宮頸癌組織FoxM 1蛋白的表達(dá)特點(diǎn)及其與病理學(xué)特征、預(yù)后的相關(guān)性

郭麗梅，戴守勇

上海市浦東醫(yī)院1婦產(chǎn)科，2普外科，上海201399

臨床上宮頸癌的病情進(jìn)展能夠增加患者盆腔內(nèi)臟器轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致患者生存預(yù)后的惡化。流行病學(xué)研究顯示，宮頸癌的發(fā)病率為（225～674）/10萬(wàn)，同時(shí)在經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)或具有高危型HPV感染的患者中，宮頸癌的發(fā)病率可持續(xù)上升[1]。基因轉(zhuǎn)錄水平或細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)因子的改變，能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的細(xì)胞核增殖、細(xì)胞異型性的改變。叉頭轉(zhuǎn)錄因子（fork transcription factor，F(xiàn)oxM1）的表達(dá)濃度的改變，能夠增加癌細(xì)胞DNA核轉(zhuǎn)錄基因的激活，促進(jìn)癌細(xì)胞腫瘤相關(guān)信號(hào)通路的上調(diào)，增加癌細(xì)胞浸潤(rùn)或者轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[2-3]。已證實(shí)FoxM1能夠在甲狀腺癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤或乳腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮重要的作用，認(rèn)為高表達(dá)的FoxM1是促進(jìn)患者臨床分期進(jìn)展、導(dǎo)致治療遠(yuǎn)期預(yù)后惡化的重要因子，但在宮頸癌中的分析研究不足。為了進(jìn)一步探討FoxM1的表達(dá)與宮頸癌的關(guān)系，從而為宮頸癌的診斷和治療提供理論基礎(chǔ)，本次研究選取手術(shù)后宮頸癌組織標(biāo)本90例，探討FoxM1的表達(dá)與宮頸癌患者臨床特征及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年1月至2012年8月上海市浦東醫(yī)院病理科收集的手術(shù)后宮頸癌組織標(biāo)本90例（宮頸癌組）及正常宮頸組織45例（對(duì)照組）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸癌患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[3]；②患者年齡19～65歲；③均為上海市浦東醫(yī)院手術(shù)后宮頸癌組織標(biāo)本；④手術(shù)前患者均未接受放化療、免疫治療；⑤患者接受了術(shù)后隨訪。排除標(biāo)準(zhǔn)：①轉(zhuǎn)移性宮頸癌；②具有放化療史、免疫治療史；③未能接受術(shù)后隨訪。宮頸癌組，年齡36～65歲，平均（52.0±9.8）歲；鱗癌76例，腺癌14例；依據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FⅠGO）分期：Ⅰ期59例，Ⅱ期31例；分化程度：高分化33例，中分化32例，低分化25例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例。對(duì)照組，年齡41～65歲，平均（53.0±10.6）歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 指標(biāo)檢測(cè)方法

所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4 mm，采用免疫組化鏈霉卵白素-生物素復(fù)合體法（strep avidin-biotin complex，SABC）染色，二氨基聯(lián)苯胺（diamionben zidene，DAB）顯色。FoxM1蛋白抗體、PV6000通用型二抗、SP試劑盒和DAB顯色盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。以陽(yáng)性片及磷酸鹽緩沖液代替一抗分別作為陽(yáng)性及陰性對(duì)照，高倍顯微鏡下觀察FoxM1蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

免疫組化結(jié)果判定[5]：FoxM1蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。①根據(jù)著色強(qiáng)度：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐色、黑色為3分；②根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。兩種積分相乘總分＜3分為陰性，≥3分為陽(yáng)性?？偡郑?分為“－”表達(dá)，3～5分為“+”表達(dá)，6～9分為“++”表達(dá)，＞9分為“+++”表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)-計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；生存分析采用Kaplan-Meier法，組間比較采用Log-rank法；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FoxM 1蛋白表達(dá)情況的比較

宮頸癌組織中的FoxM1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為74.44%（67/90），明顯高于對(duì)照組的8.89%（4/45），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=51.709，P＜0.01）。（表1）

表1 兩組標(biāo)本中FoxM 1蛋白的表達(dá)情況

2.2 宮頸癌組織標(biāo)本中FoxM 1蛋白表達(dá)情況與臨床特征的關(guān)系

宮頸癌組織中的FoxM1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率與患者的FⅠGO分期、腫瘤分化程度、發(fā)生肌層浸潤(rùn)有關(guān)（P＜0.05），與年齡、是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否發(fā)生脈管侵犯、是否累及陰道殘端無(wú)關(guān)（P＞0.05）。（表2）

表2 宮頸癌組織標(biāo)本中FoxM 1蛋白表達(dá)情況與臨床特征的關(guān)系[ n（%）]

2.3 宮頸癌組織標(biāo)本中FoxM 1蛋白表達(dá)情況與患者預(yù)后的關(guān)系

FoxM1蛋白陽(yáng)性表達(dá)的宮頸癌患者的5年生存率為44.44%，與陰性表達(dá)患者的68.18%比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見(jiàn)表3；FoxM1蛋白陽(yáng)性表達(dá)的宮頸癌患者的生存時(shí)間短于陰性表達(dá)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見(jiàn)圖1。

表3 宮頸癌組織標(biāo)本中FoxM 1蛋白表達(dá)情況與患者預(yù)后的關(guān)系[ n（%）]

圖1 宮頸癌組織標(biāo)本中FoxM 1蛋白表達(dá)陽(yáng)性及陰性患者的生存曲線

3 討論

過(guò)早的性生活、多次人工流產(chǎn)、HPV感染等因素，均可以促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生。宮頸癌的治療預(yù)后并不理想，長(zhǎng)期的臨床隨訪研究顯示，宮頸癌患者的治療預(yù)后特別是5年生存率不足35%，治療后的病死率或中位生存時(shí)間等預(yù)后指標(biāo)均無(wú)明顯改善[4-5]。免疫靶向治療或生物學(xué)治療方式，已越來(lái)越成為臨床上惡性腫瘤的重要輔助治療方式。而通過(guò)對(duì)于宮頸癌惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制研究，能夠?yàn)榕R床上宮頸癌的免疫靶向治療提供新的靶點(diǎn)，同時(shí)能夠?yàn)閷m頸癌的高危人群隨訪提供血清學(xué)指標(biāo)。

FoxM1蛋白結(jié)構(gòu)上包含了多個(gè)糖蛋白結(jié)合配體，同時(shí)包含了數(shù)個(gè)絲氨酸結(jié)構(gòu)，其對(duì)于體內(nèi)氧化應(yīng)激性蛋白酶的激活作用，能夠促進(jìn)患者體內(nèi)腫瘤微環(huán)境的改變，導(dǎo)致癌細(xì)胞的持續(xù)性增殖[6-7]。FoxM1在癌細(xì)胞內(nèi)的過(guò)度富集，能夠在癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面增加p16或p53等癌基因的轉(zhuǎn)錄上游啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，促進(jìn)腫瘤相關(guān)蛋白的高翻譯，影響細(xì)胞周期非依賴性蛋白激酶的活性，導(dǎo)致癌細(xì)胞中G1/S期比例明顯上升，而G0期細(xì)胞比例明顯下降[8-9]。近年來(lái)相關(guān)方面的研究表明，F(xiàn)oxM1蛋白主要表達(dá)于胎兒體內(nèi)的肝腎組織、平滑肌組織及部分神經(jīng)間質(zhì)成分中，在成人體內(nèi)的分化成熟組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較低[10-11]。FoxM1蛋白能夠?qū)е氯橄侔⑸窠?jīng)視網(wǎng)膜瘤放化療治療敏感性的下降，增加乳腺癌等患者的治療后復(fù)發(fā)率，同時(shí)雖然部分研究揭示了FoxM1蛋白與宮頸癌患者病理特征的關(guān)系，但對(duì)于其與患者臨床預(yù)后的關(guān)系研究不足。

本次研究通過(guò)免疫組化分析研究發(fā)現(xiàn)，在宮頸癌腫瘤組織中可以發(fā)現(xiàn)FoxM1蛋白的高表達(dá)，其陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常宮頸上皮組織，提示了FoxM1蛋白可能參與了宮頸癌的病情進(jìn)展過(guò)程中，可能能夠影響癌細(xì)胞的基因調(diào)控、癌細(xì)胞的生物學(xué)特征，促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡抑制等過(guò)程[12-13]：①FoxM1蛋白的高表達(dá)能夠影響到細(xì)胞內(nèi)AKT或者M(jìn)APK等信號(hào)通路的激活，促進(jìn)癌細(xì)胞對(duì)鄰近正常宮頸上皮細(xì)胞的浸潤(rùn)；②FoxM1蛋白能夠促進(jìn)宮頸上皮間質(zhì)成分中金屬蛋白酶的激活，促進(jìn)細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，從而為宮頸癌細(xì)胞的擴(kuò)散提供基礎(chǔ)。劉波等[14]在研究了部分宮頸鱗癌患者體內(nèi)的相關(guān)生物學(xué)因子譜的表達(dá)變化后發(fā)現(xiàn)，相比于宮頸癌旁組織，F(xiàn)oxM1蛋白在宮頸癌腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)率可平均上升25%以上，且患者的治療預(yù)后越差，治療后的無(wú)瘤生存期越短，F(xiàn)oxM1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率越高。在探討其與宮頸癌患者臨床特征的關(guān)系過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxM1蛋白的表達(dá)與宮頸癌患者的FⅠGO分期、腫瘤分化程度、發(fā)生肌層浸潤(rùn)等臨床特征有密切關(guān)系，提示FoxM1蛋白能夠明顯促進(jìn)患者的病情進(jìn)展，這主要考慮與FoxM1蛋白對(duì)癌細(xì)胞分化成熟誘導(dǎo)因子的表達(dá)影響，促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞對(duì)于基底膜組織、宮頸癌旁組織的浸潤(rùn)有關(guān)，但本次研究并未發(fā)現(xiàn)FoxM1蛋白的表達(dá)對(duì)宮頸癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或脈管浸潤(rùn)的影響，這可能與其對(duì)于癌細(xì)胞黏附能力的影響不足有關(guān)。在探討FoxM1蛋白與宮頸癌患者臨床預(yù)后關(guān)系的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxM1蛋白陽(yáng)性表達(dá)的宮頸癌患者，其遠(yuǎn)期生存預(yù)后較差，臨床上可以通過(guò)評(píng)估FoxM1蛋白的表達(dá)為宮頸癌患者的遠(yuǎn)期生存預(yù)后的預(yù)測(cè)提供參考。

本次研究的創(chuàng)新性在于探討了FoxM1蛋白的表達(dá)與宮頸癌患者遠(yuǎn)期生存預(yù)后的關(guān)系。綜上所述，F(xiàn)oxM1蛋白在宮頸癌組織中高表達(dá)，同時(shí)與宮頸癌患者的臨床分期等病理特征及生存預(yù)后有關(guān)。

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