理心湯對動脈粥樣硬化心肌缺血大鼠生長因子的影響

孫 影 于清華 孫光偉

(吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長春 130021)

積極有效的預(yù)防及防治結(jié)合可降低冠心病危害性，具有重要的社會意義及經(jīng)濟意義〔1〕。目前西醫(yī)學(xué)治療主要有藥物治療和血運重建治療，而藥物治療效果不夠滿意，介入治療仍無法完全克服支架術(shù)后再狹窄、延遲性血栓、微血管病變等問題，外科搭橋也受經(jīng)費和創(chuàng)傷大等的限制。本研究通過觀察以益氣養(yǎng)血活血通絡(luò)為法組方的理心湯對實驗性動脈粥樣硬化心肌缺血大鼠生長因子的影響，探討理心湯治療冠心病作用機制。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1動物 SD大鼠，雄性，111只，體重160～190 g，動物等級：SPF級；動物質(zhì)量合格證號：11400700201068。

1.1.2藥物 高脂飼料：膽固醇、膽酸鈉、豬大油、白糖、丙基硫氧嘧啶，基礎(chǔ)飼料由本實驗室加工，供大鼠食用。維生素D3注射液批號：130419，鹽酸異丙腎上腺素注射液批號：41170301，益心舒膠囊批號：20161003，辛伐他汀片批號：SP189。理心湯方藥組成：人參、丹參、黃芪、川芎、當(dāng)歸、三七、莪術(shù)、郁金，加入6倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，合并水煎液，濃縮，干燥，粉碎，等量遞增法加入輔料適量制得(3.90 g生藥/g)，由吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院化學(xué)所徐雅娟課題組提供，接受日期：20161214。

1.1.3試劑 血小板衍化生長因子(PDGF)-B、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，批號均為E20170301A，生產(chǎn)日期：2017.03，有效期至2017.09。以上酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒均為美國RD生物科學(xué)公司產(chǎn)品，上海源葉生物科技有限公司分裝。

1.1.4儀器 JA2003B天平，上海越平科學(xué)儀器有限公司制造。JJ200精密電子天平、Y-2000型電子天平，常熟雙杰測試儀器廠制造。DNM9602酶標(biāo)儀，北京普朗新技術(shù)有限公司制造。KDC-2046低速冷凍離心機，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司。752紫外光柵分光光度計，上海第三分析儀器廠制造。

1.2方法

1.2.1動物分組 隨機分成空白對照組13只，模型組23只，辛伐他汀組、益心舒膠囊組及理心湯高、中、低劑量組各15只。

1.2.2建立動物模型〔2，3〕除空白對照組外，所有大鼠給予維生素D3注射液(60 U/kg)腹腔注射，在第2、4周再次腹腔注射維生素D3(10 U/kg)，共3次。同時給予高脂飼料 (4.0%膽固醇、0.5%膽酸鈉、10.0%豬大油、5.0%白糖、0.2%丙基硫氧嘧啶，80.3%基礎(chǔ)飼料) 喂養(yǎng)，連續(xù)4 w。第五周開始造模大鼠改為灌胃高脂乳劑(豬油10 g、吐溫-80 3 g、丙二醇5 g、膽固醇5 g、膽酸鈉1 g、丙基硫氧嘧啶0.5 g、蔗糖5 g、蒸餾水70.5 g)10 ml/kg，喂正常飼料，繼續(xù)4 w。

1.2.3給藥方式和劑量 各組造模第1天同時灌胃給藥?？瞻讓φ战M、模型組灌胃蒸餾水(10 ml/kg)；辛伐他汀組，予2 mg/kg辛伐他丁片灌胃；益心舒膠囊組，按照0.65 g/kg給予益心舒膠囊灌胃；理心湯高、中、低劑量組，分別灌胃15.00 g、7.50 g、3.75 g生藥·kg-1·d-1(相當(dāng)于臨床等效劑量2.0、1.0、0.5倍)，至實驗結(jié)束。每周稱體重1次，根據(jù)體重調(diào)整給藥劑量。8 w后，連續(xù)3 d多點皮下注射異丙腎上腺素，劑量為4 mg/kg，制備心肌缺血損傷大鼠模型。

1.2.4測定指標(biāo) 第三次給予異丙腎上腺素后30 min，給予水合氯醛麻醉，腹主動脈采血后離心10 min，取血清備用，摘取心臟、肝臟和主動脈。酶聯(lián)免疫法測定PDGF-B、bFGF、TGF-β1、VEGF。

1.2.5病理組織學(xué)觀察 臟器稱重后，取心臟左心室心肌、肝臟左葉、完整主動脈(從主動脈根部至髂總動脈分叉處)，用10%甲醛固定，石蠟包埋后連續(xù)切片，HE染色，光鏡下觀察各臟器病理改變。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19.0軟件行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1理心湯對各組PDGF-B、bFGF、VEGF和 TGF-β1含量的影響 與空白對照組比較模型組PDGF-B含量明顯增加(P<0.01)，辛伐他汀組、益心舒膠囊組、理心湯高、中、低劑量組PDGF-B含量與模型組比較均有明顯下降(P<0.05或P<0.01)。模型組bFGF含量與空白對照組比較有增加趨勢，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。辛伐他汀組、益心舒膠囊組、理心湯高、中、低劑量組均有降低PDGF-B含量趨勢，但與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。與空白對照組比較，模型組VEGF含量明顯增加(P<0.05)。辛伐他汀組、益心舒膠囊組、理心湯高、中劑量組VEGF含量與模型組比較均有明顯降低(P<0.01或P<0.05)。模型組TGF-β1含量與空白對照組比較明顯降低(P<0.05)。理心湯高劑量組有增加TGF-β1趨勢，但與模型組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 理心湯對實驗大鼠PDGF-B、bFGF、VEGF和 TGF-β1含量的影響

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001；與辛伐他汀組比較：4)P<0.05，5)P<0.01，6)P<0.001；與益心舒膠囊組比較：7)P<0.05，8)P<0.01，9)P<0.001

2.2各組心臟、主動脈、肝臟病理檢查結(jié)果 對照組心臟、肝臟與主動脈未見異常形態(tài)改變，心臟心肌細胞排列規(guī)整，未見壞死、水腫等形態(tài)改變；肝臟未見脂肪變性、未見空泡變性、主動脈各層組織規(guī)整、連續(xù)。模型組各臟器可見典型病變，心臟可見心肌壞死灶，可見心肌間質(zhì)炎細胞浸潤，間質(zhì)疏松、水腫等改變；肝臟內(nèi)肝細胞疏松變性、空泡變性，出現(xiàn)肝臟脂肪變性的形態(tài)改變；主動脈中膜內(nèi)可見典型的鈣化物質(zhì)沉積、說明動物模型復(fù)制成功。辛伐他汀組心肌間質(zhì)可見疏松、水腫等輕度改變，藥物對肝臟脂肪變性的改善作用不明顯，肝臟內(nèi)仍可見脂肪變性，肝細胞疏松改變；主動脈內(nèi)未見明顯的鈣化沉積；藥物可以有效緩解心血管系統(tǒng)臟器的病變。益心舒膠囊組各臟器病變均有改善作用，心肌間質(zhì)疏松、水腫等輕度改變，主動脈內(nèi)可見中等程度的鈣化沉積；肝臟內(nèi)可見肝細胞疏松變性；藥物可以有效緩解心血管系統(tǒng)臟器的病變。高劑量組各臟器病變治療效果最佳，心肌間質(zhì)僅見疏松、水腫等改變，主動脈內(nèi)未見明顯的鈣化沉積。肝臟內(nèi)脂肪變性程度減輕。中劑量組各臟器病變有一定的療效，心肌間質(zhì)疏松、水腫、炎細胞浸潤等改變，主動脈內(nèi)可見明顯的鈣化沉積。肝臟內(nèi)脂肪變性程度減輕。低劑量組各臟器病變有一定的治療效果，心肌間質(zhì)疏松、水腫等改變，同時可見心肌細胞壞死改變；主動脈內(nèi)未見明顯的鈣化沉積，可見動脈中膜細胞增生；肝臟內(nèi)脂肪變性程度減輕?？梢姡硇臏捎行Ц纳菩呐K、肝臟和主動脈損傷，以高劑量組治療效果最佳。見圖1。

圖1 各組動脈粥樣硬化心肌缺血病理照片(×400)

3 討 論

現(xiàn)代研究證實〔4〕，PDGF可刺激結(jié)締組織細胞的分裂增殖、細胞趨化和血管收縮等，參與動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展，同時可刺激動脈中膜平滑肌細胞向合成表型轉(zhuǎn)變，具有促進平滑肌細胞增殖的能力。VEGF具有很強的促進血管內(nèi)皮細胞分裂、增生和遷移，加速血管再生的能力，并能增強毛細血管的通透性。VEGF在正常心肌含量極低，心肌缺血、缺氧能刺激其表達〔5〕。理心湯能夠明顯降低PDGF-B和VEGF含量，表明其可能是通過抑制血管平滑肌增殖而起到保護心臟作用。本方為孫影主任醫(yī)師臨床經(jīng)驗方，主要用于胸痹病史較長，胸痛發(fā)作頻繁，位置固定不移，疼痛明顯者，瘀血痹阻較重，及血瘀兼有氣血不足之象的患者，臨床辨證屬心氣不足，血滯心脈。治療以益氣養(yǎng)血、活血通絡(luò)為法，由人參、丹參、三七、黃芪等8味中藥組成，對于冠心病心絞痛、冠狀動脈支架植入術(shù)后心絞痛、冠狀動脈支架植入術(shù)后再狹窄、冠心病多支血管病變不適合支架植入術(shù)及冠脈搭橋術(shù)患者，經(jīng)多年臨床驗證，療效確切。本文通過動物試驗進一步研究理心湯治療冠心病的作用機制，驗證其客觀療效，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

4 參考文獻

1王宏宇.冠心病的合理干預(yù)策略——EUROPA試驗的啟示〔J〕.中國民康醫(yī)學(xué)雜志，2005；17(2)：65-9.

2周 紅，吳曉燕，袁藝標(biāo)，等.三種劑量維生素D3結(jié)合高脂飼料建立大鼠動脈粥樣硬化模型的比較〔J〕.中國動脈硬化雜志，2012；20(11)：995-8.

3張 憲，陳 陽.一種建立大鼠動脈硬化模型的方法〔J〕.中國醫(yī)藥指南，2015；13(3)：4-5.

4馮 海，張志文，陳學(xué)明.血小板衍化生長因子在動脈粥樣硬化和支架再狹窄中作用機制的研究進展〔J〕.血管與腔內(nèi)血管外科雜志，2016；2(6)：514-8.

5其其格.冠心病不穩(wěn)定性心絞痛氣虛血瘀證及炎癥相關(guān)性的研究〔D〕.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2010.