我國豬瘟疫苗免疫現(xiàn)狀及抗體檢測方法綜述

祖立闖，謝金文，王文秀，沈志強(qiáng)，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

豬瘟（Classical swine fever,CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起一種高度接觸性、致死性的傳染病，是目前危害我國養(yǎng)豬業(yè)的頭號殺手，嚴(yán)重阻礙了我國養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展[1]。長期以來我國對豬瘟的防控采取以豬瘟兔化弱毒疫苗免疫接種為主，結(jié)合抗體監(jiān)測、生物安全等綜合措施有效防止了豬瘟的大規(guī)模暴發(fā)和流行。但受到母源抗體干擾、疫苗質(zhì)量、免疫劑量和方法、高密度免疫接種、其它病原體的免疫抑制作用、飼料霉變等因素的影響，豬瘟疫苗的免疫失敗現(xiàn)象仍時有發(fā)生，豬瘟在局部地區(qū)仍有發(fā)生與流行，甚至很嚴(yán)重[2-3]。豬瘟疫苗免疫后的抗體水平監(jiān)測對及時發(fā)現(xiàn)免疫失敗現(xiàn)象、修訂免疫程序、確保豬瘟疫苗免疫效果均至關(guān)重要。鑒于此，本文通過對2010年以來我國豬瘟疫苗免疫后抗體監(jiān)測文獻(xiàn)的整理與匯總，分析出了近幾年我國豬瘟疫苗的免疫現(xiàn)狀與特點，為我國當(dāng)前豬瘟的防控提供了有效信息，并為進(jìn)行針對性防疫措施的制定提供了科學(xué)依據(jù)。本文還對豬瘟疫苗免疫抗體檢測方法進(jìn)行了綜述，比較分析了各種抗體檢測方法的優(yōu)缺點以及發(fā)展前景，為獸醫(yī)部門及養(yǎng)殖單位選擇合理的抗體檢測方法提供參考。

1 豬瘟疫苗免疫效果監(jiān)測情況

隨著養(yǎng)殖單位對豬瘟疫苗免疫和抗體監(jiān)測工作的逐步重視，研究學(xué)者陸續(xù)對不同地區(qū)豬瘟疫苗免疫效果進(jìn)行了大量的抗體監(jiān)測。通過對2010年以來豬瘟疫苗免疫抗體監(jiān)測結(jié)果的匯總分析，發(fā)現(xiàn)近幾年我國豬瘟疫苗的免疫現(xiàn)狀呈現(xiàn)出以下3個顯著特點。

1.1 疫苗免疫效果整體較好

如表1所示，從整體檢測結(jié)果來看，豬瘟疫苗的免疫狀況較好，在2010年以來的76份豬瘟疫苗免疫抗體監(jiān)測文獻(xiàn)中，有64份的免疫抗體合格率超過了國家免疫方案中免疫抗體合格率≥70%的要求，即有84.21%（64/76）的文獻(xiàn)報道豬瘟疫苗免疫合格。

1.2 不同區(qū)域差異較大

如表1所示，不同區(qū)域免疫合格率差異較大，如2011—2013年貴州省9個地區(qū)免疫合格率僅為53.72%，而2011—2013年廣西14個市免疫合格率高達(dá)84.9%；如2013年河南信陽地區(qū)免疫合格率僅為75.5%，而2013年河北13個地市免疫合格率高達(dá)98.02%；如2016年新疆庫車縣免疫合格率僅為68.02%，而2016年安徽望江縣免疫合格率高達(dá)91.25%。這種差異產(chǎn)生的原因與不同地區(qū)對豬瘟疫苗免疫工作的重視程度、使用的豬瘟疫苗免疫程序不合理、養(yǎng)殖生產(chǎn)整體水平的參差不齊等均密切相關(guān)。

1.3 整體免疫合格率逐年提高

如表1所示，2012年以前的免疫抗體監(jiān)測文獻(xiàn)中免疫合格率多數(shù)低于80%，且有部分文獻(xiàn)低于70%的國家標(biāo)準(zhǔn)要求，而2012—2014年免疫合格率超過80%的文獻(xiàn)逐步增多，至2015—2016年的文獻(xiàn)免疫合格率大部分均超過80%，且出現(xiàn)免疫合格率高達(dá)90%以上的文獻(xiàn)報道，如2013—2016年福建南平免疫合格率達(dá)95.45%，2014—2016年江西贛州免疫合格率達(dá)91.83%，2015年遼寧沈陽免疫合格率達(dá)96.56%，2016年安徽望江縣的免疫合格率達(dá)91.25%。

表1 2010年以來豬瘟疫苗免疫抗體監(jiān)測情況匯總

2 豬瘟疫苗免疫抗體檢測方法綜述

2.1 中和試驗（VN）

中和試驗方法是將豬瘟病毒準(zhǔn)確定量后，加不同稀釋度的被檢血清，通過測定被檢血清阻止病毒感染試驗兔或細(xì)胞的能力而測定其抗體效價。利用試驗兔進(jìn)行中和試驗是《中國獸藥典》中法定的豬瘟抗體陰性豬篩選方法，可以認(rèn)為是豬瘟抗體檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其準(zhǔn)確性無需置疑，但該方法檢測結(jié)果易受試驗兔個體差異、健康狀況、飼養(yǎng)環(huán)境等因素影響，且檢測周期長、工作量大、成本高。利用細(xì)胞進(jìn)行中和試驗，因豬瘟病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中不產(chǎn)生細(xì)胞病變，故需借助標(biāo)記抗體（如熒光標(biāo)記）來檢測抗原抗體反應(yīng)的信號，該方法涉及細(xì)胞培養(yǎng)和顯微鏡觀察，操作復(fù)雜，檢測周期較長，對儀器設(shè)備、操作人員技術(shù)水平要求均較高，基層實驗室由于不具備試驗條件很難展開，限制了其在基層的推廣應(yīng)用。

2.2 間接血凝試驗（IHA）

IHA是將抗原包被于紅細(xì)胞表面，使之成為致敏的載體，然后將與相應(yīng)的抗體結(jié)合，從而使紅細(xì)胞拉聚在一起，出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)。IHA方法采用全病毒作為抗原，受抗原制備過程與病毒純化等方面的限制，IHA不同批次抗原的穩(wěn)定性和重復(fù)性均較差，同時該方法還存在血清樣品需經(jīng)過滅活處理，血清的質(zhì)量嚴(yán)重影響檢測結(jié)果，且檢測結(jié)果需肉眼判讀，受主觀因素影響大，但該方法操作簡便、檢測快速、無需特殊儀器設(shè)備，特別適合基層實驗室使用。

2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

ELISA檢測方法具有敏感性和特異性強(qiáng)、操作簡單、檢測快速、高通量、無輻射、價格低廉等特點，是當(dāng)前動物疫病診斷廣泛采用的免疫學(xué)技術(shù)。ELISA既可測定抗原也可測定抗體，常用的有直接法、間接法、夾心法、阻斷法。目前應(yīng)用于豬瘟抗體檢測的主要有間接法和阻斷法。間接ELISA方法中首先用特異性抗原包被固相載體，加入待測抗體（一抗），待測抗體與包被固相抗原發(fā)生特異性結(jié)合；再加入酶標(biāo)記的抗體（酶標(biāo)二抗），酶標(biāo)抗體與待測抗體發(fā)生特異性結(jié)合，再加入底物顯色液，底物顯色液與酶標(biāo)抗體發(fā)生特異性結(jié)合，最后顯色顏色的深淺與待測抗體的量成正比。阻斷ELISA是用特異性抗原包被固相載體，用酶標(biāo)記的抗特異性抗原的單克隆抗體作為競爭抗體，使之阻斷待檢血清與特異性抗原的反應(yīng)，根據(jù)阻斷率的大小判定陰陽性結(jié)果。ELISA檢測的敏感性和特異性均較高，阻斷ELISA的敏感性較間接ELISA更高，且ELISA方法具有微量、高通量等優(yōu)點，特別適合臨床大批量樣品的檢測，但ELISA方法尤其是阻斷ELISA方法操作較復(fù)雜，操作人員需要具有一定的專業(yè)技術(shù)水平，且需要酶標(biāo)儀等儀器設(shè)備，隨著我國基層獸醫(yī)實驗室的不斷建設(shè)與完善，ELISA方法將具有廣闊的發(fā)展空間和應(yīng)用前景。

2.4 膠體金免疫層析法（GICA）

GICA是結(jié)合膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)和層析分析技術(shù)發(fā)展起來的一種新型免疫學(xué)檢測技術(shù)，其以膠體金作為示蹤標(biāo)志物，將其標(biāo)記抗原或抗體后形成標(biāo)記物，樣品中的待測物與標(biāo)記物形成的絡(luò)合物通過層析作用在層析材料上泳動，與層析材料上針對該待測物的受體發(fā)生免疫反應(yīng)形成免疫復(fù)合物，免疫復(fù)合物中的膠體金大量聚集形成肉眼可見的紅色或粉紅色斑點。該方法特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測反應(yīng)時間短、操作簡便、操作人員不需培訓(xùn)、樣品不需預(yù)處理、無需特殊儀器設(shè)備、特別適合現(xiàn)場檢測。但該方法檢測豬瘟抗體只能提供一個定性的檢測結(jié)果，無法對抗體滴度進(jìn)行準(zhǔn)確定量，只能初步篩查豬瘟抗體，隨著膠體金免疫標(biāo)記技術(shù)的不斷發(fā)展，該方法將會逐步得到完善。

3 結(jié)語

通過對2010年以來我國豬瘟疫苗免疫情況的匯總分析，發(fā)現(xiàn)我國豬瘟疫苗總體免疫效果較好，免疫合格率逐年提高，但不同區(qū)域間豬瘟免疫抗體水平差異較大，部分區(qū)域豬瘟疫苗的免疫效果還不夠理想，應(yīng)該加強(qiáng)免疫和抗體監(jiān)測，及時調(diào)整免疫程序?；鶎荧F醫(yī)部門和養(yǎng)殖單位應(yīng)意識到豬瘟的危害性，疫苗免疫的必要性，抗體監(jiān)測的重要性，以及豬瘟綜合防控工作的持久性和嚴(yán)峻性，加強(qiáng)豬瘟疫苗免疫和抗體監(jiān)測工作，確保豬瘟疫苗免疫效果。通過對豬瘟幾種抗體檢測方法的比較，發(fā)現(xiàn)每種檢測方法都有自己的優(yōu)點和缺點，各實驗室可根據(jù)自身的情況選擇適合自己的方法，或選擇二種方法聯(lián)合使用。隨著免疫學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，各種豬瘟免疫抗體檢測方法均將會得到進(jìn)一步完善，不斷為豬瘟疫苗的免疫監(jiān)測提供技術(shù)保障，在豬瘟的綜合防控中實現(xiàn)更加理想的價值，逐步實現(xiàn)我國豬瘟的根除。

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