東鄉(xiāng)綠殼雞蛋中磷脂含量的比色法測(cè)定與分析

李瑞麗 ，李偉紅 ，盧峰

（1.江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與標(biāo)準(zhǔn)研究所，江西南昌 330200，2.農(nóng)業(yè)部畜禽產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(南昌)，3.江西新農(nóng)園實(shí)業(yè)有限公司）

磷脂（Phospholipids，PL）是一類(lèi)含磷酸根脂質(zhì)的總稱(chēng)，它是生物膜的基本組成成分，是膽堿和花生四烯酸的原料來(lái)源，在生命過(guò)程中起代謝作用和結(jié)構(gòu)形成作用，是重要的生命物質(zhì)［1］。同時(shí)，磷脂在生物體內(nèi)脂肪代謝、肌肉生長(zhǎng)、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和體內(nèi)抗氧化損傷方面都發(fā)揮著重要的作用［2］，磷脂是一種具有保健功能的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于磷脂的基礎(chǔ)與應(yīng)用研究較多，但絕大多數(shù)是針對(duì)大豆磷脂。雞蛋中含有豐富的磷脂，不僅含量高，而且質(zhì)地優(yōu)于大豆磷脂［3］。尤其近年來(lái)，隨著營(yíng)養(yǎng)學(xué)家和醫(yī)學(xué)家對(duì)功能性磷脂類(lèi)物質(zhì)保健作用研究的深入，雞蛋中功能性磷脂成分特性、品種間的差異以及遺傳規(guī)律等方面的研究日益受到關(guān)注。雞蛋磷脂含量常隨禽蛋品種不同而異，有報(bào)道指出某些地方雞種的全蛋卵磷脂含量高于外來(lái)品種［4～6］。

隨著人們生活水平的提高，消費(fèi)者對(duì)雞蛋的要求由單元數(shù)量型向質(zhì)量型轉(zhuǎn)變，市場(chǎng)上雞蛋以蛋殼顏色劃分可分為褐殼、粉殼、綠殼等，不同蛋殼顏色雞蛋的營(yíng)養(yǎng)成分差異常常引起消費(fèi)者熱議。東鄉(xiāng)綠殼蛋雞是江西省著名的地方品種，具有五黑一綠的特點(diǎn)，即黑冠、黑毛、黑皮、黑肉、黑骨，產(chǎn)綠殼蛋。近年來(lái)，綠殼蛋雞養(yǎng)殖數(shù)量逐年增加，因其明顯的種質(zhì)資源優(yōu)勢(shì)和經(jīng)濟(jì)效益，綠殼雞蛋越來(lái)越受到消費(fèi)者的關(guān)注和青睞，也不乏對(duì)綠殼雞蛋中營(yíng)養(yǎng)功能成分的研究，但是未見(jiàn)對(duì)東鄉(xiāng)綠殼雞蛋中磷脂成分的相關(guān)報(bào)道。本研究以東鄉(xiāng)綠殼雞蛋為試驗(yàn)材料，研究東鄉(xiāng)綠殼雞蛋與外來(lái)品種的雞蛋磷脂含量的差別，進(jìn)一步比較初產(chǎn)蛋、雙黃蛋與普通綠殼雞蛋的中磷脂含量差異，為消費(fèi)者科學(xué)消費(fèi)以及該品種雞蛋的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

綠殼雞蛋取自江西省東鄉(xiāng)、進(jìn)賢、萍鄉(xiāng)3個(gè)東鄉(xiāng)綠殼蛋雞養(yǎng)殖場(chǎng)，褐殼雞蛋取自進(jìn)賢某養(yǎng)殖場(chǎng)。綠殼雞蛋和褐殼雞蛋選擇40周齡的蛋雞所產(chǎn)的雞蛋（取自3個(gè)不同養(yǎng)殖場(chǎng)的東鄉(xiāng)綠殼雞蛋65枚，褐殼雞蛋36枚），初產(chǎn)蛋和雙黃蛋均為1～3d產(chǎn)的東鄉(xiāng)綠殼雞蛋（初產(chǎn)蛋36枚，雙黃蛋12枚）。

1.2 儀器與設(shè)備

U3900可見(jiàn)分光光度計(jì) （Hitachi公司），05PR-22離心機(jī) （Hitachi公司），KH-500DB數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司），AL204分析天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司），SX2馬弗爐 （上海陽(yáng)光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），封閉電爐（北京市永光明醫(yī)療儀器廠），瓷坩堝，G3玻璃砂芯坩堝。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 磷脂的提取。準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣1g（精確至0.01g），置于50 mL離心管中，加入30mL三氯甲烷-甲醇溶液，漩渦后超聲30min，離心5min（5000r/min），經(jīng)G3玻璃砂芯坩堝過(guò)濾，用10mL三氯甲烷-甲醇溶液分兩次沖洗G3玻璃砂芯坩堝，濾液合并于坩堝中，將此坩堝放在80℃的水浴中蒸干。然后在提取物中加氧化鋅0.5g，先在電爐上緩慢加熱至近干，逐漸加熱至全部炭化，將坩堝送至550℃～600℃的馬弗爐中灼燒至完全灰化 （白色），時(shí)間為2h。取出坩堝后冷卻，轉(zhuǎn)移到50mL容量瓶，用氫氧化鉀溶液中和至出現(xiàn)混濁，緩慢滴加鹽酸溶液使氧化鋅沉淀完全溶解，再加2滴，最后用水稀釋定容至刻度，搖勻?？瞻自囼?yàn)：除不加入樣品提取物外，均按上述步驟進(jìn)行。

1.3.2 測(cè)定。分別取6支50mL比色管，編號(hào)。按號(hào)碼順序分別注入標(biāo)準(zhǔn)溶液 0mL、1mL、2mL、4mL、6mL、8mL，再按順序分別加水至10 mL，分別加硫酸聯(lián)氨溶液8 mL、鉬酸鈉溶液2 mL。加塞，振搖3～4次，去塞，將比色管放入沸水浴中加熱10min，取出，冷卻至室溫。用水稀釋至刻度，充分搖勻，靜置10min。移取該溶液至干燥、潔凈的比色皿中，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm處，用試劑空白調(diào)整零點(diǎn)，分別測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，含磷量（0.01mg、0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

用移液管取上述溶液1mL，注入25mL比色管中，加入硫酸聯(lián)氨溶液4mL，鉬酸鈉溶液1mL，加塞搖勻，去塞，將比色管放入沸水浴中加熱10min，取出后冷卻至室溫，用水稀釋至刻度，充分搖勻，靜置10min后移取至比色皿中，用分光光度計(jì)在波長(zhǎng)650nm處測(cè)試吸光度。

1.3.3 磷脂含量的計(jì)算。根據(jù)被測(cè)液的吸光值在標(biāo)準(zhǔn)曲線查得磷含量（c）后，可以按以下公式計(jì)算樣品中磷脂含量：

式中：

X—樣品中磷脂的含量；

P—標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的被測(cè)液的含磷量，單位為毫克（mg）；

m—樣品質(zhì)量，單位為克（g）；

D—樣品的稀釋倍數(shù)；

26.31 —每毫克磷相當(dāng)于磷脂的毫克數(shù)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS15.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)采用標(biāo)準(zhǔn)差±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）的形式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 以吸光值為橫坐標(biāo)，以磷的含量為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸分析得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：

c=3.4057A+0.0056，R2=0.9998。

其中c為磷的含量，A為吸光值。

2.2 雞蛋中磷脂含量的差異

表1中測(cè)定了不同雞蛋中磷脂的含量，與褐殼雞蛋相比，綠殼雞蛋的磷脂含量顯著高于褐殼雞蛋（P＜0.05）。不同產(chǎn)蛋期的綠殼雞蛋，初產(chǎn)蛋中磷脂含量均顯著低于40周齡的雞蛋和雙黃雞蛋（P＜0.05），但是雙黃蛋與40周齡的雞蛋中磷脂含量的差異不顯著（P＞0.05）。由表2測(cè)定的不同試驗(yàn)組雞蛋的平均重量可以看出，綠殼初產(chǎn)雞蛋的平均重量最輕，其次為褐殼雞蛋，最重的是雙黃蛋。如果按照每枚雞蛋計(jì)算，單枚綠殼雞蛋中初產(chǎn)蛋提供的磷脂最低，單枚綠殼雙黃蛋提供的磷脂最多。

表1 不同雞蛋中磷脂的含量

表2 不同試驗(yàn)組雞蛋的重量

3 討論

3.1 磷脂是一類(lèi)重要的具有保健功能的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，1996年9月在布魯塞爾召開(kāi)的第七屆卵磷脂國(guó)際會(huì)議上，醫(yī)藥學(xué)家和營(yíng)養(yǎng)學(xué)專(zhuān)家們研討證實(shí)，磷脂作為營(yíng)養(yǎng)品在增進(jìn)健康及預(yù)防疾病方面能起到的重要的作用，贏得了世界營(yíng)養(yǎng)專(zhuān)家、藥物學(xué)家和醫(yī)學(xué)家的普遍認(rèn)同［7］。膳食中適當(dāng)攝入磷脂可以緩解一系列人類(lèi)疾病，如冠狀動(dòng)脈心臟病、腫瘤和炎癥等。雞蛋作為人們攝入磷脂的有效途徑，開(kāi)展不同雞蛋中磷脂含量的比較研究十分必要。有報(bào)道指出北京油雞蛋、泰和烏骨雞蛋以及蘇禽青殼蛋雞雞蛋的磷脂含量均高于外來(lái)雞種［8～9］。本文的研究發(fā)現(xiàn)江西的綠殼蛋雞雞蛋中磷脂含量高于褐殼雞蛋，具有較高的食用價(jià)值，也驗(yàn)證了我國(guó)地方品種綠殼雞蛋磷脂含量高于外來(lái)品種，其雞蛋中磷脂的沉積特點(diǎn)和規(guī)律值得做進(jìn)一步的研究。

3.2 本研究對(duì)于東鄉(xiāng)綠殼蛋雞初產(chǎn)蛋和雙黃蛋中磷脂含量的研究尚屬首次。與40周齡的雞蛋相比，初產(chǎn)蛋磷脂含量明顯低于40周齡的蛋雞所產(chǎn)雞蛋（P＜0.05），雙黃蛋略低于40周齡的蛋雞所產(chǎn)雞蛋中磷脂含量，但差異不顯著。結(jié)合蛋重?cái)?shù)據(jù)，單枚初產(chǎn)蛋中磷脂含量遠(yuǎn)低于普通雞蛋中的磷脂含量 （P＜0.05），但單枚雙黃蛋的磷脂含量略高（P＞0.05）。

3.3 磷脂按照其結(jié)構(gòu)和功能可以分為磷脂酰膽堿(PC，又稱(chēng)卵磷脂)、磷脂醇(PA)、磷酯酰肌醇(PI)、磷脂酰甘油(PG)、神經(jīng)鞘磷脂(SPH)、磷脂醇(PA)、磷脂酰乙醇胺(PE，又稱(chēng)腦磷脂)等。其中磷脂酰膽堿被譽(yù)為第三大營(yíng)養(yǎng)素，在歐美、日本等發(fā)達(dá)國(guó)家，卵磷脂健康法已流行了20多年。雖然我國(guó)一直以來(lái)都是雞蛋第一生產(chǎn)國(guó)，但對(duì)于雞蛋中磷脂的研究還很落后，對(duì)地方品種雞蛋的研究更是少之又少。本研究初步比較了40周齡東鄉(xiāng)綠殼蛋、初產(chǎn)蛋和雙黃蛋中磷脂含量的差異，在下一步的研究中，將深入研究東鄉(xiāng)綠殼雞蛋中磷脂組成、含量差別及其沉積規(guī)律，為綠殼雞蛋消費(fèi)及產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

［1］馬文昭，李肇特.磷脂類(lèi)對(duì)于組織的作用［M］.北京∶人民衛(wèi)生出版社， 1963∶3～5.

［2］MANAHAN D J.A guide to phospholipid chemistry ［M］.New York∶Oxford University Press，1997.

［3］朱玲嬌.禽蛋磷脂組成及其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)分析研究［D］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢∶2013

［4］代忠波，丁卓平.卵磷脂的研究概況［J］.中國(guó)乳品工業(yè) ，2016(1)∶48～51.

［5］劉虎，方熱軍.提高雞蛋卵磷脂含量的調(diào)控措施及其機(jī)制［J］.廣東飼料， 2016(7)∶44～46.

［6］ 唐詩(shī)，賈亞雄，朱靜，等.三個(gè)品種雞蛋的蛋品質(zhì)比較［J］.中國(guó)家禽， 2014(23)∶14～16.

［7］孫長(zhǎng)春.雞蛋中卵磷脂含量調(diào)控的研究［D］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 ，北京 ∶2010.

［8］熊建華，董開(kāi)發(fā)，歐陽(yáng)建華.泰和烏骨雞蛋中磷脂含量的測(cè)定研究［J］.江西畜牧獸醫(yī)雜志， 1999(2)∶8～9.

［9］葛慶聯(lián)，高玉時(shí)，馬麗娜，等.青殼雞蛋與褐殼雞蛋品質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)成分比較分析［J］.中國(guó)食物與營(yíng)養(yǎng)， 2015(12)∶64～66.

（收稿日期：2018-05-06）

信息之窗

國(guó)內(nèi)首個(gè)肉雞全基因組選擇育種聯(lián)盟成立

國(guó)內(nèi)首個(gè)肉雞全基因組選擇育種聯(lián)盟在北京正式成立。聯(lián)盟由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所、北京康普森生物技術(shù)有限公司、廣東溫氏南方家禽育種有限公司、江蘇立華牧業(yè)股份有限公司等8家單位聯(lián)合組成。

目前，我國(guó)雞肉主要來(lái)自于白羽肉雞和黃羽肉雞兩大體系，其中占我國(guó)肉雞出欄量50的白羽肉雞完全依賴(lài)進(jìn)口，一旦供應(yīng)鏈斷裂，我國(guó)肉雞市場(chǎng)必然受到嚴(yán)重的打擊。事實(shí)上，我國(guó)擁有著非常豐富、優(yōu)秀的肉雞基因資源。肉雞全基因組選擇育種新技術(shù)的應(yīng)用，可以將我國(guó)的肉雞資源充分利用起來(lái)，快速、精準(zhǔn)地實(shí)現(xiàn)定向選擇、培育出我國(guó)自己的高品質(zhì)肉雞新品種，有效提升國(guó)產(chǎn)品種的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。

雖然我國(guó)肉雞全基因組選擇育種技術(shù)已經(jīng)成熟，具備投入市場(chǎng)應(yīng)用的條件，但科研機(jī)構(gòu)和產(chǎn)業(yè)應(yīng)用還存在著十分嚴(yán)重的技術(shù)脫節(jié)問(wèn)題。肉雞全基因組選擇育種聯(lián)盟的成立，正是為了加快推動(dòng)全基因組選擇育種技術(shù)在肉雞產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用。聯(lián)盟中各企業(yè)、科研機(jī)構(gòu)間努力做到緊密溝通、資源共享，加速培育出更多肉雞新品種。