奧氮平中有關(guān)物質(zhì)的HPLC法測定

張琦

摘 要：建立了高效液相色譜法測定奧氮平中有關(guān)物質(zhì)，使用C8色譜柱梯度洗脫；檢測波長為220nm，結(jié)果顯示奧氮平精密度良好，專屬性良好，與有關(guān)物質(zhì)分離完全，奧氮平及各雜質(zhì)在范圍內(nèi)線性良好，回歸線的相關(guān)系數(shù)R均大于0.9990，但奧氮平溶液在室溫下放置有不穩(wěn)定現(xiàn)象，需立即進(jìn)樣。結(jié)論：該方法重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，能更好地控制奧氮平中有關(guān)物質(zhì)的含量。

關(guān)鍵詞：奧氮平 有關(guān)物質(zhì) 高效液相色譜儀

中圖分類號：TQ460 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1672-3791（2018）01（c）-0080-02

奧氮平化學(xué)名為2-甲基-4-（4-甲基-1-哌嗪基-）-10H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜卓，是一種新型非典型抗精神病藥，可有效改善精神分裂癥狀，安全性高，耐受性好，EPS發(fā)生率低[1-3]，已廣泛用于治療多種精神疾病。美國藥典35版增補(bǔ)1[4]中收錄了“奧氮平”質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，其有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)下考察了奧氮平雜質(zhì)A及奧氮平雜質(zhì)B兩個已知雜質(zhì)（結(jié)構(gòu)見圖1），但考慮企業(yè)在奧氮平片合成的實(shí)際工藝過程中[5]，可能同時引入起始物：4-氨基-2-甲基-10H-噻吩并[2，3-b][1，5]苯并二氮雜鹽酸鹽。筆者擬采用美國藥典方法對三種已知雜質(zhì)進(jìn)行控制，建立HPLC梯度洗脫方法，測定奧氮平片中有關(guān)物質(zhì)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

島津LC-20AT高效液相色譜儀，LC-Solution色譜工作站。

1.2 試樣

奧氮平對照品（100948-200801，中國藥品生物制品檢定所）；奧氮平（110302，江蘇某某制藥）；奧氮平起始物（20110102，臺州市某某化工）；雜質(zhì)A（20110201，臺州市某某化工）；雜質(zhì)B：110315，自制；乙腈，色譜純，購自×××COMPANY INC，雙蒸水，自制，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

采用C8色譜柱；以緩沖液（稱取十二烷基硫酸鈉13g至1500mL水中使溶解，加磷酸5mL，用5mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至2.5）-乙腈（52∶48）為流動相A，以緩沖液-乙腈（30∶70）為流動相B，按表1程序進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為220nm；柱溫：35℃，流速為每分鐘1.5mL。

2.2 溶液的制備

溶劑∶乙二胺四乙酸二鈉緩沖液（稱取乙二胺四乙酸二鈉55mg溶解于1500mL緩沖液中）-乙腈（60∶40）。

供試品：取本品適量，精密稱定，加溶劑稀釋制成每1mL約含400μg的溶液。

對照品溶液：取奧氮平對照品適量，加溶劑稀釋制成每1mL約含2μg的溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性

取奧氮平、雜質(zhì)A、雜質(zhì)B及起始物各適量，以溶劑溶解并稀釋制成每1mL中含奧氮平20μg，雜質(zhì)A、雜質(zhì)B及起始物各2μg的溶液，作為系統(tǒng)適用性溶液。精密量取系統(tǒng)適用性溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，結(jié)果見圖2。

此方法下系統(tǒng)適用性溶液中奧氮平及各雜質(zhì)分離良好，各雜質(zhì)峰峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)差均小于2.0%，保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)差均小于1.0%；理論塔板數(shù)按奧氮平峰計(jì)算均大于3000，各雜質(zhì)峰的拖尾因子均小于1.5，奧氮平與雜質(zhì)A的分離度均大于3.0；該色譜系統(tǒng)適用性良好。

2.4 專屬性

取奧氮平樣品100mg，置25mL量瓶中，加溶劑定容至刻度，搖勻作為專屬性實(shí)驗(yàn)儲備液。未破壞樣品：取奧氮平儲備液1mL置10mL容量瓶中加溶劑稀釋定容；光照樣品：取儲備液1ml于10mL容量瓶中，加溶劑定容至刻度于光照強(qiáng)度為4500Lx±500Lx條件下放置10d后，加溶劑定容至刻度；高溫樣品：取儲備液1mL置于10mL量瓶中，于60℃高溫條件下放置于10d后，加溶劑定容至刻度；酸破壞樣品：取儲備液1mL置于10mL量瓶中，加1mol/L鹽酸溶液1mL，搖勻，于80℃水浴中放置3h后，加1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，加溶劑定容至刻度；堿破壞樣品：取儲備液1mL置10mL量瓶中，加1moL/L氫氧化鈉溶液1mL，搖勻，于80℃水浴中放置4h后，加1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至中性，加溶劑定容至刻度；氧化破壞樣品：取儲備液1mL，置10mL量瓶中，加10%過氧化氫溶液1mL，搖勻，室溫放置2h后，加溶劑定容至刻度。精密量取上述溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。破壞試驗(yàn)結(jié)果顯示，在光照、高溫、堿性條件下，樣品穩(wěn)定；在酸性、氧化條件下，主峰破壞較嚴(yán)重，但破壞產(chǎn)生的雜質(zhì)與奧氮平及雜質(zhì)A、雜質(zhì)B能夠完全分離；此方法專屬性良好。

2.5 線性

精密稱取奧氮平，起始物，雜質(zhì)A和雜質(zhì)B適量，配置成奧氮平濃度為3.0μg/mL起始物及雜質(zhì)A濃度為3.0μg/mL，雜質(zhì)B濃度為3.0μg/mL的儲備液，逐級稀釋精密量取上述溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析（結(jié)果見表2）。

2.6 溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將供試品溶液在進(jìn)樣盤室溫條件下放置，分別于0h、2h、4h、6h、8h、10h精密量供試品溶液20μL注入液相色譜儀，10h奧氮平、起始物、雜質(zhì)A峰面積百分比的RSD值為均小于2.0%；雜質(zhì)B峰面積百分比略有增長，但RSD值小于10.0%；一未知雜質(zhì)隨放置時間增長，有明顯增長的趨勢，說明溶液在室溫下放置10h內(nèi)不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn)

取奧氮平對照品和供試品溶液20uL，注入液相色譜儀中，并同法配制5份測得4種混合物溶液的主峰及雜質(zhì)峰峰面積的RSD均在0.79～0.99之間，滿足系統(tǒng)適用性要求，表明該方法的精密度良好。

2.8 樣品測定

取三批奧氮平20mg，精密稱定，置50mL容量瓶中加溶劑稀釋制成每1mL約含400μg的溶液，作為供試品溶液；另取奧氮平對照品適量，加溶劑稀釋制成每1mL約含2μg的溶液，作為對照品溶液。精密量取供試品溶液與對照品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算各雜質(zhì)的量及雜質(zhì)總和（結(jié)果見表3）。試驗(yàn)結(jié)果表明：三批奧氮平有關(guān)物質(zhì)結(jié)果均小于1.0%

參考文獻(xiàn)

[1] 雷春艷，于彩霞，冀德才.奧氮平對精神分裂癥患者生活質(zhì)量的影響[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2014（26）：159-160.

[2] 王勇，陳祖金，楊勇.奧氮平治療老年精神分裂癥的效果及其安全性分析[J].中國健康心理學(xué)雜志，2017（10）：1465-1468.

[3] 陳光.奧氮平治療老年精神分裂癥80例臨床分析[J].臨床心身疾病雜志，2008，14（6）：519-521.

[4] 崔道平.奧氮平制備工藝及質(zhì)量控制研究[D].大連理工大學(xué)，2011.