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    大腹園蛛對小鼠的急毒和亞急毒作用

    2018-06-27 07:53:56費虹天姜明明董笑贏
    關(guān)鍵詞:臟器小鼠劑量

    韓 旭,費虹天,姜明明,董笑贏,鄭 菲,陶 冶,費 瑞

    (吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,吉林 長春 130021)

    大腹園蛛(Araneusventricosus)屬蜘蛛目(Araneae)、園蛛科(Araneidae),廣泛分布于全球各地,是人們生活中最常見的蜘蛛之一.目前,全世界共有蜘蛛4萬多種,而我國有4 300多種,其中一些帶有劇毒[1].

    園蛛的記載始于《詩經(jīng)》,而以園蛛作為藥物,則主要是記載在公元741年的《本草拾遺》中.園蛛的藥用價值主要體現(xiàn)在:治療陰狐疝氣、小兒腹股斜疝、背瘡、痔瘡、瘰疬、疳積、咽喉炎和咽喉息肉、鼻炎和鼻息肉、脫肛、中風(fēng)偏癱、腎陽虧虛等,但對其毒性作用研究尚未見報道[2-4].因此,本文對大腹園蛛進(jìn)行了急性和亞急性毒性研究,以為大腹園蛛活性的開發(fā)提供實驗依據(jù).

    1 材料

    1.1 藥品

    大腹園蛛采自吉林省吉林市馮家屯,使用時用烘箱焙干并制成粉末.

    1.2 實驗動物

    實驗動物為體重18~22 g的昆明種純系小鼠,由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供,合格證號:SCXK-(吉)2013-0001.實驗前在室內(nèi)常規(guī)飼養(yǎng)2 d.

    2 實驗方法

    2.1 大腹園蛛對小鼠急性毒性實驗

    選取健康昆明小鼠20只,雌雄各半,隨機分為空白組和實驗組,每組10只.根據(jù)急性毒性劑量分級標(biāo)準(zhǔn),小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)3 d并禁食 12 h后,按15 g/kg劑量,經(jīng)口1次性灌胃給予大腹園蛛粉(Araneusventricosuspowder,AP)溶液0.8 mL;空白組給予同劑量的蒸餾水.各組小鼠經(jīng)灌胃后,在相同條件下分籠飼養(yǎng),室溫20℃~25℃,普通顆粒飼料飼養(yǎng),自由飲水.實驗觀察兩周,定時記錄小鼠反應(yīng)情況及死亡數(shù)量[5-8].

    2.2 大腹園蛛對小鼠最大耐受劑量實驗

    選取健康昆明小鼠20只,雌雄各半,隨機分為空白組和實驗組,每組10只.根據(jù)我國《食品安全性毒理學(xué)評價程序和方法》標(biāo)準(zhǔn),小鼠適應(yīng)飼養(yǎng)3 d并禁食 12 h后,按最大給藥劑量(20 g/kg)和容積(40 mL/kg),分兩次經(jīng)口灌胃給予大腹園蛛粉,間隔4 h;空白組給予等量的蒸餾水.小鼠經(jīng)灌胃后,在相同條件下分籠飼養(yǎng),室溫20℃~25℃,普通顆粒飼料飼養(yǎng),自由飲水.觀察14 d,并記錄動物反應(yīng)情況[5-8].

    2.3 大腹園蛛對小鼠亞急毒實驗

    選取健康昆明小鼠80只,適應(yīng)飼養(yǎng)3 d,隨機分4組,每組20只,雌雄各半.設(shè)對照組和給藥組.給藥組按1.25 g/kg( AP低劑量組),2.5 g/kg( AP中劑量組),5 g/kg(AP高劑量組)分別灌胃給予大腹園蛛粉溶液,每天一次,連續(xù)4周.末次給藥后24 h測定小鼠臟器系數(shù)、血常規(guī)及血液生化指標(biāo)[5-8].

    3 實驗結(jié)果

    3.1 小鼠的急性毒性

    大腹園蛛粉經(jīng)灌胃給予小鼠后,第1天小鼠的自由活動減少,食量下降;第2—3天,小鼠的食量、活動恢復(fù)正常;第14天實驗結(jié)束后,20只給藥小鼠均無死亡,小鼠的活動、毛色、食量等與空白對照組相比,無明顯差異.經(jīng)解剖小鼠,肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、胃腸等臟器,與空白組相比,也無明顯病變和差異.根據(jù)國家急性毒性(LD50)劑量分級標(biāo)準(zhǔn),大腹園蛛的LD50值>15 g/kg(見表1).

    表1 大腹園蛛對小鼠急性毒性(LD50)實驗

    3.2 小鼠的最大耐受劑量

    以最大的允許濃度和動物耐受的最大容積,在一天連續(xù)兩次給藥后,持續(xù)觀察14 d,小鼠無一只死亡,小鼠的活躍程度、外觀特征、生活習(xí)性等均未有異常改變.經(jīng)解剖小鼠觀察其心、肝、脾、肺、腎、脾、胃等臟器,與對照組相比,未發(fā)現(xiàn)有明顯的病變和差異.表明昆明小鼠對大腹園蛛的最大耐受劑量為20 g/kg.

    3.3 小鼠的亞急性毒性

    3.3.1 一般癥狀

    給藥期間,沒有發(fā)現(xiàn)小鼠中毒和其他異?,F(xiàn)象.小鼠進(jìn)食量和飲水量正常、大小便無異物、生長發(fā)育狀態(tài)良好.給藥組與對照組相比,小鼠體重增長無明顯變化,統(tǒng)計分析結(jié)果差異不顯著(P>0.05),表明大腹園蛛粉對小鼠生長發(fā)育無影響(見表2).

    表2 大腹園蛛對小鼠體重的影響 g

    3.3.2 臟器系數(shù)

    內(nèi)臟是生物體發(fā)揮生理功能的主要場所,其結(jié)構(gòu)和形態(tài)改變可直觀反映機體的健康情況,而臟器系數(shù)是毒理實驗中的常用指標(biāo),可反映毒物對機體的損傷程度[10].據(jù)此,本實驗檢測了大腹園蛛粉對小鼠臟器的影響,結(jié)果(見表3)表明,給藥組與對照組相比,心、肝、脾、肺、腎的重量及臟器系數(shù)無明顯變化,統(tǒng)計分析結(jié)果顯示各組差異不顯著(P>0.05),表明小鼠經(jīng)給藥后,臟器未受影響.

    表3 大腹園蛛對小鼠相對臟器系數(shù)的影響

    3.3.3 血常規(guī)指標(biāo)檢測

    血液對機體的新陳代謝、內(nèi)環(huán)境以及功能調(diào)節(jié)都有重要的作用,而血常規(guī)檢測是對血液中的紅細(xì)胞、白細(xì)胞以及血小板等系統(tǒng)進(jìn)行的測定與分析,因此,在毒理方面,可通過血常規(guī)檢測檢驗外來物質(zhì)是否對血液成分造成影響,從而發(fā)現(xiàn)組織或器官的病變.本實驗經(jīng)連續(xù)給藥4周后,給藥組與實驗組相比,白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板的數(shù)量無明顯差異(見表4).統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示,各組間差異不顯著(P>0.05),表明大腹園蛛粉對小鼠血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板數(shù)量無影響.

    3.3.4 血液生化指標(biāo)檢測

    血液生理生化指標(biāo)也是毒理學(xué)實驗常用的測評指標(biāo),因為血液生理指標(biāo)能反映機體的健康狀況,因此對該指標(biāo)的檢測可為疾病診斷和監(jiān)測提供依據(jù)[11].本實驗經(jīng)連續(xù)給藥4周后,給藥組與實驗組相比,各劑量組中除谷草轉(zhuǎn)氨酶和尿酸有所改變之外,其他各項生化指標(biāo)均無明顯差異(P>0.05),表明大腹園蛛粉對小鼠機體無明顯有害影響(見表5).

    表5 大腹園蛛對小鼠生化指標(biāo)的影響

    4 討論

    大腹園蛛是我國最常見的蜘蛛種類之一.據(jù)報道,大腹園蛛具有很好的治療疾病作用.為探究大腹園蛛的安全性并為臨床安全用藥提供可靠依據(jù),我們對成體大腹園蛛進(jìn)行了系列的毒性實驗研究[1,8].

    急性和亞急性毒性實驗是評價外源化合物安全的重要指標(biāo).其中LD50是指在實驗動物群體中能引起半數(shù)動物死亡的劑量,是衡量藥物急性毒性高低的常用指標(biāo)[9-10].我們的急性毒性實驗結(jié)果顯示,實驗組小鼠無一死亡.根據(jù)國家急性毒性劑量分級標(biāo)準(zhǔn),判定成體大腹園蛛的LD50值>15 g/kg,屬于實際無毒級.

    亞急性毒性實驗是指人或?qū)嶒瀯游锶径酒诨蚪佑|毒物時間不長(一般為10 d乃至數(shù)月)情況下對機體可能造成的功能或機體損害,它可以進(jìn)一步了解受試物的長期毒性.因為即使是依據(jù)急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)劃分為相對無毒的物質(zhì),但由于持續(xù)存在于環(huán)境中或長期食用,在機體內(nèi)具有一定的生物蓄積能力,也有可能產(chǎn)生不良的致病效應(yīng)[11].本文通過對小鼠體重、臟器系數(shù)、血液細(xì)胞指數(shù)和生化指標(biāo)上的變化情況進(jìn)行分析,研究了大腹園蛛的亞急性毒性作用,以進(jìn)一步判定大腹園蛛的安全性.經(jīng)過檢測小鼠的體重變化和心、肝、脾、肺、腎的形態(tài)學(xué)及血液生理指標(biāo)發(fā)現(xiàn),大腹園蛛低、中、高三個劑量組與空白對照組相比,各項指標(biāo)均無明顯差異,表明大腹園蛛粉不能影響小鼠體重、臟器和血液指標(biāo)改變,無一定蓄積性.

    肝臟和腎臟是人體內(nèi)物質(zhì)代謝最為活躍的重要器官,它能清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物和毒物.本實驗通過對肝臟和腎臟生化指標(biāo)的檢測,探究了大腹園蛛的影響.結(jié)果證實,各組中谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、白蛋白、總蛋白、尿素氮和對照組相比,均無明顯差異;而谷丙轉(zhuǎn)氨酶和尿酸與對照組相比雖有一定變化,但仍在正常范圍內(nèi),且與對照組及組間無明顯差異.結(jié)合其他相關(guān)臟器指標(biāo),我們認(rèn)為大腹園蛛粉對小鼠肝臟和腎臟無明顯不良反應(yīng).至于更深入的和長期慢性毒性作用的研究尚待進(jìn)一步進(jìn)行.

    本研究通過急性毒性和亞急性毒性實驗均未發(fā)現(xiàn)大腹園蛛粉有明顯的毒性作用,表明大腹園蛛具有較好的安全性.這不僅為今后進(jìn)一步的藥物開發(fā)提供了理論和實驗依據(jù),而且也為其生物活性研究奠定了基礎(chǔ).

    [參 考 文 獻(xiàn)]

    [1] 韓旭,高久春,張歡,等.大腹園蛛的細(xì)胞及遺傳生殖毒性研究[J].東北師大學(xué)報(自然科學(xué)版),2016,48(2):118-121.

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    [11] 張斌.蘇丹紅對昆明小鼠的亞急性毒性的病理學(xué)研究[D].石家莊:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

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