核相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2對(duì)LOVO細(xì)胞裸鼠移植瘤的影響

韓 梅 ，王 暉，東 帥，史剛剛，郝敬鵬 ，何 彬

直腸癌是全世界第三常見(jiàn)的惡性腫瘤[1-2]。直腸癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的放射抗拒性，且放射治療還會(huì)引起消化道出血、疼痛和穿孔等副作用[3-4]。多項(xiàng)研究顯示，人類(lèi)Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(核相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2，Runx2)在調(diào)控骨骼形成和成骨細(xì)胞分化進(jìn)程中發(fā)揮著極為重要的作用[5]，在前列腺癌、結(jié)腸癌等多種癌變組織中均有異常表達(dá)[6-7]，提示Runx2可能參與癌細(xì)胞的增殖活化和進(jìn)展。研究顯示，該蛋白對(duì)與癌細(xì)胞放射敏感性相關(guān)的信號(hào)通路具有調(diào)控作用[8]。

1 材料與方法

1.1 材料及來(lái)源 凍存直腸癌LOVO細(xì)胞購(gòu)買(mǎi)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院。31例直腸癌患者的癌組織及與之相配對(duì)的癌旁組織標(biāo)本由天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院提供，組織樣品均較為新鮮，未接受任何抗癌相關(guān)治療。

胰蛋白酶，美國(guó)Sigma公司；PBS磷酸緩沖液，Hyclone；細(xì)胞培養(yǎng)箱，Heraeus Sepatech 公司。DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清和PBS均購(gòu)自Hyclone，Trizol試劑盒購(gòu)自Invitrogen；BCA蛋白濃度測(cè)試試劑盒(增強(qiáng)型)、5×SDS蛋白上樣緩沖液、20×TBS緩沖液等購(gòu)買(mǎi)于南京建成生物。細(xì)胞處理等過(guò)程中使用的超凈工作臺(tái)提供自藝斯高上海貿(mào)易有限公司。人類(lèi)Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(Runx2)一抗為兔抗人多克隆抗體，Runx2的二抗為辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔多克隆抗體；內(nèi)參GAPDH采用小鼠抗人單克隆抗體，其二抗為HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠多克隆抗體，所有抗體均由艾康生物技術(shù)（杭州）有限公司提供。Runx2 siRNA和pcDNA3.1-Runx2由上海生工生物有限公司合成提供。

45只體質(zhì)量約20 g的雄性成年BALB/C裸鼠(7～8周齡)由天津醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（津）2012-0001，動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK（津）2014-0002。所有大鼠于室溫25 ℃，濕度50%～80%，SPF環(huán)境下自由飲水和采食。

1.2 RT-PCR檢測(cè)Runx2 mRNA的表達(dá) 癌組織及與之相配對(duì)的癌旁組織樣品每個(gè)檢測(cè)重復(fù)3次。通過(guò)Oligo 7.36 Demo軟件設(shè)計(jì)引物，Runx2上游引物：5’-ACCAGCAGCACTCCATATCTCTAC-3’，下游引物：5’-CTTCCATCAGCGTCAACACC ATC-3’；內(nèi)參GAPDH上游引物：5’-AACATCAT CCCTGCCTCTACTGG-3’，下游引物：5’-CCTCCG ACGCCTGCTTCAC-3’。提取細(xì)胞RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用2-ΔΔCt分析法，以GAPDH基因作為內(nèi)參，測(cè)定Runx2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃變性30 s，55 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 45 s，共 35個(gè)循環(huán)，72 ℃min。本組結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用t檢驗(yàn)。

1.3 基因轉(zhuǎn)染 電穿孔法分別將Runx2 siRNA和重組表達(dá)載體pcDNA3.1-Runx2轉(zhuǎn)染直腸癌LOVO細(xì)胞后，G418篩選得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。將凍存直腸癌LOVO細(xì)胞置于60 ℃恒溫水浴箱，30 s內(nèi)進(jìn)行快速?gòu)?fù)蘇。融化后迅疾將細(xì)胞轉(zhuǎn)入EP管并向其中加入DMEM培養(yǎng)基，重復(fù)小心吹打細(xì)胞使其均勻分布，隨后離心棄上清液。將復(fù)蘇完成的直腸癌LOVO細(xì)胞用DMEM完全培養(yǎng)基稀釋調(diào)整為1×106/mL的密度。將直腸癌LOVO細(xì)胞隨機(jī)平均分為3組，對(duì)照組(不實(shí)施任何基因轉(zhuǎn)染)、Runx2上調(diào)組(將pcDNA3.1-Runx2進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染)、Runx2下調(diào)組(將Runx2 siRNA進(jìn)行基因轉(zhuǎn)染)。

將處于生長(zhǎng)旺盛狀態(tài)的直腸癌LOVO細(xì)胞分別用胰蛋白酶消化并收集細(xì)胞，用HeBS液(140 mmol/L NaCl，5 mmol/L KCl，0.75mmol/L Na2HPO4，6 mmol/L Glucose，25 mmol/L Hepes)重懸、計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度至5×106/mL。每次取200μL細(xì)胞懸液，分別加入3組電擊杯中，向電擊杯中分別再加入4μg生理鹽水、pcDNA3.1-Runx2、Runx2 siRNA。電擊后室溫靜置2 min。將3組直腸癌LOVO細(xì)胞分別加入到3份含有2 mL細(xì)胞培養(yǎng)液的六孔細(xì)胞培養(yǎng)板和96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，置于細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。將3組細(xì)胞分別取出，去培養(yǎng)基并加入含有800 μg/mL G418的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。定期換液并更換篩選培養(yǎng)基，將G418濃度減半繼續(xù)篩選培養(yǎng)12～15 d。當(dāng)看到有穩(wěn)定的有抗性的克隆出現(xiàn)，及時(shí)停藥，對(duì)其進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。

1.4 48 h后檢測(cè)細(xì)胞中Runx2 mRNA的表達(dá) 轉(zhuǎn)染約48 h，采用熒光當(dāng)量RT-PCR法，分別檢測(cè)3組直腸癌LOVO細(xì)胞中Runx2基因相對(duì)表達(dá)水平。采用Western blotting方法測(cè)定其蛋白相對(duì)表達(dá)水平。每個(gè)檢測(cè)重復(fù)3次。通過(guò)Oligo 7.36 Demo軟件設(shè)計(jì)引物，Runx2上游引物：5’-ACCAGCAGCACTCCATATCTCTAC-3’，下游引物：5’-CTTCCATCAGCGTCAACACCATC-3’；內(nèi)參GAPDH上游引物：5’-AACATCATCCCT GCCTCTACTGG-3’，下游引物：5’-CCTCCGA CGCCTGCTTCAC-3’。提取細(xì)胞RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，凝膠圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行光密度分析，以GAPDH基因作為內(nèi)參，測(cè)定Runx2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平。PCR反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃變性 30 s，55 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 45 s，共35個(gè)循環(huán),72 ℃ 7 min。

1.5 48 h后檢測(cè)細(xì)胞中Runx2蛋白的表達(dá) 轉(zhuǎn)染48 h后取3組細(xì)胞，根據(jù)BCA試劑盒(北京益德益華生物有限公司)提取并測(cè)定細(xì)胞蛋白濃度[35]：將細(xì)胞裂解并稀釋至相同的蛋白濃度，100 ℃煮沸5 min使蛋白變性。每組取蛋白40 μg，10% SDSPAGE凝膠電泳(70V，30 min；100 V，90 min)；轉(zhuǎn)膜(200 mA，3 h)至PVDF膜；5%脫脂牛奶室溫封閉2 h (或4 ℃過(guò)夜)；一抗1：500，室溫孵育2 h (或4 ℃過(guò)夜)；TPBS洗滌3次，PBS洗滌1次。之后進(jìn)行蛋白免疫印跡的反應(yīng)，拍照記錄后進(jìn)行軟件的圖像分析，測(cè)定3組細(xì)胞中Runx2蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)水平。

1.6 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖 在直腸癌LOVO細(xì)胞經(jīng)過(guò)基因轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)48 h，采用CCK-8法酶標(biāo)儀下分別測(cè)定3組直腸癌細(xì)胞的增殖活化能力變化。轉(zhuǎn)染48 h，將3組細(xì)胞分別收集接種到細(xì)胞培養(yǎng)96孔板上。細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁后繼續(xù)培養(yǎng)48 h，向各個(gè)孔中分別加入20 μL CCK-8試劑，振蕩均勻。將3組癌細(xì)胞放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)72 h，取出細(xì)胞，利用酶標(biāo)儀測(cè)定OD490值。

1.1 乳腺癌組織來(lái)源 本研究中28例乳腺癌組織標(biāo)本均來(lái)源于南昌市第三人民醫(yī)院，入選標(biāo)本為2016年1月至2017年6月間手術(shù)切除的乳腺癌組織。入選標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均行病理檢查確診為原發(fā)性乳腺癌［2］，并經(jīng)高年資醫(yī)生根據(jù)AJCC乳腺癌分期系統(tǒng)確定患者臨床分期［3］；②所有患者無(wú)嚴(yán)重的肝、腎、心、腦等重要臟器損害；③研究符合倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，并通過(guò)了院倫理學(xué)委員會(huì)的批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書(shū)；④年齡20～81歲，平均年齡（48.75±12.15）歲，體重42～60 kg，平均體重（44.00±3.86）kg。

1.7 克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察Runx2對(duì)LOVO的放射敏感性的影響 轉(zhuǎn)染48 h之后將3組細(xì)胞消化、計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞的濃度，將3組細(xì)胞分別接種到不同細(xì)胞數(shù)于6孔培養(yǎng)板中。培養(yǎng)24～30 h，對(duì)3組細(xì)胞分別給予0、2、4、6、8、10 Gy的單劑量照射(6MV X射線，30×30 cm2照射野，源皮距100 cm)，靜置培養(yǎng)14 d。用1%結(jié)晶紫固定液固定20 min。顯微鏡下計(jì)數(shù)≥50個(gè)細(xì)胞的克隆。計(jì)算不同劑量照射下的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)：集落形成率(PE)=集落數(shù)/種植細(xì)胞數(shù)×100%，存活分?jǐn)?shù)(SF)=實(shí)驗(yàn)組PE/對(duì)照組PE。GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行劑量存活曲線擬合，計(jì)算相應(yīng)的D0、N及SF2。Do為曲線指數(shù)區(qū)下降63%所需劑量, Do越大,放射抗拒性增強(qiáng); 2Gy時(shí)存活分?jǐn)?shù)SF2是代表細(xì)胞放射敏感性的重要指標(biāo)。若將直線部分外推與縱坐標(biāo)相交點(diǎn)的數(shù)值稱(chēng)為外推值N,代表細(xì)胞內(nèi)靶的個(gè)數(shù)或所需擊中靶的次數(shù)[9]。

1.8 TUNEL法檢測(cè)凋亡 轉(zhuǎn)染培養(yǎng)48 h，從細(xì)胞培養(yǎng)箱之中取出3組細(xì)胞分別測(cè)定各組中直腸癌LOVO細(xì)胞的凋亡情況。首先輕輕吹打細(xì)胞，使之均勻分布；洗滌細(xì)胞后滴加原位末端標(biāo)記反應(yīng)混合液50μL，在濕盒中37 ℃孵育1 h；滴加POD2轉(zhuǎn)化液50μL，濕盒37 ℃孵育30 min，pH7.4的磷酸緩沖液(PBS)沖洗3次，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。反應(yīng)過(guò)后，用HE進(jìn)行復(fù)染并在顯微鏡下分析圖像，棕黃色細(xì)胞核的細(xì)胞為凋亡細(xì)胞，每張切片高倍光學(xué)顯微鏡下(×400)隨機(jī)選取10個(gè)視野,計(jì)算細(xì)胞總數(shù)和凋亡細(xì)胞總數(shù),以凋亡細(xì)胞總數(shù)/細(xì)胞總數(shù)計(jì)算出細(xì)胞凋亡率。

1.9 裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Runx2表達(dá)聯(lián)合X射線照射對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用 選取45只體質(zhì)量和日齡相近的裸鼠，隨機(jī)平均分3組(每組15只)，即對(duì)照組、基因下調(diào)組和基因上調(diào)組。取轉(zhuǎn)染48 h后的3組細(xì)胞胰酶消化重懸，分別接種于相應(yīng)組裸鼠右腋皮下0.5 cm處。裸鼠在無(wú)菌、通風(fēng)、潔凈的SPF級(jí)動(dòng)物房中飼養(yǎng)，接種后1周左右，在裸鼠的接種區(qū)出現(xiàn)米粒大小的移植瘤。各組裸鼠麻醉，并固定于解剖板。放療應(yīng)用上述6MV X射線，皮源距（SSD）為100 cm，照射野為2 cm×2 cm，吸收劑量率200 cGy/min，2 Gy/次。1次/d，5次/周，總劑量20 Gy。40 d后處死裸鼠，分離腫瘤組織，計(jì)算腫瘤瘤塊體積。該實(shí)驗(yàn)重復(fù)進(jìn)行3次。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；并用表示，多組間均數(shù)采用單因素方差分析，兩組組間比較采用t檢驗(yàn)，3組數(shù)據(jù)間兩兩比較采用SNK-Q檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 直腸癌及癌旁組織中Runx2 mRNA的表達(dá) 圖1所示為31例直腸癌患者癌組織和相應(yīng)癌旁組織中Runx2基因相對(duì)表達(dá)量。在直腸癌癌組織中的該分子基因相對(duì)表達(dá)水平為0.83±0.31，癌旁組織中為0.43±0.25（P＜0.05）。

2.2 轉(zhuǎn)染48 h后Runx2 mRNA的表達(dá) 表1、圖2所示為轉(zhuǎn)染48 h后，3組Runx2基因和蛋白相對(duì)表達(dá)水平，與對(duì)照組相比，下調(diào)組細(xì)胞Runx2的基因相對(duì)表達(dá)水平顯著降低，上調(diào)組中細(xì)胞中的Runx2 mRNA表達(dá)水平則顯著升高(P＜0.05)。

圖1 直腸癌及癌旁組織中Runx2 mRNA的表達(dá)()

表1 轉(zhuǎn)染后Runx2 mRNA與蛋白的表達(dá)(，n=3)

表1 轉(zhuǎn)染后Runx2 mRNA與蛋白的表達(dá)(，n=3)

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05

Runx2蛋白相對(duì)表達(dá)水平對(duì)照組 0.88±0.09 1.09±0.08 Runx2下調(diào)組 0.23±0.04a 0.21±0.06a Runx2上調(diào)組 1.47±0.09a 1.56±0.09a組別 Runx2基因相對(duì)表達(dá)水平

圖2 轉(zhuǎn)染后Runx2 mRNA的表達(dá)()

圖3 轉(zhuǎn)染后Runx2蛋白的表達(dá)()

2.4 CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖 如表2所示為癌細(xì)胞增殖活性的變化。CCK-8結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，Runx2基因沉默組直腸癌LOVO細(xì)胞增殖水平顯著降低(P＜0.05)，而上調(diào)組中直腸癌細(xì)胞的增殖水平則明顯升高。與Runx2上調(diào)組相比，Runx2下調(diào)組細(xì)胞增殖水平顯著降低。見(jiàn)圖4。

表2 各組直腸癌LOVO細(xì)胞增殖情況(，n=3)

圖4 各組直腸癌LOVO細(xì)胞增殖情況()

2.5 Runx2表達(dá)對(duì)LOVO的放射敏感性的影響 表3、圖5所示為基因轉(zhuǎn)染后直腸癌LOVO細(xì)胞經(jīng)過(guò)放療后。與對(duì)照組相比，Runx2下調(diào)組細(xì)胞平均致死劑量D0、SF2和N值明顯降低，Runx2上調(diào)組細(xì)胞的D0、SF2和N值顯著升高(P＜0.05)。

組別 D0 N SF22.6 細(xì)胞的凋亡 與對(duì)照組（24.12±1.18）%比 較， 上 調(diào) 組（13.23±0.37）% 和 下 調(diào) 組（58.16±0.92）%癌細(xì)胞中Runx2的表達(dá)水平對(duì)直腸癌LOVO細(xì)胞凋亡率的影響。Runx2基因沉默顯著促進(jìn)了直腸癌LOVO細(xì)胞的凋亡，上調(diào)組則明顯降低了直腸癌LOVO細(xì)胞的增殖活化能力。見(jiàn)圖6。

表3 各組直腸癌細(xì)胞株LOVO的放射敏感性(，n=3)

表3 各組直腸癌細(xì)胞株LOVO的放射敏感性(，n=3)

注：與對(duì)照組相比，aP＜0.05

對(duì)照組 0.58±0.08 1.36±0.13 0.65±0.08 Runx2下調(diào)組 0.43±0.05a 0.98±0.07a 0.47±0.06a Runx2上調(diào)組 0.65±0.09a 2.67±0.29a 0.93±0.12a

圖5 各組直腸癌細(xì)胞株LOVO的放射敏感性()

圖6 各組直腸癌LOVO細(xì)胞的凋亡率()

2.7 Runx2表達(dá)聯(lián)合X射線照射對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用 Runx2基因沉默組裸鼠移植瘤的平均體積（2.53±0.23）cm3明顯小于對(duì)照組（3.82±0.31）cm3，其抑瘤率顯著升高(P＜0.05)；上調(diào)直腸癌細(xì)胞中Runx2相對(duì)表達(dá)之后，裸鼠皮下種植瘤平均體積明顯變大（5.21±0.21）cm3，抑瘤率顯著降低。見(jiàn)圖7。

圖7 各組移植瘤平均體積比較

3 討論

Runx2可能會(huì)增加直腸癌細(xì)胞的放射敏感性。目前關(guān)于Runx2在直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)水平變化方面的研究還較為缺乏，本研究首先探討Runx2在直腸癌LOVO細(xì)胞中是否存在異常表達(dá)，并通過(guò)基因轉(zhuǎn)染雙向調(diào)控直腸癌細(xì)胞中的Runx2的表達(dá)，研究上調(diào)和下調(diào)Runx2在直腸癌細(xì)胞中的相對(duì)表達(dá)水平對(duì)移植瘤放射敏感性的影響，以期為直腸癌的治療提供借鑒和依據(jù)。

Runx2是近年來(lái)醫(yī)學(xué)界研究的一大熱點(diǎn)，其可以通過(guò)調(diào)控多種基因轉(zhuǎn)錄進(jìn)而影響骨骼的形成、骨細(xì)胞分化等[10]。近年來(lái)研究表明，Runx2在腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展中也有重要的作用，給癌癥的防治又打開(kāi)了一扇大門(mén)。Runx2在調(diào)控腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力方面有特殊作用[11-12]，尤其在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向骨中轉(zhuǎn)移進(jìn)程中作用顯著[13]。這可能因?yàn)镽unx2可以介導(dǎo)與癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移相關(guān)的金屬基質(zhì)蛋白酶異常表達(dá)、腫瘤血管生成和與癌細(xì)胞侵襲相關(guān)的MAPK蛋白表達(dá)水平升高[14-15]。就通過(guò)基因轉(zhuǎn)染Runx2研究其與直腸癌細(xì)胞存活與凋亡關(guān)系研究尚少，而且就其與直腸癌移植瘤放射敏感性的關(guān)系也比較缺乏。

本研究通過(guò)熒光定量，探討了Runx2 在直腸癌細(xì)胞組織的基因相對(duì)表達(dá)水平情況。結(jié)果顯示，其在癌組織中的相對(duì)表達(dá)水平明顯高于癌旁組織。該結(jié)果與張海元等[16]就Runx2蛋白與結(jié)直腸癌和大腸癌關(guān)系的研究較為一致。通過(guò)電穿孔法基因轉(zhuǎn)染Runx2發(fā)現(xiàn)，Runx2下調(diào)組直腸癌LOVO細(xì)胞內(nèi)Runx2基因表達(dá)明顯降低，Runx2上調(diào)組明顯升高，這表明基因轉(zhuǎn)染成功。Runx2基因下調(diào)組直腸癌細(xì)胞增殖活性被抑制，而細(xì)胞凋亡率增加；Runx2上調(diào)組中則有相反變化出現(xiàn)。研究顯示，Runx2介導(dǎo)的癌細(xì)胞的增殖與凋亡可能與調(diào)控細(xì)胞增殖的相關(guān)基因有關(guān)[17]。本研究結(jié)果顯示，Runx2下調(diào)組直腸癌LOVO細(xì)胞放射敏感性升高，相較而言，Runx2上調(diào)組直腸癌LOVO細(xì)胞放射敏感性降低。下調(diào)Runx2表達(dá)后，經(jīng)過(guò)射線放療處理，癌細(xì)胞的移植瘤瘤體體積顯著降低，該瘤體得到了顯著的抑制；上調(diào)Runx2的表達(dá)則與之效應(yīng)相反。提示直腸癌LOVO細(xì)胞的放射敏感性與Runx2的表達(dá)水平關(guān)系密切，通過(guò)基因沉默可以提高癌細(xì)胞的放射敏感性，增強(qiáng)放射治療的療效。

Runx2基因調(diào)控對(duì)直腸癌放射敏感性的影響機(jī)制尚不可知。劉勇等[18]應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)局部進(jìn)展期直腸癌患者術(shù)前同步放化療前、后的凋亡相關(guān)蛋白，結(jié)果表明放化療組中Bax表達(dá)變化與腫瘤肌層浸潤(rùn)和放療后腫瘤細(xì)胞退縮之間差異有顯著性意義。提示放射治療直腸癌與癌細(xì)胞中的Bax的表達(dá)水平有關(guān)。已有研究表明，Runx2參與Bax、Bcl-2等信號(hào)通路調(diào)控[19-20]。由此可知，Runx2可能通過(guò)調(diào)節(jié)這些信號(hào)通路從而對(duì)直腸癌細(xì)胞的放射敏感性發(fā)揮影響，有待進(jìn)一步研究探討。

本研究通過(guò)基因轉(zhuǎn)染技術(shù)分別上調(diào)和下調(diào)調(diào)控直腸癌細(xì)胞中的Runx2基因和蛋白的表達(dá)，提高了直腸癌細(xì)胞的放射敏感性?；蚴侄魏头暖熓侄蜗嘟Y(jié)合，顯著抑制了移植瘤的生長(zhǎng)，但其機(jī)制還有待進(jìn)一步探討研究。

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