妊娠期糖尿病孕婦IGF-1表達與新生兒免疫球蛋白和T細胞亞群的相關(guān)性分析

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(中山大學(xué)附屬第八醫(yī)院(深圳福田)婦產(chǎn)科,廣東 深圳 518033)

妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus，GDM)是指妊娠期首次診斷的糖尿病，流行病學(xué)研究顯示我國GDM 發(fā)病率已高達17.5%[1]。目前，GDM發(fā)病機制尚未明確，但是大多數(shù)研究認為其發(fā)病與肥胖、高齡、營養(yǎng)過剩、運動缺乏等因素有關(guān)[2]。GDM與自然流產(chǎn)、巨大兒、新生兒低血糖、新生兒畸形等多種不良妊娠結(jié)局有關(guān)，孕婦產(chǎn)后2型糖尿病發(fā)生率高達25%～70%[3]。關(guān)于胰島素生長因子-1 (insulin-like growth factor-1，IGF-1)在胎盤生長和胎兒發(fā)育中的作用研究，近年來備受關(guān)注。研究顯示，胎盤組織IGF-1表達強度對妊娠結(jié)局有直接影響[4]。然而有關(guān)GDM孕婦胎盤組織IGF-1表達強度對新生兒免疫功能的研究報道甚少。本研究旨在探討GDM孕婦胎盤組織IGF-1表達及對新生兒免疫球蛋白和T細胞亞群的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料選取2015年12月～2017年12月我院婦產(chǎn)科收治的120例GDM孕婦作為觀察組。GDM診斷標(biāo)準(zhǔn)參照人民衛(wèi)生出版社第八版婦產(chǎn)科學(xué)：在妊娠24～28周以后進行口服葡萄糖耐量試驗，空腹及服糖后1、2小時的血糖值分別為5.1mol·L-1、10.0mol·L-1、8.5mol·L-1，任一時間點的血糖值達到或超過上述標(biāo)準(zhǔn)就確診為GDM。排除妊娠期高血壓、原有糖尿病、先天性心臟病、雙胎妊娠、早產(chǎn)、妊娠合并內(nèi)科疾病、產(chǎn)前發(fā)熱等炎癥急性期孕婦。另選取同期分娩的無任何并發(fā)癥無任何內(nèi)外科疾病的孕婦30例作為對照組。觀察組年齡21～38歲，平均(27.5±3.2)歲，孕周35～41周，平均(37.5±3.2)周，平均體重指數(shù)(27.4±2.9)kg/m2，初產(chǎn)婦73例，經(jīng)產(chǎn)婦47例；對照組年齡22～40歲，平均(28.3±3.3)歲，孕周36～40周，平均(36.8±3.0)周，平均體重指數(shù)(26.8±3.4)kg/m2，初產(chǎn)婦19例，經(jīng)產(chǎn)婦11例。兩組孕婦的基線資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。所有孕婦及其家屬均簽署知情同意書，經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2標(biāo)本采集(1)胎盤娩出后，取1.0×1.0×1.0 cm胎盤組織，注意避開鈣化和壞死區(qū)域，用無菌生理鹽水沖洗干凈。一份胎盤組織經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片4 μm，采用免疫組織化學(xué)法檢測IGF-1表達。(2)采集新生兒外周靜脈血，采用流式細胞儀檢測T細胞亞群(CD3、CD4、CD8、CD4/CD8)，采用免疫比濁法檢測血清IgG、IgA和IgM。

1.3免疫組織化學(xué)法檢測IGF-1表達取出1.2中保存的胎盤組織石蠟切片，參照文獻[5]的方法行免疫組織化學(xué)檢測，以PBS代替一抗作為陰性對照。從陽性細胞比例和染色強度兩方面進行評分：陽性細胞比例低于5%，計0分；陽性細胞比例占5%～30%，計1分；陽性細胞比例占31%～60%，計2分；陽性細胞比例大于60%，計3分。棕色染色計3分，淺棕色染色計2分，淺黃色染色計1分，無染色計0分。兩項評分相乘，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為陽性(++)，6～9分為強陽性(+++)。

2 結(jié) 果

2.1兩組孕婦胎盤組織IGF-1表達比較Kruskal-WallisH秩和檢驗顯示，觀察組IGF-1表達強度大于對照組(P<0.05)，詳見表1。IGF-1呈棕黃色，主要存在于滋養(yǎng)層上皮細胞漿，詳見圖1。

表2 兩組孕婦胎盤組織IGF-1表達比較

圖1 免疫組織化學(xué)法檢測兩組孕婦胎盤組織IGF-1表達(400×)A：對照組胎盤組織IGF-1表達，B：觀察組胎盤組織IGF-1表達

2.2兩組新生兒外周血免疫球蛋白比較觀察組新生兒外周血IgG水平低于對照組(P<0.05)；兩組IgA和IgM水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表2 兩組新生兒外周血免疫球蛋白比較(g/L)

2.3兩組新生兒外周血T細胞亞群比較觀察組新生兒外周血CD3、CD4和CD4/CD8低于對照組(P<0.05)，而CD8高于對照組(P<0.05)。

表3 兩組新生兒外周血T細胞亞群比較(%)

2.4 IGF-1表達強度與免疫球蛋白和T細胞亞群的相關(guān)性Spearman分析顯示，IGF-1表達強度與IgG、CD3、CD4、CD4/CD8呈負相關(guān)(Rs=-0.539，-0.421，-0.389，-0.503，P<0.05)，而與CD8呈正相關(guān)(Rs=0.412，P<0.05)。

3 討 論

胰島素樣生長因子和胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白，在調(diào)節(jié)人類卵巢和子宮內(nèi)膜的功能方面發(fā)揮作用[6]。同時IGF-1具有胰島素樣作用，IGF-1可影響孕婦血糖水平，在胎兒生長發(fā)育過程中發(fā)揮重要調(diào)控作用，胎盤組織IGF-1表達強度對妊娠結(jié)局有直接影響。錢敏,等[7]報道顯示IGF-1可通過影響胎盤的轉(zhuǎn)運和代謝繼而影響胎盤生長和胎兒發(fā)育。孟曉瑜,等[8]認為GDM孕婦胎盤組織IGF-1水平顯著升高，且存在明顯的糖脂代謝紊亂，IGF-表達強度與新生兒體質(zhì)量和三酰甘油呈正相關(guān)。湯栩文,等[9]研究顯示GDM血糖控制不良孕婦胎盤組織中IGF-1表達強度明顯大于GDM血糖控制良好孕婦及正常妊娠孕婦。本研究通過對比分析觀察組和對照組孕婦胎盤組織IGF-1表達的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：觀察組胎盤組織IGF-1表達強度顯著大于對照組，IGF-1呈棕黃色主要存在于滋養(yǎng)層上皮細胞漿。這與已有的研究基本一致，提示IGF-1與GDM的發(fā)病密切相關(guān)。

有關(guān)IGF-1表達強度與GDM發(fā)病、巨大兒等研究報道較多[10-11]，而IGF-1對新生兒免疫功能的影響研究，報道甚少。程麗琴等[12]通過研究發(fā)現(xiàn)GDM胎盤組織中的IGF-1表達水平較健康孕婦高，GDM胎盤組織中的高IGF-1表達可顯著影響新生兒T淋巴細胞亞群，導(dǎo)致新生兒免疫功能低下。新生兒免疫功能不同于兒童和成人，其血清IgG主要來自母體，約占所有血清免疫球蛋白總量的75%，在預(yù)防白喉、麻疹、脊髓灰質(zhì)炎等感染方面發(fā)揮重要作用[13-14]。CD3和CD4主要誘導(dǎo)和輔助免疫，CD8又稱為抑制性T細胞，主要平衡CD3和CD4功能。CD4/CD8比值是衡量機體免疫功能的最主要指標(biāo)，其比值過低說明機體處于 “免疫抑制” 狀態(tài)[15]。本研究對比分析觀察組和對照組孕婦分娩的新生兒免疫球蛋白和T細胞亞群的差異，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：觀察組新生兒外周血IgG、CD3、CD4和CD4/CD8較對照組顯著降低，而CD8明顯增加；Spearman分析顯示IGF-1表達強度與IgG、CD3、CD4、CD4/CD8呈負相關(guān)，而與CD8呈正相關(guān)。本研究結(jié)果說明GDM孕婦胎盤組織IGF-1表達強度可影響新生兒外周血免疫球蛋白和T細胞亞群，導(dǎo)致其免疫功能低下，抗感染能力降低。此外，本研究中兩組新生兒外周血IgA和IgM比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，究其原因可能是因為IgA和IgM無法通過胎盤屏障[16]，所以兩組新生兒IgA和IgM整體水平均很低。張凌云,等[17]研究證實GDM孕婦有效控制血糖有利于增強新生兒免疫功能，而血糖控制不良有可能引起新生兒免疫功能低下。盡管該研究并未直接論證IGF-1對新生兒免疫功能的影響，但推測二者可能存在一定的相關(guān)性。

綜上所述，妊娠期糖尿病孕婦胎盤組織IGF-1表達強度明顯增加，并影響新生兒外周血免疫球蛋白和T細胞亞群，引起新生兒免疫功能低下。尚需進一步研究證實。

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