-MG陰性表達(dá)者治療有效率90.5%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。說(shuō)明血清β2-MG高水平在PTCL中亦提示不良預(yù)后。

但對(duì)于血清β2-MG水平和MUM1/IRF4蛋白聯(lián)合表達(dá)對(duì)PTCL的研究目前尚未有人報(bào)道。該研究通過(guò)比較 MUM1/IRF4＋和 MUM1/IRF4-，MUM1＋/β2-MG＋和 MUM1-/β2-MG＋、MUM1＋/β2-MG-、MUM1-/β2-MG-組的治療有效率、中位數(shù)OS、Kaplan-Meier生存分析均顯示MUM1／IRF4、β2-MG蛋白表達(dá)的不良預(yù)后價(jià)值，證明了其表達(dá)對(duì)外周T細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后的負(fù)面作用，反映了腫瘤多基因異常導(dǎo)致的更為不良的疾病后果。

這是一項(xiàng)回顧性研究，盡管僅從已被證實(shí)為PTCL患者的石蠟包塊的中選擇病例，但我們的研究仍表明MUM1/IRF4、β2-MG蛋白聯(lián)合表達(dá)的不良預(yù)后價(jià)值，證明了其表達(dá)對(duì)外周T細(xì)胞淋巴瘤疾病預(yù)后的負(fù)面作用，有助于臨床工作中更精確判斷PTCL的預(yù)后，制定更合理的治療方案。此后將以前瞻性的設(shè)計(jì)，在多中心、大樣本的前提下進(jìn)行臨床相關(guān)性研究，獲得更加穩(wěn)定、客觀的數(shù)據(jù)，指導(dǎo)外周T細(xì)胞淋巴瘤預(yù)后的判斷及分層精準(zhǔn)治療。

[1]Hsi ED,Horwitz SM,Carson KR,et al.Analysis of Peripheral T-cell Lymphoma Diagnostic Workup in the United States[J].Clin Lymphoma Myeloma Leuk，2017，17:193-200.

[2]張慕晨,許彭鵬,鐘慧娟,等.NCCN-IPI對(duì)外周T細(xì)胞淋巴瘤患者化療后的預(yù)后評(píng)估價(jià)值[J].中華血液學(xué)雜志,2017,38(9):772-777.

[3]Montalbán C,Díaz-López A,Dlouhy I,et al.Validation of the NCCN-IPI for diffuse large B-celllymphoma(DLBCL):the addition of β-microglobulin yields a more accurate GELTAMO-IPI[J].Br J Haematol，2017，176:918-928.

[4]張森森,陳麗娟.MUM1/IRF4在淋巴系統(tǒng)腫瘤中的表達(dá)及意義[J].中華血液學(xué)雜志,2013,34(10):907-909.

[5]Satou A,Asano N,Kato S,et al.Prognostic Impact of MUM1/IRF4 Expression in Burkitt Lymphoma (BL):A Reappra isal of 88 BL Patients in Japan[J].Am J Surg Pathol 2017，41:389-395.

[6]Kang J,Yoon S.Relevance of prognostic index with β2-microglobulin for patients with diffuse large B-cell lymphoma in the rituximab era[J].Blood Res，2017，52:276-284.

[7]Kanemasa Y,Shimoyama T,Sasaki Y,et al.Beta-2 microglobulin as a significant prognostic factor and a new risk modelforpatients with diffuse large B-cell lymphoma.Hematol Oncol，2016.

[8]Xie W,Hu K,Xu F,et al.Significance of clinical factors as prognostic indicators for patients with peripheral T-cell non-Hodgkin lymphoma:A retrospective analysis of 252 cases[J].Mol Clin Oncol，2013，1:911-917.

[9]潘戰(zhàn)和,黃慧強(qiáng),蘇安,等.外周T細(xì)胞淋巴瘤血清β2-微球蛋白水平與國(guó)際預(yù)后指數(shù)的關(guān)系及預(yù)后分析[J].白血病·淋巴瘤，2012(9):528-530.

[10]Gallamini A,Stelitano C,Calvi R,et al:Peripheral T-cell lymphoma unspecified (PTCL U):a new prognostic model from a retrospective multicentric clinical study[J].Blood，2004，103:2474-2479.

[11]孫妍,張清媛,張明輝,等.外周T細(xì)胞淋巴瘤MUM1/IRF4蛋白的表達(dá)及其臨床意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2012，17(3):215-218.

[12]Heo MH,Park HY,Ko YH,et al.IRF4/MUM1 expression is associated with poor survival outcomes in patients with peripheral T-cell lymphoma[J].J Cancer 2017，8:1018-1024.

[13]Wang XL,Wang XL,He S.Association of β2-microglobulin with the prognosis of non-Hodgkin's lymphoma:a meta analysis[J].Int J Clin Exp Med 2015，8:3992-3999.

[14]Chen Y,Neelapu S,Feng L,et al.Prognostic significance of baseline peripheral absolute neutrophil,monocyte and serum β2-microglobulin level in patients with diffuse large b-cell lymphoma:a new prognostic model[J].Br J Haematol，2016，175:290-299.

[15]Suzuki K,Terui Y,Yokoyama M,et al.Prognostic value of high thymidine kinase activity in patients with previously untreated diffuse large B-cell lymphoma treated by rituximab,cyclophosphamide,doxorubicin,vincristine and prednisolone [J].Leuk Lymphoma，2013，54(11):2412-2417.