不同支氣管沖洗液結核分枝桿菌檢測方法對菌陰肺結核的診斷價值

段緋

貴陽市花溪區(qū)疾病預防控制中心檢驗科，貴州貴陽 550025

肺結核是一種臨床常見的肺部慢性傳染性疾病，因結核分枝桿菌感染引起，病程漫長，累及全身多個臟器[1]。菌陰肺結核是指經(jīng)過1次結核菌培養(yǎng)與3次痰涂片檢查結果為陰性的肺結核患者，傳染性較低。多數(shù)患者對菌陰肺結核知識不了解，如果不及時采取有效的診治措施就會延誤病情，轉為陽性，不利于患者的愈后[2]。目前臨床缺乏菌陰肺結核的特異性診斷方法，該文就該轄區(qū)2016年10月—2017年10月收治的60例住院菌陰肺結核患者給予不同支氣管沖洗液檢測的診斷價值進行探討，旨在為臨床提供借鑒經(jīng)驗，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

觀察對象為該轄區(qū)收治的60例住院菌陰肺結核患者，其中男患34例，女患26例；年齡22～75歲，平均（41.2±6.9）歲；病程 1 個月～3 年，平均（1.3±0.5）年；體質(zhì)量 48～79 kg，平均（63.4±5.7）kg。

納入標準：①所有患者均符合中華醫(yī)學會關于肺結核的診斷標準，經(jīng)支氣管鏡檢查確診；②痰涂片找抗酸桿菌檢測3次及以上均為陰性，結核菌培養(yǎng)一次為陰性；①獲得醫(yī)學倫理會批準，均簽署《知情同意書》。排除標準：①活動性肺結核患者者；②孕婦、哺乳期婦女；③患者有血痰、無力、消瘦等癥狀。

1.2 檢測方法

支氣管鏡檢查：采用QIF-BP66P型便攜式纖維支氣管鏡進行檢查，局部麻醉后將支氣管鏡從鼻腔插入支氣管，觀察肺及支氣管黏膜有無異常癥狀。有明顯病變患者將5～10 mL生理鹽水對整個肺臟進行徹底沖洗，吸引器吸盡所有沖洗液并裝于標本瓶中，檢測2～3次。無明顯病變患者可將支氣管鏡插入可疑部位，對病段或亞段支氣管開口處用生理鹽水沖洗。

支氣管沖洗液涂片：將支氣管鏡采集的沖洗液標本進行實驗室檢測，嚴格按照《結核病診斷實驗室檢驗規(guī)程》進行操作。通過萋-尼氏染色抗酸染色法檢測抗酸桿菌，陽性：超過3條抗酸桿菌/300視野。

結核菌培養(yǎng)：采用BACTEC MGIT 960型全自動分枝桿菌快速培養(yǎng)儀器進行標本分離、培養(yǎng)。

噬菌體生物擴增法：采用武漢康珠生物技術有限公司提供的結核分枝桿菌檢測試劑盒進行檢測，陽性：①多個噬菌體斑融合成透明狀；②噬菌斑數(shù)量超過20個；二者滿足其中一個即為陽性。

熒光定量PCR法：采用KAPA定量熒光PCR法檢測沖洗液結核分枝桿菌的基因數(shù)量，陽性：結核分枝桿菌基因數(shù)量超過1×103拷貝/mL。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 18.00統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)，用（%）表示計數(shù)資料，組間對比用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 陽性檢測結果

結核菌培養(yǎng)檢測陽性率為56.67%，支氣管沖洗液涂片檢測陽性率為30.00%，噬菌體生物擴增法檢測陽性率為15.00%，熒光定量PCR法檢測陽性率為33.33%，見表 1。

表1 不同支氣管沖洗液陽性檢測結果

2.2 不同檢測方法陽性率比較

結核菌培養(yǎng)檢測的陽性率明顯優(yōu)于其他方法（P＜0.05）；噬菌體生物擴增法檢測的陽性率明顯低于其他方法（P＜0.05），見表 2。

表2 不同支氣管沖洗液陽性檢測結果[n（%）]

3 討論

我國是肺結核高發(fā)國家，其中菌陰肺結核患者超過200萬，約占所有肺結核患者的50%左右[3]。病灶局限、化療、含有L型結核菌、免疫功能障礙等因素使痰涂片結果為陽性，菌陰肺結核的傳染性較陽性肺結核低，所以，早期明確結核分枝桿菌性質(zhì)對治療方案的選擇具有指導意義。

支氣管鏡檢查是臨床診斷肺結核的有效方法，可以直觀觀察病灶情況。利用活檢鉗、毛刷刺激肺泡、支氣管，生理鹽水沖洗可以疏通支氣管，增加排痰量，采集沖洗液標本進行細菌學檢查。同時，將生理鹽水注入肺實質(zhì)、遠端氣道，病灶接觸范圍廣，刺激咳嗽，有利于排除結核桿菌，吸引器能夠搜集大量沖洗液，提高檢出率[4-5]。抗酸染色涂片是細菌學檢查的基本方法，通過石炭酸復紅初染、鹽酸酒精處理、堿性美蘭復染后結核分枝桿菌為紅色，對結核分枝桿菌敏感性強。分枝桿菌細胞壁中的肽聚糖外周包裹著大量脂質(zhì)，難以著色，且與燃料結合后酸性脫色劑難以脫色[6-7]。所以，通過抗酸染色可以判斷患者體內(nèi)是否存在結核分枝桿菌，操作簡單。該文中60例患者檢出陽性率為56.67%，檢出率高，是臨床診斷肺結核的金標準[8]。但是結核菌培養(yǎng)抗酸染色耗時約為20 d甚至更長，檢查費用昂貴，存在明顯的不足。熒光定量PCR法利用熒光標記的寡核苷酸探針或熒光染料，對結核菌的某個特定核酸序列的DNA拷貝數(shù)量進行快速體外擴增至百萬倍，通過DNA探針、PCR雜交技術觀察熒光變化情況，記錄NDA模板定量[9]。具有敏感度高、檢測時間短，在早期診斷中有著明顯優(yōu)勢。但是該方法對儀器設備、技術、人員要求高，假陽性結果較多，如表1中陽性率僅為33.33%。噬菌體生物擴增法利用結核分枝桿菌噬菌體對活性結核分枝桿菌的感染作用大量繁殖，裂解菌體后釋放子代噬菌體，快速感染指示細胞，裂解后產(chǎn)生噬菌斑[10]。而其他不能感染的噬菌體加入殺毒劑后會失去活性，通過噬菌斑數(shù)量可以判斷是否存在結核分枝桿菌。該法對技術、檢驗設備要求低，24 h即可檢出。該文中陽性檢出率僅為15.00%，可能與標本采集不當、活性菌量少、感染時間、噬菌體濃度等因素有關，還需擴大試驗樣本，提高準確率[11]。

綜上所述，結核菌培養(yǎng)對菌陰肺結核診斷敏感性高，是臨床診斷肺結核的金標準。支氣管沖洗液涂片、噬菌體生物擴增法陽性率也較高，而噬菌體生物擴增法陽性檢出率相對較低，應結合臨床實際情況選擇最佳診斷方式，盡早確診，及時診治。

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