棗和酸棗雜交后代遺傳多樣性的SSR分析

閆芬芬，鄭興娟，羅 智，王玖瑞,3*，劉孟軍*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 中國棗研究中心，河北 保定 071001；2.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，河北 保定 071001;3.河北省棗產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院,河北 保定 071001)

雜交育種可通過基因的分離和重組實現(xiàn)雜交后代群體的性狀分離。雜交后代群體的遺傳多樣性和遺傳傾向分析可為親本選配、雜交后代性狀預(yù)測及遺傳改良提供理論依據(jù)[1-3]。近年來，在蘋果、沙田柚等多種果樹上均有關(guān)于雜交后代遺傳多樣性的報道[4-7],我國原產(chǎn)特色果樹棗樹(Ziziphusjujuba)也相繼開展了實生雜交后代的遺傳多樣性分析[8-10]。由于棗樹雜交育種面臨花小去雄難、坐果率低和胚敗育嚴重等難題，致使人工雜交育種很難獲得雜交后代[11]，至今未見棗大規(guī)模人工雜交后代群體的遺傳多樣性和遺傳傾向性分析。雄性不育種質(zhì)具有生產(chǎn)無籽果實、免去雄等優(yōu)勢，在果樹生產(chǎn)和育種上具有重要應(yīng)用價值[12]。王玖瑞[13]等通過發(fā)現(xiàn)棗樹雄性不育種質(zhì)有效解決了棗樹人工去雄的難題[13]，并成功應(yīng)用于棗雜交后代群體的構(gòu)建[14-16]。SSR(simple sequence repeat)標記多態(tài)性高、易檢測、重復(fù)性好，SSR分析已成為揭示果樹雜交后代群體遺傳變異和遺傳傾向性的有效手段。SSR標記在雜交后代鑒定[17-18]和遺傳多樣性分析方面已得到成功應(yīng)用。本研究以棗樹的雄性不育種質(zhì)JMS2為母本，以棗樹的野生種酸棗(Z.acidojujuba)的優(yōu)系‘邢16’為父本，于2015年通過罩網(wǎng)控制授粉雜交[19-20]獲得一批雜種，經(jīng)在溫室播種培養(yǎng)獲得1年生雜交后代179株，進而利用SSR分子標記技術(shù)對該雜交后代群體進行了雜種鑒定和遺傳分析，旨在揭示棗和酸棗雜交后代群體的遺傳多樣性和遺傳傾向，為進一步開展棗和酸棗間雜交育種及雜交后代性狀分離規(guī)律研究提供指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料

以罩網(wǎng)控制授粉雜交獲得的棗雄性不育‘JMS2’(Z.jujuba‘JMS2’)×酸棗‘邢16’(Z.acidojujuba‘Xing 16’)組合的179株1年生雜交后代及父母本為試材。于2016年8月初采集嫩葉，立即放入變色硅膠干燥處理，密封保存。雜交試驗在新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團第一師十團苗木中心進行，SSR分析在河北農(nóng)業(yè)大學(xué)進行。

1.2 葉片DNA的提取

稱取干燥葉片0.1～0.2 g，采用改良CTAB法[21]提取基因組總DNA，使用超微量分光光度計(Thermo Scientific NanoDrop 2000)檢測樣品DNA濃度和純度，將樣品濃度統(tǒng)一稀釋至50 ng·μL-1，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 PCR擴增及雜種鑒定

從課題組前期篩選出的多態(tài)性好的SSR引物中隨機選取21對，對雜交群體進行PCR擴增，PCR反應(yīng)產(chǎn)物在8%變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳，經(jīng)AgNO3溶液銀染后，用甲醛溶液顯色，并拍照[18]。所用SSR引物由本課題組基于棗基因組測序數(shù)據(jù)開發(fā)[21]，并委托上海生物工程公司合成，引物信息見表1。

表1 SSR引物信息Table 1 List of SSR primers used

1.4 雜交后代SSR遺傳分析

將21對引物擴增出的條帶進行記錄，分別以“1”和“0”表示同一位置譜帶的有無，利用NTSYS-2.10軟件進行遺傳距離和親緣關(guān)系UPGMA聚類分析[22]。應(yīng)用popgeny32軟件對子代群體和分類組進行遺傳參數(shù)分析[23]，分別計算不同基因位點的平均等位基因數(shù)(Na)、有效等位基因數(shù)(Ne)、Shannon信息指數(shù)(I)、期望雜合度(Hei)、遺傳分化系數(shù)(Fst)和基因流(Nm)。

2 結(jié)果與分析

2.1 雜種鑒定

利用本課題組篩選出的‘JMS2’בXing16’雙親差異互補引物JSSR311[15]，對179個子代及父母本進行鑒定(圖1)?？梢钥闯?，母本擴增出2個特異性條帶，父本擴增出1個特異性條帶，父母本的條帶類型呈差異互補型。子代中均出現(xiàn)了父本的特異性條帶，多數(shù)出現(xiàn)了1條母本的特性性條帶，其中17和19號單株同時出現(xiàn)了母本的2個條帶和父本的1個條帶，表明所有子代均為真實雜交后代。表明引物JSSR311可一次擴增出3個多態(tài)性位點，可一次性鑒定出全部雜交后代，具有高效、快速、一次性大量鑒定雜種的特點，在雜交育種鑒定上具有重要應(yīng)用價值。利用其他引物對親本及子代進行擴增均出現(xiàn)了不同類型條帶(圖2)，其中多數(shù)引物擴增出2個條帶，其中1個為共有條帶，引物的特異性不高。

注：M.分子標記；F.母本；Ma.父本；1-36.雜交子代。下同。

圖2 部分引物對子代SSR擴增結(jié)果Fig.2 Molecular identification of hybrids (in part) using different SSR primers

2.2 雜交后代遺傳多樣性分析

利用21對引物對雜交后代及親本進行擴增，共擴增出46個條帶，其中多態(tài)性條帶24個，多態(tài)性比率達52.17%。單個引物擴增出的帶數(shù)為2～3，平均擴增等位基因位點2.14個，有效等位基因數(shù)(Ne)為1.37～2.68、平均值為1.79，其中JSSR311的有效等位基因數(shù)2.68最高。雜交后代群體間Shannon's信息指數(shù)(I)平均值為 0.64，期望雜合度(Hei)平均值為0.42，群體間平均遺傳分化系數(shù)(Fst)為0.07，基因流(Nm)平均值為3.38，表明棗和酸棗雜交后代群體遺傳多樣性較高。分別以0、1標記等位基因的有無，將21對引物擴增出的條帶進行統(tǒng)計分析，發(fā)現(xiàn)子代的21個等位基因位點符合1∶1分離，子代的3個等位基因符合3∶1分離規(guī)律，分別進行χ2適度性檢測，其中3個等位基因位點出現(xiàn)了偏分離現(xiàn)象。

2.3 聚類分析

利用SSR擴增結(jié)果數(shù)據(jù)，對雜交親本和179個雜交子代進行了UPGMA聚類分析(圖3)。結(jié)果顯示，雜交子代個體間相似系數(shù)介于0.64～0.97，在相似系數(shù)0.70附近可將群體分為3類。第1大類由172個子代與母本JMS2聚在一起、占子代總數(shù)的96%，第2大類由2個子代與父本單獨聚為一類，第3大類由5個子代單獨聚為一類。其中第1大類在0.72處可分為2個亞類，第1亞類62個子代與母本聚在一起，其中“17”和“92”2個子代與JMS2遺傳距離最近，遺傳相似系數(shù)達0.93；第2亞類包含110個子代處于母本和父本之間。母本JMS2與父本邢16被聚在首尾2處，96%的子代與母本JMS2聚為一類，表明雜交后代與母本的遺傳相似度更高。此外，第3大類由5個子代單株在0.64處左右最先單獨聚為一類，表明這5個子代與父母本遺傳距離較遠。

表2 雜交子代群體的遺傳多樣性Table 2 Genetic diversity of hybrid progeny

注：P<0.05，實際分離與理論分離有顯著性差異。

3 結(jié)論與討論

雜交育種可通過非同源染色體的自由組合和非姐妹染色單體片段的交換，使分散在不同染色體上的遺傳物質(zhì)重組，雌雄配子結(jié)合后會出現(xiàn)多種多樣的變異個體，從而產(chǎn)生有利的遺傳效應(yīng)[24]。選配親和力好且能產(chǎn)生非加性效應(yīng)大的親本組合，獲得雜合程度高性狀表現(xiàn)優(yōu)異的F1的概率相對較大[25]。遺傳多樣性是物種遺傳潛力和適應(yīng)環(huán)境變化能力的重要指標[23]，它從基因水平上反映出群體的變異性，對親本選配及優(yōu)良子代初步篩選具有指導(dǎo)意義。冬棗×寧梨巨棗的子代經(jīng)SRAP技術(shù)分析表明雜交后代具有豐富的遺傳多樣性[9]，冬棗×臨猗梨棗的雜交后代出現(xiàn)了果實性狀的廣泛分離，并且選出4個綜合性狀優(yōu)良的雜交后代株系[10]。本研究中棗和酸棗的雜交后代經(jīng)21對SSR引物擴增，共發(fā)現(xiàn)24個多態(tài)性條帶，多態(tài)性比例率達52.17%，Shannon's信息指數(shù)(I)平均值為0.64，期望雜合度(Hei)平均值為0.42，子代群體間平均遺傳分化系數(shù)為0.07，表明雜交后代變異明顯，具有豐富的遺傳多樣性，為雜交后代性狀的遺傳變異研究和優(yōu)良株系的選擇奠定了基礎(chǔ)。

聚類分析圖顯示了雜交后代單株間的遺傳相似度[26-27]。本研究聚類分析發(fā)現(xiàn)雄性不育‘JMS2’和酸棗‘邢16’的遺傳相似系數(shù)位于0.71左右，且母本與父本明顯被聚在首位2處。棗是由酸棗進化而來，二者在形態(tài)特征和生物學(xué)特性方面頗為相似[28]，經(jīng)SSR分析發(fā)現(xiàn)棗和酸棗的遺傳相似系數(shù)為0.79，并且將棗和酸棗材料劃分為棗類、酸棗類和過渡類3個群體[29]，這與本研究結(jié)果是一致的，預(yù)計雜交后代根據(jù)遺傳相似系數(shù)和性狀表現(xiàn)可分為3個過渡群體，也反映了2個親本的親緣關(guān)系較遠，雜交后代出現(xiàn)了豐富的遺傳變異。棗品種間開展雜交，經(jīng)聚類分析發(fā)現(xiàn)冬棗和寧梨巨棗雜交后代在相似系數(shù)0.594處聚為2類[9]，超過半數(shù)的雜交子代與父本親緣關(guān)系較近。白楊的4個雜交新品種與父本毛白楊之間具有較高的遺傳相似性，同時這4個新品種在葉、芽、物候等多個性狀上與父本性狀也非常接近[30]。指紋圖譜分析發(fā)現(xiàn)棗品種之間平均相似系數(shù)為0.82[31]，優(yōu)良單株群體內(nèi)各樣品間的遺傳相似系數(shù)達0.979 2[32],本研究所得棗和酸棗雜交后代群體遺傳相似系數(shù)0.64～0.97，96%的子代與母本的遺傳相似系數(shù)較高，雜交后代與母本遺傳關(guān)系較近。這可能與親本遺傳物質(zhì)的傳遞直接相關(guān)，也與選擇的引物數(shù)量及引物特征間接相關(guān)，但一般多以形態(tài)學(xué)上相似度判斷親緣關(guān)系的遠近。

圖3 179個雜交子代及親本的SSR聚類分析圖Fig.3 Dendrogram of 179 hybrids and their parents based on SSR markers

對雜交后代實生苗的葉片形狀初步觀察，有75%以上的單株葉片縱徑變短，橫徑變寬，葉形指數(shù)變小，表現(xiàn)出偏母遺傳的傾向。其中聚類分析顯示與母本遺傳距離最近的“17”號單株的葉形指數(shù)明顯變小，與母本葉片相似度高，而與父本遺傳距離最近的“42”號單株的葉片與父本相似，遺傳距離與葉形指數(shù)表現(xiàn)一致。雜交子代結(jié)果單株中有9株果實呈長圓柱形，果實形狀偏母本性狀，3株呈圓形偏父本性狀，由于結(jié)果單株少，果實性狀分離規(guī)律和QTL性狀定位還需后續(xù)詳細研究。此外，有5個子代單獨聚類于父、母本之外，占所有子代的3%，這種情況在茶樹自然雜交后代群體的聚類分析中也有出現(xiàn)[33]。這些子代材料與父母本遺傳距離較遠，可能出現(xiàn)較大程度的性狀變異，后續(xù)性狀調(diào)查時對這些后代材料應(yīng)該特別關(guān)注。

參考文獻：

[1] 張非亞,羅玉蘭,有祥亮,等.基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的月季SSR標記開發(fā)及花色遺傳性分析[J].西北林學(xué)院學(xué)報,2017,32(4):81-86.

ZHANG F Y,LUO Y L,YOU X L,etal.Development of SSR markers based on the transcriptome data of rose and analysis of flower color inheritance[J].Journal of Northest Forestry University,2017,32(4):81-86.(in Chinese)

[2] 李志強,黨志國,趙志常,等.芒果雜交F_1代群體的遺傳多樣性分析及遺傳圖譜的構(gòu)建[J].分子植物育種,2016,14(4):953-958.

LI Z Q,DANG Z G,ZHAO Z C,etal.Genetic diversity analyze of mango's F1 hybrids and construction of genetic map[J].Molecular Plant Breeding.2016,14(4):953-958.(in Chinese)

[3] 胡文舜,黃愛萍,姜帆,等.龍眼正反交后代的SSR鑒定及遺傳多樣性分析[J].園藝學(xué)報,2015,42(10):1899-1908.

HU W S，HUANG A P，JIANG F,etal.Identification and genetic diversity of reciprocal hybrids in longan (Dimocarpuslongan)by SSR[J].Acta Horticulturae Sinica,2015,42(10):1899-1908.(in Chinese)

[4] 黃金鳳,呂天星,王冬梅,等.‘寒富’ב岳帥’蘋果雜交后代遺傳多樣性的SSR分析[J].分子植物育種,2015,13(5):1040-1044.

HUANG J F,LYU T X,WANG D M,etal.Genetic diversity of hybrid progenies derived from apple cross of‘Hanfu’בYueshuai’Analyzed by SSR[J].Molecular Plant Breeding,2015,13(5):1040-1044.(in Chinese)

[5] 韓國輝,向素瓊,汪衛(wèi)星,等.沙田柚雜交后代群體的SSR鑒定與遺傳多樣性分析[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,43(22):4678-4686.

HAN G H,XIANG S Q,WANG W X,etal.Identification and genetic diversity of hybrid progenies from shatian pummelo by SSR[J].Scientia Agricultura Sinica,2010,43(22):4678-4686.(in Chinese)

[6] 謝玥,潘美玲,莊啟國,等.紅陽獼猴桃及其雜交后代的ISSR指紋圖譜構(gòu)建及遺傳多樣性分析[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué),2013,32(1):76-82.

XIE Y,PAN M L,ZHUANG Q G,etal.Construction of ISSR fingerprinting and analysis of genetic diversity in Hongyang kiwifruit and its of hybrid progenies[J].Genomics and Applied Biologv.2013,32(1):76-82.(in Chinese)

[7] 艾呈祥,秦志華,王潔,等.山東牛心柿群體遺傳多樣性和親緣關(guān)系的SSR分析[J].果樹學(xué)報,2013,30(4):558-562.

AI C X,QIN Z H,WANG J,etal.Genetic diversity and relationship analysis of oriental persimmon (Diospyroskaki) populations in Shandong by SSR[J].Journal of Fruit Science,2013,30(4):558-562.(in Chinese)

[8] 馬慶華,毛永民,申連英,等.冬棗×臨猗梨棗雜交后代的抗寒性和抗寒單株的篩選[J].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2006,29(4):34-37.

MA Q H,MAO Y M,SHEN L Y,etal.Cold hardiness of Dongzao × Linyilizao seedlings and the selection of cold-hardiness candidates[J].Journal of Agriculture University of Hebei,2006,29(4):34-37.(in Chinese)

[9] 張明慧,宋玉霞,趙世華,等.冬棗×寧梨巨棗的子代SRAP鑒定及遺傳多樣性分析[J].西北植物學(xué)報,2014,34(11):2194-2200.

ZHANG M H,SONG Y X,ZHAO S H,etal.Identification and genetic diversity analysis of hybridprogeny ofZiziphusjujubaMill.cv.Dongzao andZiziphusjujubaMill.cv.Ninglijuzao by SRAP molecular markers[J].Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica,2014,34(11):2194-2200.(in Chinese)

[10] 張鐘,黃建,殷曉,等.‘冬棗’與‘臨猗梨棗’自然授粉后代果實性狀研究[J].果樹學(xué)報,2015,32(1):57-62.

ZHANG Z,HUANG J,YIN X,etal.Fruit characterization of hybrid progenies derived from natural pollination cross betweenZiziphusjujuba‘Dongzao’and‘Linyilizao’[J].Journal of Fruit Science,2015,32(1):57-62.(in Chinese)

[11] 劉孟軍,王玖瑞,劉平,等.棗樹免去雄雜交育種的設(shè)計與實踐[J].園藝學(xué)報,2014,41(7):1495-1502.

LIU M J,WANG J R,LIU P,etal.Design and practice of emasculation-free cross breeding in Chinese jujube[J].Acta Horticulturae Sinica,2014.41(7):1495-1502.(in Chinese)

[12] 曹慶芹，伊華林，鄧秀新.果樹雄性不育研究進展[J],果樹學(xué)報,2005,2(6):678-681.

CAO Q H,YI H L，DENG X X.Advances in research on male sterility in fruit crops[J].Journal of Fruit Science,2005,2(6):678-681.(in Chinese)

[13] 王玖瑞,劉玲,劉孟軍,等.棗樹雄性不育新種質(zhì)的獲得[J]園藝學(xué)報，2006,33(2):374-377

WANG J R,LIU L,LIU M J,etal.Acquirement of new male sterile germplasm of Chinese jujube[J].Acta Horticulturae Sinica,2006,33 (2)：374-377.(in Chinese)

[14] 郭敬麗.棗樹雜交后代的獲得及雜種分子鑒定[D].保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

[15] 孫學(xué)超.棗樹控制雜交及雜種SSR分子鑒定[D].保定:河北農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

[16] WANG J R,CUI X M,DAI L,etal.Hybridization using a new male-sterile germplasm as the female parentin Chinese Jujube[J].Kor.J.Hort.Sci.Technol.,2015,33,396-402.

[17] 王斯琪,唐詩哲,孔德倉,等.利用SSR標記進行棗樹子代苗父本鑒定[J].園藝學(xué)報,2012,39(11):2133-2141.

WANG S Q ,TANG S Z ,KONG D C ,etal.Application of SSR markers for the identification of paternal parent the seedlings of Chinese jujube[J].Arta Hnrtirulturae Sinira,2012,39(11):2133-2141.(in Chinese)

[18] 劉春英,樊軍鋒,高建社,等.楊樹新雜種的SSR 分析及鑒定,西北林學(xué)院學(xué)報,2013,28(2):70-73.

LIU C Y,FAN J F,GAO J S,etal.Simple sequence repeat analysis and identification of newPopulu'sHybrid[J].Journal of Northwest Forestry University.2013,28(2):70-73.(in Chinese)

[19] 劉孟軍,劉平,王玖瑞,等.一種分子輔助的棗樹人工控制雜交育種方法:101273708A[P].2008-10-01.

[20] 劉孟軍,王玖瑞,代麗,等.一種基于雄性不育利用和胚培養(yǎng)的棗樹高效雜交育種方法:101297634A[P].2008-11-05.

[21] XIAO J,ZHAO J,LIU M,etal.Genome-wide characterization of simple sequence repeat (SSR) loci in Chinese jujube and jujube SSR primer transferability[J].Plos One,2015,10(5):012781.

[22] 劉秀云,李慧,劉志國,等.基于SSR標記的255個棗品種親緣關(guān)系和群體遺傳結(jié)構(gòu)分析[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,49(14):2772-2791.

LIU X Y ,LI H ,LIU Z G,etal.Genetic diversity and structure of 255 cultivars ofZiziphusjujubaMill[J].Scientia Agriculture Sinica,2016,49(14):2772-2791.(in Chinese)

[23] 殷曉,張春梅,李新崗,等.陜北棗品種群遺傳結(jié)構(gòu)的SSR分析[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2014,42(6):152-160.

YIN X X,ZHANG C M,LI X G,etal.SSR analysis on genetic structure of Chinese jujube in north Shaanxi[J].Journal of Northwest A&F University:Nat.Sci.Ed.,2014,42(6):152-160.(in Chinese)

[24] TAN M L,SONG J K,DENG X X.Production of two mandarin trifoliate orange hybrid populations via embryo rescue with verification by SSR analysis[J].Euphytica,2007,157:155-160.

[25] 馬慶華,續(xù)九如,王貴禧,等.棗樹雜交育種研究進展[J],林業(yè)科學(xué)，2008,24(11):174-177.

MA Q H,XU J R,WANG G X,etal.Progress on hybrid breeding of Chinese jujube (ZiziphusjujubaMill.)[J].Scientia Silvae Sinicae,2008,24(11):174-177.(in Chinese)

[26] 喬勇,趙錦,楊海旭,等.21個棗品種(系)的AFLP指紋分析[J]，植物遺傳資源學(xué)報,2009,10(2):205-210.

QIAO Y,ZHAO J,YANG H X,etal.AFLP analysis on 21 cultivars and strains of Chinese jujube[J].Journal of Plant Genetic Resources,2009,10(2):205-210.(in Chinese)

[27] 孫俊,孫雯雯,周軍永,等.安徽及周邊地區(qū)棗種質(zhì)資源遺傳多樣性研究[J],園藝學(xué)報,2015,42(8):1569-1575.

SUN J，SUN W W，ZHOU J Y,etal.Jujube germplasm from Anhui Province and Provinces around Anhui analyzed by ISSR markers[J].Acta Horticulturae Sinica,2015,42(8):1569-1575.(in Chinese)

[28] 劉孟軍，汪民.中國棗種質(zhì)資源[M].北京:中國林業(yè)出版社,2009:56-57.

[29] 張鵬飛,尉東峰,劉亞令,等.棗與酸棗的SSR遺傳多樣性研究[J].華北農(nóng)學(xué)報,2015,30(2):150-155.

ZHANG P F,WEI D F,LIU Y L,etal.Genetic diversity ofZiziphusjujubaMill.andZ.jujubavar.spinosa based on SSR markers[J].Acta Agriculturae Boreali-Sinica,2015,30(2):150-155.(in Chinese)

[30] 樊蓉,樊軍鋒,李周岐.9個白楊品種SSR指紋圖譜構(gòu)建及遺傳關(guān)系的研究[J].西北林學(xué)院學(xué)報,2015,30(3):76-80.

FAN R,FAN J F,LI Z Q.Fingerprinting and genetic relatedness of 9 varieties inPopulusL.Sect.PopulusUsing SSR markers[J].Journal of Northwest Forestry University.2015,30(3):76-80.(in Chinese)

[31] 麻麗穎,孔德倉,劉華波,等.36 份棗品種 SSR 指紋圖譜的構(gòu)建[J],園藝學(xué)報,2012,39(4):647-654.

MA L Y,KONG D C,LIU H B,etal.Construction of SSR fingerprint on 36 Chinese jujube cultivars[J].Acta Horticulturae Sinica,2012.39 (4):647-654.(in Chinese)

[32] 馬慶華,申連英,王貴禧,等.應(yīng)用AFLP技術(shù)分析冬棗優(yōu)良單株選擇的遺傳基礎(chǔ)[J],植物遺傳資源學(xué)報,2009,10(4):504-510.

MA Q H ,SHEN L Y ,WANG G X,etal.Analysis of genetic background for the selection of advanced trees of Dongzao (ZiziphusjujubaMill.cv.Dongzao) by AFLP markers[J].Journal of Plant Genetic Resources,2009,10(4):504-510.(in Chinese)

[33] 范凱,洪永聰,丁兆堂,等.茶樹‘黃山種’自然雜交后代遺傳多樣性分析[J].園藝學(xué)報,2010,37(8):1357-1362.

FAN K,HONG Y C,DING Z T,etal.Analysis of genetic diversity among natural hybrid progenies of camellia sinensis ‘Huangshanzhong’[J].Acta Horticulturae Sinica,2010,37(8):1357-1362.(in Chinese)