紫外分光光度法測定化妝品中煙酰胺的含量

(廣東省科技職業(yè)技術(shù)學(xué)校 化工教研室，廣州 510650)

煙酰胺(nicotinamide)，化學(xué)名為3-吡啶甲酰胺，又稱維生素B3，是一種水溶性維生素，其結(jié)構(gòu)式見圖1。

圖1 煙酰胺結(jié)構(gòu)式

煙酰胺的作用近年來逐漸被學(xué)界所知，在化妝品行業(yè)中應(yīng)用廣泛，是一種多功能活性成分，其功效已在許多專業(yè)期刊中得到證實。研究表明[1]，煙酰胺可以有效地減少可消除皮膚因老化或外界侵害造成的皺紋、起皮、毛孔變大等，使得皮膚外觀更加光滑和均勻，具有美白、抗衰老、改善皮膚屏障功能、保濕和治療痤瘡六大護膚功效。市場上有多個品牌的化妝品都標注含有煙酰胺，然而這些產(chǎn)品中是否真的添加了煙酰胺以及添加量都不得而知。因此針對煙酰胺的檢測研究有利于保護廣大消費者的權(quán)益。同時，可以規(guī)范企業(yè)的化妝品成分標注行為。

目前，煙酰胺的檢測主要以高效液相色譜法和毛細管電泳法為主，而紫外分光光度法尚沒有相關(guān)報道[2]。本實驗建立了一種測定化妝品中煙酰胺含量的紫外分光光度法。該方法前處理簡單、快速、定量準確。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

(1)UV-1800PC型紫外分光光度計，上海美普達儀器有限公司；SC-10型高速離心機，轉(zhuǎn)速10000r/min以上，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；NH-1001型超聲水浴，廣州華南超聲設(shè)備有限公司；BSA124型電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；JJ600型電子天平，常熟市雙杰測試儀器廠；100μL～1000μL可調(diào)式移液器，大龍興創(chuàng)實驗儀器(北京)有限公司。

(2)所用試劑均為分析純，試驗用水為分析實驗室用二級水。

(3)煙酰胺標準貯備液：準確稱取煙酰胺標準物0.3000g至50mL燒杯中，用水溶解，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度成標準貯備液(3000μg/mL)。再吸取10.00mL的標準貯備液至100mL容量瓶中，用水定容至刻度作為標準使用溶液(300.0μg/mL)。

1.2 樣品的提取溶劑的選擇

據(jù)報道煙酰胺溶于水和醇，不溶于二氯甲烷。而二氯甲烷可以除去化妝品中脂溶性成分以及表面活性劑成分[3]。因此選擇了較為簡便的水/二氯甲烷體系，比例為1∶1。

1.3 樣品的前處理方法

稱取樣品約0.10g于10mL具塞離心管中，加入5mL水和5mL二氯甲烷[4]，強烈震蕩后，超聲提取15min，強烈震蕩后于8000r/min轉(zhuǎn)速下離心分離3min，取上清液檢測。

1.4 煙酰胺檢測波長的確定

吸取8.00mL的煙酰胺標準使用溶液(300.0μg/mL)至100mL容量瓶中，用水定容至刻度。用紫外分光光度計的光譜掃描獲得的煙酰胺在200nm至350nm間的特征吸收曲線，見圖2。從吸收曲線圖可看出煙酰胺在214nm和262nm處有最大吸收峰，262nm的紫外吸收有相對的特異性。考慮到在該波長下檢測，可以避免二氯甲烷的紫外吸收干擾以及部分樣品雜質(zhì)對紫外吸收的干擾，有利于目標成分的準確定量，因此確定檢測波長為262nm。

圖2 煙酰胺的吸收曲線圖

2 結(jié)果與討論

2.1 方法的線性與檢出限

分別吸取0、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL的煙酰胺標準使用溶液(300.0μg/mL)至100mL容量瓶中，用水定容至刻度。該系列的標準溶液的質(zhì)量濃度分別為0、3.000、6.000、12.000、18.000和30.000μg/mL。按紫外分光光度法測定其吸光度，數(shù)據(jù)如表1所示。

表1 標準曲線數(shù)據(jù)點

以吸光度A對質(zhì)量濃度c(μg/mL)繪制標準曲線，見圖3。煙酰胺濃度在0.000至30.000μg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈線性關(guān)系，線性回歸方程為A=0.024723*c-0.00107，相關(guān)系數(shù)R=0.99998。

圖3 煙酰胺的標準曲線圖

在相同的測試條件下，以3、10倍空白樣品的標準偏差0.001342(n=6)除以標準曲線的斜率0.02473，計算出煙酰胺的檢出濃度為0.16μg/mL，最低定量濃度為0.54μg/mL。

2.2 方法的精密度和重復(fù)性試驗

取不同煙酰胺含量的膏霜樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長262nm下測定其吸光度，平行測定6次，計算得相對標準偏差(RSD)在1.41%～5.89%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測定6次，計算得RSD在3.56%～4.62%。結(jié)果見表2。

表2 膏霜樣品中煙酰胺測定的精密度和重復(fù)性(n=6)

取不同煙酰胺含量的水劑樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長262nm下測定其吸光度，平行測定6次，計算得相對標準偏差(RSD)在1.91%～3.35%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測定6次，計算得RSD在1.45%～3.87%。結(jié)果見表3。

表3 水劑樣品中煙酰胺測定的精密度和重復(fù)性(n=6)

取不同煙酰胺含量的乳劑樣品提取液0.10mL至100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度。在波長262nm下測定其吸光度，平行測定6次，計算得相對標準偏差(RSD)在2.56%～4.29%。將同一樣品按1.2處理方法提取并測定6次，計算得RSD在2.99%～4.71%。結(jié)果見表4。

表4 乳劑樣品中煙酰胺測定的精密度和重復(fù)性(n=6)

2.3 方法的加標回收率試驗

準確移取0.00、1.00、4.00、8.00mL煙酰胺標準使用溶液(300.0μg/mL)置于100mL容量瓶中，再分別移取1.00mL各類樣品加入中，用水稀釋至刻度。得高、中、低水平下的樣品加標回收率，如表5所示，回收率在100.20%～108.78%之間。

表5 煙酰胺加標回收率

2.4 方法的試樣穩(wěn)定性試驗

吸取同一樣品提取液，于室溫放置0、30、60、90、120min測定吸光度，其吸光度的RSD為1.09%～2.07%，表明樣品在2h內(nèi)穩(wěn)定，數(shù)據(jù)見表6。

表6 煙酰胺2h內(nèi)穩(wěn)定性數(shù)據(jù)

2.5 與高效液相色譜法比較(GB/T 29664-2013)

根據(jù)GB/T 29664-2013化妝品中維生素B3(煙酸、煙酰胺)的測定中的液相色譜分析條件進行HPLC分析。樣品中煙酰胺的含量，用標準曲線外標法來確定，然后計算煙酰胺含量與紫外分光光度法進行比較。HPLC測定結(jié)果與紫外分光光度法比較見表7。

表7 HPLC法與紫外分光光度法測定結(jié)果比較

由表7可知，紫外分光光度法測定樣品中煙酰胺含量比HPLC法略偏低，其相對于HPLC法的偏差沒有超過5%，基本上可以滿足樣品中煙酰胺含量測定的需要。

2.6 實際樣品分析

對市售主要含有煙酰胺的6種不同類型的化妝品進行了測定，它們的煙酰胺質(zhì)量比含量在4.70mg～51.27mg/g之間。

3 結(jié)論

利用煙酰胺在紫外光區(qū)262nm處有明顯的吸收，建立了化妝品中煙酰胺含量的紫外分光光度法，在0至30.000μg/mL范圍內(nèi)，煙酰胺質(zhì)量濃度與紫外吸光度呈良好的線性關(guān)系，線性回歸方程為A=0.02473*C-0.00107，相關(guān)系數(shù)R=0.99998，采用此法對化妝品中煙酰胺的含量是可行的。該方法簡單易行，靈敏度較高，結(jié)果準確，可快速測定化妝品中煙酰胺的含量，結(jié)果令人滿意。

[1] 彭曉鳳，孫宏麗，吳一微.美白化妝品中煙酰胺的分離分析方法研究進展[J].湖北師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)：2017，37(1)：51-55.

[2] 王宏斌，蘇曉春.煙酰胺在化妝品中的應(yīng)用[J].中國化妝品：行業(yè)版，2003，(9)：65-68.

[3] 毛希琴.高效液相色譜法測定化妝品中的煙酸和煙酰胺[J].日用化學(xué)工業(yè)，2012，42(6)：470-472.

[4] 林毅侃，顧宇翔，王承平等.高效液相色譜法測定化妝品中煙酰胺的含量[J].香精香料化妝品，2015(3)：29-32.