Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1在結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系

陳艷昕，劉慶濱，周穎，黃江梅，肖芳

秦皇島市第一醫(yī)院1病理科，2普外科，河北 秦皇島066000

結(jié)直腸癌的發(fā)病率居各種惡性腫瘤的第3位，在中國(guó)居惡性腫瘤的第4位[1]。研究發(fā)現(xiàn)，惡性腫瘤相關(guān)生物學(xué)因子的改變能夠影響腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、分化及新生血管的形成，從而促進(jìn)惡性腫瘤發(fā)生及病情進(jìn)展[2]。研究表明，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）的高表達(dá)能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和基因轉(zhuǎn)錄，提高腫瘤細(xì)胞的增殖速度[3]。程序性死亡受體1（programmed cell death 1，PDCD1，也稱PD-1）的低表達(dá)能夠抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞持續(xù)性增殖，進(jìn)而參與惡性腫瘤的發(fā)生[4]。Vasohibin-1是一種新型血管內(nèi)皮細(xì)胞調(diào)控因子，能夠調(diào)控新生血管形成，增加局部腫瘤組織的血流灌注，促進(jìn)腫瘤組織的生長(zhǎng)[5]。本研究探討了Vasohibin-1、PD-1、SDF-1在結(jié)直腸癌患者中的表達(dá)情況及其與臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年5月至2016年8月于秦皇島市第一醫(yī)院接受治療的200例結(jié)直腸癌患者為結(jié)直腸癌組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥50歲；②經(jīng)病理檢查確診為原發(fā)性結(jié)直腸癌；③無(wú)其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾??；排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不全者；②合并其他部位腫瘤者；③拒絕參與本研究者。200例結(jié)直腸癌患者中，直腸癌75例，左、右半結(jié)腸及乙狀結(jié)腸癌125例；男120例，女80例；年齡51～76歲，平均（65.24±6.31）歲；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移145例；組織學(xué)分型：管狀腺癌160例，黏液腺癌40例；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期90例，Ⅲ～Ⅳ期110例；腫瘤直徑＜5 cm 135例，≥5 cm 65例。另選取200例結(jié)直腸息肉患者為結(jié)直腸息肉組，其中男110例，女90例；年齡52～75歲，平均（65.28±5.01）歲。兩組患者的性別、年齡比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。所有患者均對(duì)本研究知情并簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢測(cè)方法

采用石蠟切片脫蠟入水，去離子水反復(fù)洗滌，加入牛奶液體封閉，封閉時(shí)間為5 min，加入Vasohibin-1、PD-1、SDF-1蛋白抗體（鼠來(lái)源，購(gòu)自Abcam公司），37℃孵育2 h，采用磷酸鹽緩沖溶液洗滌3次，加入二抗抗體（購(gòu)自Abcam公司），37℃孵育30 min，加入磷酸鹽緩沖溶液洗滌3次，采用南京凱基生物科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)的DAB顯色劑進(jìn)行顯色，封片，鏡下觀察。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

觀察兩組患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1的表達(dá)情況，比較不同臨床特征結(jié)直腸癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1的表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 11.5軟件對(duì)-數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；多因素分析采用Logistic回歸分析法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表達(dá)情況的比較

結(jié)直腸癌組患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)率分別為80.00%、42.50%、45.00%，均明顯高于結(jié)直腸息肉組的12.50%、5.00%、11.00%，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 兩組患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表達(dá)情況的比較[ n（%）]

2.2 不同臨床特征結(jié)直腸癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表達(dá)情況的比較

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型為黏液腺癌、Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤直徑≥5 cm結(jié)直腸癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型為管狀腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤直徑＜5 cm的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。不同年齡、性別、腫瘤部位結(jié)直腸癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

2.3 結(jié)直腸癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1陽(yáng)性表達(dá)的影響因素分析

將單因素分析有意義的因素作為自變量（淋巴轉(zhuǎn)移：有=1，無(wú)=0；TNM分期：Ⅲ～Ⅳ期=1，Ⅰ～Ⅱ期=0），將結(jié)直腸癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)作為因變量，進(jìn)行Logistic回歸分析。結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期是影響結(jié)直腸癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立因素（P＜0.05）。（表3～表5）

3 討論

目前，臨床上結(jié)直腸癌治療的總有效率不足70%，手術(shù)聯(lián)合放化療等綜合治療措施的臨床緩解率較低[5-6]。同時(shí)，對(duì)于結(jié)直腸癌的早期發(fā)病過(guò)程缺乏有效的篩查指標(biāo)，雖然癌胚抗原及糖鏈蛋白125等上皮腫瘤糖蛋白成分能夠在一定程度上提高結(jié)直腸癌的診斷率，但其篩查的靈敏度及特異度較低，具有較為明顯的局限性。

結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，遺傳因素、基因突變等均可能增加腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。近年來(lái)，分子生物學(xué)水平的異常被認(rèn)為是影響惡性腫瘤發(fā)生的核心因素，相關(guān)蛋白表達(dá)異常會(huì)增加腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞正常分化或促凋亡過(guò)程明顯失常[7-8]。SDF-1是細(xì)胞間質(zhì)成分修飾因子，對(duì)于腫瘤細(xì)胞DNA末端具有修飾作用，能夠提高染色體DNA的錯(cuò)配風(fēng)險(xiǎn)，并抑制錯(cuò)配修復(fù)因子cyc的活性[9]。Vasohibin-1能夠促進(jìn)新生血管形成，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的生成及遷移，提高腫瘤病灶組織的血流灌注速度，增加血流灌注量，從而為腫瘤的復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移提供條件[10]。PD-1作為程序性凋亡抑制因子，不僅能夠影響腫瘤細(xì)胞的分化及凋亡，還能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期[11]。部分研究探討了PD-1的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床特征的關(guān)系，認(rèn)為高表達(dá)的PD-1是促進(jìn)患者臨床分期、細(xì)胞分化等病理進(jìn)程惡化的重要因素[11]，但對(duì)于Vasohibin-1、SDF-1的探討不足。

表2 不同臨床特征結(jié)直腸癌患者Vasohibin- 1、PD- 1、SDF- 1表達(dá)情況的比較

表3 結(jié)直腸癌患者Vasohibin- 1陽(yáng)性表達(dá)影響因素的多因素分析

表4 結(jié)直腸癌患者PD- 1陽(yáng)性表達(dá)影響因素的多因素分析

表5 結(jié)直腸癌患者SDF- 1陽(yáng)性表達(dá)影響因素的多因素分析

本研究發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸癌組患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于結(jié)直腸息肉組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。提示Vasohibin-1、PD-1、SDF-1均參與了結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展，具體機(jī)制可能如下[12]：①Vasohibin-1高表達(dá)能夠?qū)е履[瘤細(xì)胞增殖過(guò)程中毛細(xì)血管形成速度的變化，增加血管數(shù)量并導(dǎo)致局部血流動(dòng)力學(xué)紊亂；②PD-1高表達(dá)能夠促進(jìn)下游凋亡抑制因子（如Cox-2）的表達(dá)水平升高，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡；③SDF-1高表達(dá)對(duì)于腫瘤細(xì)胞間質(zhì)成分的分解作用，能夠?yàn)槟[瘤細(xì)胞的增殖及擴(kuò)散提供條件，并為腫瘤細(xì)胞的黏附及浸潤(rùn)過(guò)程提供黏附分子。吳佳茗等[13]分析了小樣本量的結(jié)腸癌患者的免疫組化資料，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PD-1的陽(yáng)性表達(dá)率平均可上升25%以上，結(jié)腸癌的臨床分期越晚、患者的生存預(yù)后越差，治療后的復(fù)發(fā)率越高，PD-1的陽(yáng)性表達(dá)率越高。本研究發(fā)現(xiàn)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型為黏液腺癌、Ⅲ～Ⅳ期、腫瘤直徑≥5 cm結(jié)直腸癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分型為管狀腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、腫瘤直徑＜5 cm的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。提示Vasohibin-1、PD-1、SDF-1表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者的臨床特征密切相關(guān)，可能是因?yàn)檫@些指標(biāo)均能影響腫瘤組織對(duì)鄰近正常腸道黏膜上皮組織的浸潤(rùn)，同時(shí)可以影響腫瘤早期的細(xì)胞浸潤(rùn)過(guò)程，尤其是Vasohibin-1還能夠?qū)е卵軆?nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，影響腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境，并維持腫瘤干細(xì)胞的活性[14]。但本研究并未發(fā)現(xiàn)Vasohibin-1、PD-1、SDF-1表達(dá)情況與結(jié)直腸癌患者腫瘤部位的關(guān)系，提示左側(cè)和右側(cè)結(jié)腸癌不存在明顯的分子生物學(xué)差異。本研究還發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期是影響結(jié)直腸癌患者Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)的獨(dú)立因素（P＜0.05）。本研究的創(chuàng)新性在于探討了Vasohibin-1、SDF-1與結(jié)直腸癌患者臨床特征的關(guān)系。結(jié)直腸癌患者的Vasohibin-1、PD-1、SDF-1陽(yáng)性表達(dá)率較高，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)。

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