健脾益氣通絡(luò)中藥對(duì)糖尿病腎病大鼠腎組織nephrin、CD2AP基因表達(dá)的影響

（云南省中醫(yī)醫(yī)院 云南 昆明 650021）

李瓊鋒 王宮林（通訊作者） 韋袞政 趙義

糖尿病腎病是糖尿病比較常見的一種全身微血管相關(guān)并發(fā)癥，帶來比較大的危害[1]。對(duì)糖尿病腎病開展健脾、益氣及通絡(luò)治療能獲得良好效果。本文主要研究將健脾益氣通絡(luò)中藥應(yīng)用于糖尿病腎病大鼠模型中對(duì)其腎組織nephrin、CD2AP基因表達(dá)的影響作用。

1.材料和方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選取60只健康雄性SD大鼠，均為SPF級(jí)，大鼠體重是200g到250g，由昆明楚商科技有限公司提供。

1.1.2 試劑及儀器

健脾益氣通絡(luò)中藥包含黃芪30g、白術(shù)20g、黨參20g、茯苓20g、澤蘭20g、丹參20g、水蛭6g。試鏈脲佐菌素（由美國Sigma公司提供）。Trizol試劑（由美國Invitrogen公司提供）。西藥選用洛汀新（鹽酸苯那普利片，10mg/片，北京諾華制藥有限公司制造）。逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（由加拿大MBI Fermentas公司提供）。DNA純化試劑盒、CD2AP、nephrin、β-actin試劑和相關(guān)引物（均由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司提供）。PCR循環(huán)儀（由英國horhnoHybaid公司提供）。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組

60只SD大鼠飼養(yǎng)一周后通過背部切口開展左腎切除手術(shù)，兩周之后隨機(jī)抽10只為左腎切除組，剩余大鼠在其腹腔將STZ注入，72小時(shí)之后經(jīng)尾靜脈抽血檢測(cè)血糖，若血糖檢測(cè)值大于等于16.7mmol/L則評(píng)定為模型構(gòu)建成功。剩余大鼠隨機(jī)分成糖尿病腎病模型組、r一組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組，一組收入10只，洛汀新組大鼠予以0.9mg/kg.d實(shí)施灌胃處理，糖尿病腎病+中藥低劑量組大鼠予以5.29mg/kg.d健脾益氣通絡(luò)中藥實(shí)施灌胃處理，糖尿病腎病+中藥中劑量組大鼠予以5.29mg/kg.d健脾益氣通絡(luò)中藥實(shí)施灌胃處理，糖尿病腎病+中藥高劑量組大鼠予以21.16mg/kg.d健脾益氣通絡(luò)中藥實(shí)施灌胃處理，左腎切除組、糖尿病腎病模型組予以等量的生理鹽水實(shí)施灌胃處理，每天進(jìn)行1次灌胃，持續(xù)灌胃6周。

1.3 RT-PCR檢測(cè)nephrin、CD2AP基因表達(dá)情況

開展30個(gè)RT-PCR循環(huán)，將擴(kuò)增得到長度是192bp的片段，將產(chǎn)物置于2℃下儲(chǔ)存。之將產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠上點(diǎn)樣開展電泳實(shí)驗(yàn)，半小時(shí)之后于紫外光燈下面對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察和判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)采取統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（SPSS21.0版本）開展驗(yàn)證，nephrin吸光度測(cè)定值、CD2AP吸光度測(cè)定值表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）的形式，開展t檢驗(yàn)，P＜0.05，出現(xiàn)數(shù)據(jù)檢測(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 六組大鼠一般情況分析

左腎切除組神狀態(tài)良好，飲食正常，動(dòng)作敏捷，反應(yīng)靈敏，毛色光澤，肌肉豐滿，尿量正常，沒用死亡情況。將STZ注入之后，五組大鼠均多食、多飲及多尿，大鼠的精神較為萎靡，大鼠的反應(yīng)較為遲鈍等。治療期間均有死亡情況，其中中藥低劑量、高劑量組各死亡3只，中藥中劑量、洛汀新組各死亡2只，模型組死亡4只。

2.2 對(duì)比和分析六組大鼠腎組織nephrin吸光度測(cè)定值、CD2AP吸光度測(cè)定值

糖尿病腎病模型組的nephrin吸光度測(cè)定值、CD2AP吸光度測(cè)定值與左腎切除組對(duì)比均降低，P＜0.05，各個(gè)治療組的nephrin吸光度測(cè)定值、CD2AP吸光度測(cè)定值與糖尿病腎病模型組對(duì)比都增加，P＜0.05，出現(xiàn)數(shù)據(jù)檢測(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 六組大鼠腎組織nephrin吸光度測(cè)定值、CD2AP吸光度測(cè)定值對(duì)比和分析

3.討論

糖尿病腎病是糖尿病相對(duì)常見的并發(fā)癥，容易引發(fā)出現(xiàn)終末期的腎衰竭現(xiàn)象，而糖尿病腎病患者出現(xiàn)蛋白尿與其腎小球的濾過屏障損害存在一定關(guān)系[2]。

nephrin是于裂孔膜上面特異表達(dá)的跨膜蛋白，為裂孔膜蛋白復(fù)合體的重要組成成分，糖尿病腎病初期出現(xiàn)比較肥大的腎小球與nephrin表達(dá)量比較低及蛋白尿存在一定的關(guān)系，而CD2AP于腎小球的足細(xì)胞以及腎小管的上皮細(xì)胞中均可表達(dá)，nephrin和CD2AP組成脂筏樣的結(jié)構(gòu)及功能相關(guān)復(fù)合體而對(duì)裂孔膜相關(guān)結(jié)構(gòu)以及功能完整性進(jìn)行維持[3]。本文相關(guān)數(shù)據(jù)展示，糖尿病腎病模型組的nephrin吸光度測(cè)定值、CD2AP吸光度測(cè)定值與左腎切除組對(duì)比均降低，P＜0.05，呈現(xiàn)數(shù)據(jù)檢測(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其他各組沒有呈現(xiàn)數(shù)據(jù)檢測(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各個(gè)治療組的nephrin吸光度測(cè)定值、CD2AP吸光度測(cè)定值與糖尿病腎病模型組對(duì)比都增加，P＜0.05，呈現(xiàn)數(shù)據(jù)檢測(cè)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，對(duì)糖尿病腎病大鼠模型予以健脾益氣通絡(luò)中藥治療可促使nephrin、CD2AP基因表達(dá)明顯增加。

[1]丁海華,邱原野,王盈盈,等.小檗堿對(duì)糖尿病腎病大鼠nephrin、podocin和α3β1整合素表達(dá)的影響[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2015(10):1414-1420.

[2]鄧順有,黃賜平,葉穎霞,等.活血降糖膠囊對(duì)糖尿病腎病大鼠足細(xì)胞相關(guān)分子蛋白表達(dá)的影響[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2016,36(14):1167-1173.

[3]王雁秋,黃平,鄧旻,等.絞股藍(lán)總皂苷對(duì)糖尿病腎病大鼠nephrin、VEGF表達(dá)及腎功能的影響[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2015(1):17-19,108.