RECK在盆腔臟器脫垂患者子宮主韌帶和陰道前壁中表達意義的研究

趙 欣 劉巖松

（沈陽市婦嬰醫(yī)院，遼寧 沈陽 110011）

盆底功能障礙性疾?。≒FD）是各種病因?qū)е屡璧字С直∪酰M而盆腔臟器移位引發(fā)盆腔器官的位置和功能異常[1]。PFD的發(fā)病機制尚不十分清楚，目前研究認為，PFD的發(fā)生與盆底支持組織結(jié)構(gòu)功能完整性的破壞密切相關(guān)，細胞外基質(zhì)（ECM）是盆底結(jié)締組織的主要成分，RECK[2]是近年來發(fā)現(xiàn)的新型基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）抑制劑，可保護ECM免于被降解，從而保證ECM的完整性。本實驗通過測定人類盆腔臟器脫垂患者主韌帶、陰道壁中RECK的表達情況，旨在探討盆腔臟器脫垂發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機制，對POP發(fā)病機制的基礎(chǔ)研究具有一定意義。

1 資料與方法

1.1 資料來源：收集沈陽市婦嬰醫(yī)院婦科2014年1月至2016年6月診斷為盆腔臟器脫垂并行陰式子宮切除術(shù)+全盆底重建術(shù)患者的主韌帶及陰道前壁組織。術(shù)中切取主韌帶0.5 cm及陰道前壁1 cm，實驗組及對照組所有患者均已婚，有陰道分娩史，無其他結(jié)締組織疾病，術(shù)后病理回報無雌激素相關(guān)性疾病。診斷標準依據(jù)1996年國際尿控協(xié)會公布的POP-Q分度標準，分為Ⅰ度～Ⅳ度，共40例，患者年齡為52～74歲，其中絕經(jīng)前6例，絕經(jīng)后34例。另取非脫垂組10例（同期相應(yīng)年齡因?qū)m頸癌行廣泛子宮切除術(shù)患者的主韌帶及陰道前壁組織）做對照，其中絕經(jīng)前4例，絕經(jīng)后6例。POP組與對照組在年齡、產(chǎn)次、體質(zhì)量指數(shù)等方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法：采集兩組患者主韌帶及陰道前壁組織，甲醛固定，石蠟包埋。用SP免疫組化染色法進行染色，將切片進行脫蠟處理，采用胃酶抗原修復(fù)法進行抗原修復(fù)，進行DAB顯色及蘇木素復(fù)染，并采用PBS代替一抗作為陰性對照品進行相關(guān)檢測。

1.3 免疫組化染色結(jié)果判定：RECK主要位于細胞質(zhì)，出現(xiàn)淡黃色至棕黃色細胞為陽性細胞。以PBS代替一抗作為陰性對照。兩名病理醫(yī)師對切片染色情況分析，隨機選取5個具有代表意義的高倍視野（400倍），應(yīng)用計算機圖像分析儀分析各組RECK陽性區(qū)平均灰度值。染色的強弱與灰度值成正比，陽性物質(zhì)越高，染色越深，灰度值越大。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法：運用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理。計數(shù)資料以（%）表示，進行χ2檢驗，計量資料以（±s）表示，進行t檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

RECK在主韌帶及陰道壁組織中的表達情況：RECK在盆底組織表達陽性呈黃色或棕黃色，主要位于細胞外基質(zhì)。POP組和對照組盆底組織中均見RECK陽性表達，RECK在對照組的灰度值明顯高于Ⅱ度、Ⅲ度和Ⅳ度POP患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；III度和Ⅳ度患者中的灰度值明顯低于Ⅰ度和Ⅱ度者的灰度值，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組RECK蛋白表達的比較（±s）

表1 各組RECK蛋白表達的比較（±s）

注：與對照組相比，aP＜0.05；與I度相比，bP＜0.05；與II度相比，cP＜0.05

組別 主韌帶RECK平均灰度值陰道壁RECK平均灰度值對照組(n=10) 90.7±2.90 90.3±3.84 POP組(n=40)Ⅰ度 90.2±3.66 89.9±3.75Ⅱ度 86.4±3.44a 86.1±4.35aⅢ度 82.2±3.20abc 81.3±4.04abcⅣ度 81.9±3.06abc 80.2±2.66abc

3 討 論

盆腔器官脫垂是中老年婦女的常見病，從解剖結(jié)構(gòu)上來說，女性盆腔是由肌肉、韌帶及骨盆所支撐，完整的結(jié)締組織是支撐和固定盆腔臟器于其解剖位置的重要因素，任何組織結(jié)構(gòu)改變都可能導(dǎo)致POP的發(fā)生。

1998年Takahashi等[2]在v2Ki2ras轉(zhuǎn)染的NIH3T3細胞中發(fā)現(xiàn)RECK基因，其通過RAS信號通路，作用于細胞外基質(zhì)，促進ECM降解，RAS同時釋放抑制劑，抑制RECK基因表達。MMP通過對細胞外基質(zhì)的降解作用，可分解膠原使其含量減少，影響盆底結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，促進PFD的發(fā)生和發(fā)展。RECK是近年來發(fā)現(xiàn)的新型基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑[3-4]，細胞外基質(zhì)是結(jié)締組織的主要成分，此成分的含量或結(jié)構(gòu)發(fā)生改變都可引起組織彈性降低，導(dǎo)致盆底臟器脫垂。

本研究結(jié)果顯示，RECK在對照組及試驗組患者的主韌帶及陰道壁中均有表達，但對照組表達高于實驗組，而實驗組根據(jù)盆腔臟器脫垂程度不同，其RECK表達量也不同。RECK在盆腔臟器脫垂中的低表達說明其在此疾病的發(fā)生發(fā)展中起一定的作用，RECK表達的缺失可能是盆腔臟器脫垂發(fā)生機制之一。綜上所述，本實驗結(jié)果提示盆腔臟器脫垂患者主韌帶及陰道前壁中RECK表達下降，并與脫垂嚴重程度相關(guān)，盆底組織中RECK減少可能引起盆底結(jié)締組織支持能力減弱，最終導(dǎo)致POP發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。但RECK在POP發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制還不清楚，尚待進一步深入研究。

[1] Lin SY,Tee YT,Ng SC,et al.Changes in the extracellular matrix in the anterior vaginal of women with or without prolapse[J].Int Urogynecol J Pelvic Floor Dysfunct,2007,18(1):43-48.

[2] Takahashi C,Sheng Z,Horan TP,et al.Regulation of matrix metallop roteinase-9 and inhibition of tumor invasion by the membraneanchored glycoprotein RECK[J].Proc Natl Acad Sci USA,1998,95(22):13221-13226.

[3] Chen Y,Tseng SH.The potential of RECK inducers as antitumour agents for glioma[J].Anticancer Res,2012,32(20):2991-2998.

[4] Sakurai F,Nanjo Y,Okamoto S,et al.Up-regulation of RECK gene expression by small double stranded RNA targeting the promoter region[J].Cancer Gene Ther,2014,21(2):164-170.