大鱗鲃人工繁殖技術(shù)及胚胎發(fā)育觀察

張棋 黃敏 李允 朱文歡 黃天樂 劉子棟 邵端 李莉娟

摘要：從重慶引進(jìn)大鱗鲃?dòng)H魚進(jìn)行了人工繁殖試驗(yàn)及胚胎發(fā)育觀察。結(jié)果表明，注射LHRH-A2 3.5 μg/kg、HCG 600 IU/kg、DOM 3.5 μg/kg催產(chǎn)效果最佳，水溫21～25 ℃，效應(yīng)時(shí)間18 h，受精率68.0%，孵化率26.1%。雌性親魚相對產(chǎn)卵量7.7萬/kg，卵為灰白色，漂浮性卵，無黏性，卵重360個(gè)/g，卵徑1.5 mm，吸水后膨脹卵徑達(dá)4.5 mm。孵化到仔魚出膜需53～56 h，140 h后開口攝食。

關(guān)鍵詞：大鱗鲃；人工繁殖；胚胎發(fā)育

中圖分類號：S961.2；Q132 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2018）08-0100-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.08.025

Artificial Propagation and Observations on the Embryonic

Development of Barbus capito

ZHANG Qi1，HUANG Min1，LI Yun2，ZHU Wen-huan1，HUANG Tian-le1，LIU Zi-dong1，SHAO Duan1，LI Li-juan3

（1.Wuhan Aquaculture Technology and Popularization Center，Wuhan 430012，China；2.Wuhan Yushuiqing Ecological Fisheries Development Ltd.，Wuhan 430040，China；3.College of Fisheries，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China）

Abstract： In order to enrich the varieties of aquaculture in Wuhan，Barbus capito as parent fish were introduced from Chongqing. This study investigated the artificial propagation and embryonic development of Barbus capito. The results showed the injection of 3.5 μg/kg LHRH-A2，600 IU/kg HCG and 3.5 μg/kg DOM made better spawning effect. When the water temperature between 21～25 ℃，the response time of oxytocic was 18 h，the fertilization rate of eggs was 68.0%，and the hatchability rate was 26.1%. The relative fecundity of female parent fish was 77 000/kg，the eggs were offwhite，pelagic and non-viscid. The weight of egg was 360 g，the diameter of egg was 1.5 mm，and expanded to 4.5 mm after absorbing water.It took 53～56 h from being fertilized to hatching as larva stage，and took 140 h to initial feeding.

Key words： Barbus capito； artificial propagation； embryonic development

大鱗鲃（Barbus capito）隸屬鯉科鲃亞科鲃屬，原產(chǎn)于烏茲別克斯坦，為洄游性魚類，生活在咸海水域，生殖季節(jié)期間洄游到阿姆河進(jìn)行自然繁衍[1，2]。具有食性廣、生長快、耐鹽堿、抗逆性強(qiáng)、適應(yīng)性強(qiáng)、肉質(zhì)鮮美等特點(diǎn)，成魚體重可達(dá)3～6 kg，是當(dāng)?shù)孛F大型經(jīng)濟(jì)魚類之一。

為豐富武漢地區(qū)水產(chǎn)養(yǎng)殖品種，優(yōu)化產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)，提高養(yǎng)殖效益，武漢漁水情生態(tài)漁業(yè)發(fā)展有限公司從重慶地區(qū)引進(jìn)性成熟大鱗鲃?dòng)H魚進(jìn)行人工繁殖試驗(yàn)，為后續(xù)推廣大鱗鲃養(yǎng)殖解決苗種供應(yīng)問題奠定了基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)親魚

2017年3月6日從重慶地區(qū)引進(jìn)4齡性成熟親魚18尾，雌性9尾，雄性9尾，經(jīng)過2個(gè)月馴養(yǎng)，雌性體重2.20～3.05 kg，雄性體重1.65～2.45 kg。

1.2 人工催產(chǎn)

2017年5月4日，水溫穩(wěn)定在21～25 ℃，親魚分為3組，分別為A、B、C，每組數(shù)量相等，雌雄比 1∶1。雌魚注射兩次，注射藥物及劑量、注射間隔時(shí)間見表1。雄魚只注射第二針，劑量為雌魚劑量減半，注射方法均為胸鰭基部腹腔注射。注射后于暫養(yǎng)池暫養(yǎng)，暫養(yǎng)池3.0 m×2.0 m×0.8 m，水深0.5 m，流水刺激。

當(dāng)發(fā)現(xiàn)水體中有漂流的魚卵后，將親魚撈出，采用干法人工授精。用干毛巾擦干雌魚體表，按壓腹部，將卵擠在干凈、無水、光滑的盆中，然后用同樣的方法將雄魚精液擠到卵上，用羽毛攪拌均勻，約2 min，再加少量清水拌和，靜置2～3 min，慢慢加入半盆清水，繼續(xù)攪動(dòng)，使精子和卵子充分結(jié)合，然后倒去渾濁水，再用清水洗卵3～4次，卵膜吸水膨脹后便可移入孵化器中孵化。

1.3 產(chǎn)卵量、卵重、受精率、孵化率和卵徑的測定

絕對產(chǎn)卵量=產(chǎn)卵總重×樣本卵數(shù)/樣本卵重。

相對產(chǎn)卵量=絕對產(chǎn)卵量/雌魚體重。

卵重=樣本卵數(shù)/樣本卵重×100。

魚卵發(fā)育到原腸中期統(tǒng)計(jì)受精卵數(shù)和總樣本卵數(shù)，受精率（%）=受精卵數(shù)/樣本卵數(shù)×100。

移出孵化器時(shí)統(tǒng)計(jì)魚苗數(shù)，孵化率（%）=出苗數(shù)/樣本受精卵數(shù)×100。

取20粒卵，游標(biāo)卡尺測定卵徑，計(jì)算平均值。

親魚催產(chǎn)和胚胎發(fā)育過程中全程監(jiān)測水質(zhì)變化，包括水溫、pH、溶解氧、總?cè)芙夤腆w和鹽度。

1.4 胚胎發(fā)育過程觀察

在顯微鏡下觀察受精卵胚胎發(fā)育過程中的形態(tài)變化，胚胎發(fā)育前期每0.5 h觀察1次，到達(dá)囊胚期后1～2 h觀察1次。每次觀察取樣30粒以上，當(dāng)60%樣品達(dá)到某一發(fā)育階段時(shí)，則記為該發(fā)育階段的起始時(shí)間，觀察至出膜。

2 結(jié)果與分析

2.1 人工繁殖效果

大鱗鲃卵為灰白色，漂浮性卵，無黏性，雌性親魚相對產(chǎn)卵量為7.7萬/kg，卵重360個(gè)/g，卵徑1.5 mm，吸水后膨脹卵徑達(dá)到4.5 mm。各組親魚產(chǎn)卵的效應(yīng)時(shí)間、受精結(jié)果和孵化結(jié)果見表2，C組催產(chǎn)失敗，親魚未產(chǎn)卵。A組效應(yīng)時(shí)間為9 h，受精卵少，為7.5萬粒，受精率12.5%，B組效應(yīng)時(shí)間18 h，受精卵達(dá)57.6萬粒，受精率達(dá)68.0%，A組和B組孵化率相近，A組為28.0%，B組為26.1%，由此可見，A組效應(yīng)時(shí)間比B組短，但催產(chǎn)效果不佳，不及B組。水質(zhì)監(jiān)測結(jié)果見圖1，在各組溶氧量中可以看到，在注射第一針催產(chǎn)劑后24 h，溶氧量急劇下降，因本次人工繁殖試驗(yàn)，在此時(shí)出現(xiàn)意外斷電現(xiàn)象，時(shí)間持續(xù)約30 m，此時(shí)采取的增氧方式為人工攪水增氧。各催產(chǎn)及孵化階段，水體pH、水溫、總?cè)芙夤腆w量和鹽度均在合理范圍內(nèi)。

2.2 胚胎發(fā)育過程

受精卵遇水后吸水膨脹，約1 h后達(dá)到最大，可見明顯的卵膜。在水溫20～24 ℃條件下，從受精卵孵出仔魚需53～56 h，140 h后開口攝食，各發(fā)育階段及受精后時(shí)間見表3。受精后2 h，細(xì)胞質(zhì)向動(dòng)物極集中，逐漸隆起，形成帽狀的胚盤。受精后2.5 h開始，胚盤經(jīng)多次卵裂，細(xì)胞越分越小，越分越快，并重疊形成多層。受精后5.5 h，卵裂繼續(xù)進(jìn)行，細(xì)胞越堆越高，形成囊胚，達(dá)到囊胚早期，后慢慢向下包圍，高度下降，從外形上看類似于剛受精的卵，達(dá)到囊胚晚期。受精后12 h，胚盤邊緣形成環(huán)形的帶，稱為胚環(huán)，胚環(huán)向胚體邊緣下包，邊緣增厚，進(jìn)入原腸期。受精后14 h，下包到卵黃的約1/2，出現(xiàn)明顯增厚，稱為胚盾，此時(shí)為原腸中期。受精后16.5 h，胚環(huán)下包達(dá)到卵黃的約4/5時(shí)，裸露在外的卵黃稱為卵黃栓，胚環(huán)成為胚孔，胚盾變長，并向動(dòng)物極延伸，此時(shí)為原腸晚期。受精后17.5 h，胚胎由圓形變成橢圓形，側(cè)臥，當(dāng)胚環(huán)移動(dòng)到植物極，胚孔閉合，胚盾延長，中線形成神經(jīng)索，并在靠近動(dòng)物極一段膨大，形成未來的頭部，達(dá)到胚孔閉合期，胚體形成，可見體節(jié)。受精后26 h，頭部兩側(cè)出現(xiàn)眼囊，體節(jié)更加明顯。受精后29 h，胚體尾部伸出芽狀突起，稱為尾芽。受精后36 h，尾芽翹起，伸長，胚體開始緩慢扭動(dòng)，每分鐘約2～3次，胚胎發(fā)育進(jìn)入肌肉效應(yīng)期。受精后39.3 h，眼囊變?yōu)橐暠?，趨圓，出現(xiàn)晶體。受精后46 h，腦部與卵黃囊前段之間，出現(xiàn)心臟原基，后逐漸開始跳動(dòng)，進(jìn)入心跳期。受精后50.6 h，卵黃囊逐漸變小，胚體轉(zhuǎn)動(dòng)頻率加快，準(zhǔn)備出膜。受精后53 h，胚體尾部劇烈擺動(dòng)，仔魚陸續(xù)出膜。受精后71 h，循環(huán)系統(tǒng)逐漸明顯，仔魚活力增強(qiáng)。受精后95 h，仔魚眼部出現(xiàn)色素。受精后140 h開口攝食（圖2）。

3 小結(jié)與討論

大鱗鲃自然條件下生長季節(jié)位于鹽度較高的咸海水域，繁殖季節(jié)洄游到淡水河流。2003年中國水產(chǎn)科學(xué)院黑龍江水產(chǎn)研究所通過實(shí)施農(nóng)業(yè)部“948”（大鱗鲃引進(jìn)）項(xiàng)目引入中國，2010年大鱗鲃人工繁殖首次成功[3]，后經(jīng)河北省水產(chǎn)技術(shù)推廣站等單位繼續(xù)探索，人工繁殖再次成功[4-6]。本研究中人工繁殖效應(yīng)時(shí)間相較耿龍武等[3]報(bào)道時(shí)間縮短，可能與所用催產(chǎn)藥物濃度不同有關(guān)。本次人工繁殖孵化率26.1%～28.0%，相較耿龍武等[3]報(bào)道偏低，或與孵化水體溶氧有關(guān)，本試驗(yàn)受精卵孵化期間意外停電30 min，導(dǎo)致孵化器內(nèi)水流沖擊停止，只能人工攪水，水體溶氧量由停電前約7 mg/L降低到5 mg/L，影響了受精率和孵化率。在受精卵孵化期間，水霉病危害嚴(yán)重，及時(shí)清理發(fā)育停滯、死亡的受精卵，有助于預(yù)防水霉病的暴發(fā)[7]。大鱗鲃孵化過程中，過多的浮游動(dòng)物，尤其是橈足類，也會影響存活率[8]。

大鱗鲃卵為漂浮性、無黏性，與其他洄游繁殖的魚類具有相似特點(diǎn)，例如鰣魚[9]、刀鱭[10]，與黑脊倒刺鲃卵特性不同，黑脊倒刺鲃卵為微黏性，沉性卵[11]。大鱗鲃卵徑1.5 mm，小于黑脊倒刺鲃（1.9～2.1 mm）[11]和中華倒刺鲃（1.8～2.0 mm）[12]，吸水后膨脹卵徑達(dá)4.5 mm，大于黑脊倒刺鲃（2.8～3.2 mm）和中華倒刺鲃（2.6～2.8 mm）。

本研究中大鱗鲃胚胎發(fā)育與徐偉等[13]報(bào)道一致，與黑脊倒刺鲃胚胎發(fā)育過程相似[11]。黑脊倒刺鲃在水溫25～28 ℃下，孵化出膜需約45 h[11]；中華倒刺鲃在水溫（25±0.5） ℃下，孵化出膜約需50 h[12]。同為洄游性魚類的小體鱘在水溫（18±1） ℃下，孵化出膜歷時(shí)110 h[14]；中華鱘在水溫（18.5±0.5） ℃下，孵化出膜需120（115-150） h[15]；白亞口魚在水溫15 ℃下需184 h[16]。家魚中，草魚在水溫24～26 ℃下需25.5 h[17]，鰱在水溫28.5～29.5 ℃下約需17 h[18]。水溫對胚胎發(fā)育的影響最為直接[19，20]，在一定溫度范圍內(nèi)，水溫越高，胚胎發(fā)育速度越快，水溫越低，胚胎發(fā)育速度越慢，超過適宜的溫度范圍則導(dǎo)致胚胎發(fā)育停滯、發(fā)育畸形甚至死亡[21]。本研究中大鱗鲃孵化水溫在21～25 ℃，出膜時(shí)間53～56 h，孵化水溫比鰱要低，出膜時(shí)間比鰱長；但比小體鱘、中華鱘、白亞口魚孵化水溫要高，出膜時(shí)間短；大鱗鲃孵化水溫、出膜時(shí)間等與黑脊倒刺鲃、中華倒刺鲃相近。

本試驗(yàn)為后期大鱗鲃在長江中下游流域養(yǎng)殖推廣具有重要意義，大鱗鲃養(yǎng)殖區(qū)域多位于北方地區(qū)，年平均水溫較低，魚類生長季節(jié)較短，湖北武漢地區(qū)適合魚類生長水溫時(shí)間較長，能提高大鱗鲃生長速度，豐富該地區(qū)養(yǎng)殖品種，增加漁民收入，促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。

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