HPLC測定半夏瀉心湯中不同劑量黃芩配伍前后黃芩苷的煎出量

梁惠珍，高明焱，王佳佳，馬晶晶

半夏瀉心湯出自張仲景《傷寒雜病論》，主治寒熱互結(jié)之痞證[1]。由半夏、黃連、黃芩、人參、干姜、炙甘草、大棗7 味藥組成，全方能通過辛開苦降以調(diào)脾胃氣機(jī)，又有培土生金之意[2]。臨床上主要用于治療胃腸動力障礙性疾病，如反流性食管炎、慢性胃炎、胃潰瘍、胃癌等[3-4]。方中黃芩具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎等功效[5]，現(xiàn)代研究證實(shí)黃芩中的黃芩苷成分對于幽門螺桿菌相關(guān)性胃炎模型有顯著的改善作用[6]，可見黃芩含苷量的多少關(guān)系到該方在臨床上的療效。本研究采用高效液相色譜法，探討配伍中黃芩劑量的不同對半夏瀉心湯中黃芩苷煎出量的影響。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1260系列高效液相色譜儀，包括二元泵、在線脫氣機(jī)、VWD檢測器；KQ3200E超聲提取器（昆山市超聲儀器有限公司）；FA/JA1004萬分之一電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；梅特勒AB135-S/FACT 電子分析天平（METTLER梅特勒集團(tuán)）。

1.2 試藥

半夏、黃芩、黨參、黃連、炙甘草、干姜藥材購于山西維康堂中藥飲片有限公司，大棗為市售，由山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室裴香萍副教授鑒定為正品。黃芩苷對照品（含量測定用，批號：110715-201318）購自中國食品藥品檢定研究院，甲醇（4 L）為色譜純（迪馬科技有限公司），乙醇（500 mL）為分析純（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芩單煎樣品的制備

稱取黃芩藥材90 g，加8倍量水，浸泡10 min，煎煮2次，每次30 min，濾過，收集濾液，濃縮，60℃低溫干燥，即得。

2.2 半夏瀉心湯復(fù)方合煎樣品（含9 g黃芩）的制備

稱取復(fù)方各藥材10倍量，按照黃芩單煎樣品的制備方法制備，即得。

2.3黃芩陰性樣品的制備

稱取缺黃芩的復(fù)方各藥材10倍量，按照黃芩單煎樣品的制備方法制備，即得。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 對照品溶液的制備 取在60 ℃減壓干燥4 h的黃芩苷對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得[7]。

2.4.2 供試品溶液Ⅰ的制備 取黃芩單煎樣品0.3 g，精密稱定，置100 mL具塞三角瓶中，加70 %乙醇30 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液置50 mL量瓶中，加70 %乙醇至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得[7]。

2.4.3 供試品溶液Ⅱ的制備 取半夏瀉心湯復(fù)方合煎樣品2.0 g，精密稱定，按照供試品溶液Ⅰ的制備方法制備，即得。

2.4.4 陰性供試品溶液的制備 取黃芩陰性樣品2.0 g，精密稱定，按照供試品溶液Ⅰ的制備方法制備，即得。

2.4.5 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，甲醇-0.4 %磷酸水溶液(53∶47)為流動相，流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為280 nm，理論板數(shù)按黃芩苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500[7]。

2.4.6 測定法 分別精密吸取黃芩苷對照品溶液、供試品溶液Ⅰ、供試品溶液Ⅱ和陰性供試品溶液各10 μL，采用高效液相色譜儀測定。計(jì)算，以每克黃芩原藥材提出的黃芩苷的量作為提取效率計(jì)算依據(jù)。結(jié)果陰性無干擾。

圖1 單煎和合煎樣品的HPLC圖

2.4.7 線性考察 精密吸取黃芩苷對照品溶液2 μL、4 μL、8 μL、10 μL、15 μL，分別采用高效液相色譜儀測定其峰面積。以黃芩苷質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=5555.3X - 44.949，r = 0.9998，表明黃芩苷在0.125μg～0.941 μg線性關(guān)系良好。

2.4.8 精密度考察 精密吸取對照品溶液10 μL，采用高效液相色譜儀測定峰面積，重復(fù)6次，結(jié)果RSD為0.91 %，表明儀器精密度良好。

2.4.9 穩(wěn)定性考察 精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別在0、2、4、6、10、12 h采用高效液相色譜儀測定峰面積，結(jié)果供試品溶液Ⅰ和供試品溶液Ⅱ中黃芩苷峰面積的RSD分別為1.82 %和1.25 %，說明樣品在12 h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。

2.4.10 重復(fù)性考察 取黃芩單煎樣品0.3 g，6份，再取半夏瀉心湯復(fù)方合煎樣品2.0 g，6份，精密稱定，分別按照供試品溶液Ⅰ制備方法進(jìn)行制備，測定峰面積，計(jì)算黃芩苷煎出量。結(jié)果黃芩單煎樣品和半夏瀉心湯復(fù)方合煎樣品中黃芩苷的平均煎出量（相當(dāng)于黃芩原藥材中的量）分別為48.79 mg·g-1和42.93 mg·g-1，RSD分別為1.62 % 和2.26 %，表明本方法重復(fù)性良好。

2.4.11 加樣回收率考察[8-9]取黃芩單煎樣品0.15 g，6份，再取半夏瀉心湯復(fù)方合煎樣品1.0 g，6份，精密稱定，分別精密加入黃芩苷對照品20 mg，按照供試品溶液Ⅰ制備方法進(jìn)行制備，測定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1、2。

表1 黃芩單煎樣品回收率測定結(jié)果

表2 半夏瀉心湯復(fù)方合煎樣品回收率測定結(jié)果

2.4.12樣品測定 取黃芩單煎樣品0.3 g和半夏瀉心湯復(fù)方合煎樣品2.0 g，精密稱定，按照供試品溶液Ⅰ制備方法進(jìn)行制備，測定峰面積，計(jì)算黃芩苷煎出量。結(jié)果見表3。

表3 不同劑量黃芩配伍前后黃芩苷煎出量的測定

3 討論

3.1 本試驗(yàn)主要是研究半夏瀉心湯在傳統(tǒng)煎煮法中黃芩配伍前后黃芩苷煎出量的變化，故沒有對提取溶劑進(jìn)行選擇，直接采用水提取獲得樣品。

3.2 本試驗(yàn)對黃芩苷進(jìn)行紫外掃描，最大吸收波長出現(xiàn)在210 nm和280 nm，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)[10]和藥典[7]記載，選擇280 nm作為測定波長。

3.3 試驗(yàn)結(jié)果表明，半夏瀉心湯配伍后，黃芩苷的煎出量有所減少，可能是由于黃芩苷與黃連中的小檗堿發(fā)生了酸堿反應(yīng)。而且，隨著黃芩劑量的減少，黃芩苷的煎出量逐漸降低。黃芩苷屬于黃芩中的有效成分，在半夏瀉心湯中能發(fā)揮瀉熱消痞的作用，但又有一定的副作用，可引起胃部不適、腹瀉、血壓下降等。故黃芩的劑量要把握準(zhǔn)確，既能最大程度發(fā)揮其有效作用，又能避免副作用的發(fā)生。目前臨床上應(yīng)用半夏瀉心湯方時(shí)，黃芩的常用劑量為9 g，效果很好。

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