宮頸炎患者HPV感染與外周血T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析

陳羽，侯海靜

高危型人類乳頭狀病毒（HPV）持續(xù)感染是誘發(fā)宮頸癌的重要原因之一，宮頸癌患者中有99.8%的病例為 HPV陽性。臨床調(diào)查結(jié)果顯示，HPV的感染和清除與年齡密切相關(guān)，育齡期婦女多為暫時性感染，大部分人群無需治療，可自然消退；而圍絕經(jīng)期婦女多為持續(xù)性感染，引發(fā)宮頸癌的概率大大增加[1-2]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，隨著年齡的增加，婦女雌激素水平降低，內(nèi)分泌功能和免疫功能呈衰退趨勢，對HPV的抵御能力和清除能力變?nèi)蹩赡苁菍?dǎo)致HPV持續(xù)感染的重要原因[3]。也有研究指出，宮頸炎患者生殖道微生態(tài)環(huán)境紊亂、免疫系統(tǒng)功能失調(diào)也增加了HPV的持續(xù)感染風(fēng)險[4]。本研究旨在分析宮頸炎患者HPV感染及高危型HPV E6、E7mRNA表達(dá)與外周血T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系，從而進(jìn)一步觀察HPV感染與女性的細(xì)胞免疫功能是否存在相關(guān)性?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料 收集2014年12月至2016年12月收治的897例宮頸炎患者；年齡 27～ 61歲，平均（43.5±6.8）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：月經(jīng)規(guī)律自愿簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期與哺乳期、長期抗生素與激素用藥史、腫瘤或癌癥、傳染性疾病、肝腎功能不全、合并有兩種及以上的高危型HPV感染者。

1.2研究方法

1.2.1HPV分型檢測 于月經(jīng)干凈后3～5 d取樣，取樣前3 d禁止性生活。采用專用宮腔采樣刷取材，收集宮頸口及宮頸上皮脫落細(xì)胞，置于專用取樣瓶中（含細(xì)胞保存液）。采用21種HPV分型檢測試劑盒測定患者HPV感染情況，嚴(yán)格按照試劑盒說明書的步驟進(jìn)行操作，測定原理為PCR反向點(diǎn)雜交技術(shù)。21種HPV分別為高危型（16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68）和低危型（6、11、42、43、44、81）。

1.2.2HPVE6/E7mRNA檢測 高危型HPV感染者測定E6/E7mRNA，取樣與樣本保存方法與HPV分型檢測取材方法一致，充分搖勻后3000 r/min離心10 m in，獲得上清液。采用HPVE6/E7mRNA檢測試劑盒測定上清液E6/E7mRNA，檢測原理為熒光定量雜交捕獲法。

1.2.3T淋巴細(xì)胞亞群檢測 患者均于治療前取空腹肘靜脈血2 m l，采用人T淋巴細(xì)胞亞群測定試劑盒（XY-1002，上海信裕生物技術(shù)有限公司）測定CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞的數(shù)量，取血后不凍存，直接測定。將所得血液直接與抗體混勻，室溫避光孵育20 m in，加入紅細(xì)胞裂解液，室溫避光孵育10 m in，2000 r/m in離心10 m in，棄上清。所得細(xì)胞以PBS洗液清洗并重懸，即可上機(jī)檢測。

2　結(jié)果

2.1HPV感染的整體檢測結(jié)果 本研究共檢出高危型 HPV感染 222例（24.7%）、低危型 HPV感染 284例（31.7%）及非HPV感染391例（43.6%）。207例高危型 HPV分型情況如表1所示，高危型HPV的E6/E7mRNA陽性率為25.2%（56例）。

2.2HPV感染與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系 高危型HPV感染組的CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)和CD4+/CD8+低于低危型HPV感染組和非HPV感染組，CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)高于低危型HPV感染組和非HPV感染組；低危型HPV感染組的CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)和CD4+/CD8+低于非HPV感染組，CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)低于非HPV感染組，組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05）。見表2。

2.3HPV E6/E7mRNA與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系 高危型HPV感染者根據(jù)HPV E6/E7mRNA測定結(jié)果分為 E6/E7mRNA陽性和 E6/E7mRNA陰性兩組，E6/E7mRNA陽性組CD4+細(xì)胞計(jì)數(shù)和 CD4+/CD8+低于 E6/E7mRNA 陰性組，CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)高于E6/E7mRNA陰性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05）。見表 3。

3　討論

因?qū)m頸炎患者陰道清潔度差、生殖道微生態(tài)失衡和免疫系統(tǒng)功能紊亂[5-6]，其HPV感染風(fēng)險高于健康人群。謝建萍等[7]發(fā)現(xiàn)高危型HPV感染患者陰道微生態(tài)有異于其他宮頸炎患者，其衣原體、解脲脲原體和細(xì)菌感染率均呈現(xiàn)出偏高趨勢。賀冬生等[8]對生殖道感染患者的陰道分泌物病原菌和陰道清潔度的分析結(jié)果顯示兩者與HPV感染均無明顯相關(guān)性，并指出陰道菌群可能僅通過影響免疫系統(tǒng)功能而間接影響HPV感染率，并非其直接影響因素。

在T淋巴細(xì)胞亞群中，CD4+T細(xì)胞也稱輔助性T細(xì)胞，是抗菌抗病毒抗腫瘤的主力軍；CD8+細(xì)胞也稱抑制性T細(xì)胞，能夠抑制CD4+細(xì)胞的功能，從而防止免疫系統(tǒng)功能亢進(jìn)引發(fā)的自我損傷。臨床上一般以CD4+/CD8+衡量細(xì)胞免疫功能的整體免疫活性，CD4+/CD8+升高代表細(xì)胞免疫功能的升高，而CD4+/CD8+降低代表細(xì)胞免疫功能受到抑制[9-10]。本研究結(jié)果顯示，高危型HPV感染者患者的細(xì)胞免疫功能明顯低于低危型 HPV感染者，低危型HPV感染者的細(xì)胞免疫功能明顯低于非HPV感染者；這證實(shí)HPV感染與T淋巴細(xì)胞亞群之間存在密切關(guān)系。但究竟是HPV感染降低了細(xì)胞免疫功能還是細(xì)胞免疫功能偏低增加了HPV感染風(fēng)險尚不明確。既往研究指出，T淋巴細(xì)胞在抗感染過程中起主要作用，健康人群T淋巴細(xì)胞能夠正常發(fā)揮抗原呈遞和免疫監(jiān)視功能，當(dāng)細(xì)胞免疫功能下降時抗病毒能力減弱，感染風(fēng)險增加[11]。而細(xì)菌、病毒等微生物的長期定植也可以通過自身機(jī)制增加CD8+細(xì)胞的分泌，抑制機(jī)體的抗感染功能[12-13]。因此本研究認(rèn)為HPV感染與T淋巴細(xì)胞亞群之間的關(guān)系相互影響，互為因果；但具體是否如此還需要更加嚴(yán)謹(jǐn)?shù)难芯考右则?yàn)證。

表1　高危型HPV的分型 例（%）

表2　HPV感染與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系

表3　HPV E6/E7mRNA與T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系

HPV E6/E7已被證實(shí)為病毒癌基因，可誘導(dǎo)生物體重要的抑癌基因pRb和p53發(fā)生降解，從而增加宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險[14-15]。長期感染者高危型HPV的E6/E7基因可能與宿主DNA發(fā)生整合，整合后宮腔局部E6/E7mRNA過表達(dá)和高危型HPV感染同時存在，加速了腫瘤細(xì)胞的形成與惡性增殖。越來越多的研究指出，E6/E7mRNA可較HPV-DNA更加準(zhǔn)確地反映體內(nèi)病毒復(fù)制情況，對宮頸癌的診斷和病情預(yù)測價值高于 HPVDNA[16]。本研究發(fā)現(xiàn)E6/E7 mRNA陽性的高危型HPV感染患者細(xì)胞免疫功能進(jìn)一步降低，證實(shí)HPV感染類型和高危型HPV的E6/E7mRNA表達(dá)均與T淋巴細(xì)胞亞群功能有關(guān)，應(yīng)引起重視。

參考文獻(xiàn)：