安徽羽葉報春同型花和二型花居群的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)分析

李永權(quán)，章 偉，徐延年，呂國勝，邵劍文，，①

(1. 安徽師范大學生命科學學院，安徽 蕪湖 241000；2. 安徽省重要生物資源保護與利用研究重點實驗室，安徽 蕪湖 241000)

二型花柱(distyly)是一種最常見的雌雄蕊異位類型，其產(chǎn)生和維持機制一直是進化生物學和生態(tài)學的研究熱點，迄今為止，至少發(fā)現(xiàn)有23科植物存在二型花柱[1]。二型花不但具有明顯的雌雄蕊交互式異位特征(即長柱花柱頭位于花筒口且花粉囊位于花筒中部，短柱花柱頭位于花筒中部且花粉囊位于花筒口)，而且還具有嚴格的自交不親和特性，導致二型花植物只能通過不同花間的受粉來完成正常結(jié)籽過程[2-4]。但是，偶爾發(fā)生的等位基因重組互換等現(xiàn)象可導致植物的二型花同型化，形成柱頭和花粉囊等高的長柱同型花或短柱同型花，自交不親和性隨之喪失，這些二型花植物在開花后可自花受粉并結(jié)籽[5]。通常情況下，在二型花轉(zhuǎn)變?yōu)橥突ê?，植物的繁育系統(tǒng)也由異交變?yōu)樽越唬@一轉(zhuǎn)變可能會降低植物有效種群規(guī)模，增加連鎖不平衡和基因清除效應，進而降低植物居群的遺傳多樣性，促進居群間的遺傳分化[6]，甚至可能產(chǎn)生新物種[7-8]。

全世界的報春花屬(PrimulaLinn.)植物約有500種[9-10]，其中，近90%的種類具有二型花柱，剩余約10%的種類具有同型花柱。報春花屬植物是最早開展二型花柱適應性進化研究的植物材料[3]，目前該屬已成為二型花柱進化生物學研究的模式材料。安徽羽葉報春(PrimulamerrillianaSchltr.)具有典型的二型花柱，花期較長，園藝開發(fā)和應用價值很高[11-12]。然而，該種僅分布于安徽南部海拔50～1 000 m的丘陵山區(qū)，喜生于山體北坡比較陰濕的林下、溪邊和路旁的巖壁上[13]。近幾十年來，由于人類活動對生境的破壞作用，安徽羽葉報春的野生種群數(shù)量明顯下降，因此，陳明林等[14]建議將其列為安徽省重點保護野生植物。

相關(guān)研究結(jié)果顯示：安徽羽葉報春二型花居群的遺傳多樣性較高，且在不同生境中分化明顯[15-16]。作者在2014年至2015年的野外調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，安徽省銅陵市鳳凰山和池州市陰山存在安徽羽葉報春的長柱同型花居群，并且，與相近區(qū)域的二型花居群個體相比，除花朵同型、花冠直徑較小外，這些長柱同型花居群個體的其他形態(tài)性狀幾乎沒有區(qū)別。然而，這些同型花居群與二型花居群的遺傳分化和遺傳多樣性差異及基因流情況等均未明確。為了弄清這些問題，作者選用擴增結(jié)果穩(wěn)定且擴增條帶多態(tài)性較高的10對SSR引物，對分布于安徽省秋浦河流域銅陵市鳳凰山和池州市陰山的安徽羽葉報春2個長柱同型花居群及其附近區(qū)域的4個二型花居群的總DNA進行了PCR擴增，在此基礎(chǔ)上對6個居群的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)進行了分析，以期明確安徽羽葉報春二型花轉(zhuǎn)變?yōu)橥突ê筮z傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律，為探究植物二型花柱的維持機制提供參考資料，并為安徽羽葉報春保護策略制訂提供指導依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

于2016年3月至4月，對安徽省秋浦河流域的6個安徽羽葉報春居群進行采樣，各居群的基本情況見表1。其中，銅陵市義安區(qū)鳳凰山(FHS)和池州市貴池區(qū)陰山(YS)居群為同型花居群(均為長柱同型花，柱頭與花粉囊等高且均位于花筒口)，分別位于秋浦河流域下游的低矮丘陵山區(qū)；池州市石臺縣大王洞(DWD)、池州市貴池區(qū)谷村(GC)、池州市石臺縣立新村(LXC)和池州市石臺縣蓮花田(LHT)居群為二型花居群(長柱花和短柱花比例約1∶1)，其中，DWD和GC居群位于秋浦河流域中游的低山或丘陵區(qū)，LXC和LHT居群位于秋浦河流域上游的低山或丘陵區(qū)。每個居群隨機選取約20株相對分散的植株，每株采集2或3枚長勢相似的嫩葉，放入透氣的茶葉包內(nèi)，用硅膠密封干燥，于室溫條件下保存、備用。

表1安徽羽葉報春供試居群的基本情況

Table1BasicstatusofpopulationsofPrimulamerrillianaSchltr.tested

居群1)Population1)緯度Latitude經(jīng)度Longitude海拔/mAltitude花朵類型Flower type株數(shù)2)Individual number2)樣本數(shù)Sample numberFHSN30°51'21″E118°01'28″80-130同型花Homostyle約1 000 About 1 00019YSN30°26'31″E117°35'40″100-150同型花Homostyle約800 About 80019DWDN30°21'07″E117°20'49″100-350二型花Distyle約1 000 About 1 00020GCN30°23'41″E117°30'15″30-200二型花Distyle約600 About 60020LXCN30°15'29″E117°34'05″100-500二型花Distyle大于3 000 More than 3 00019LHTN30°09'03″E117°35'04″50-300二型花Distyle約1 000 About 1 00020

1)FHS：銅陵市義安區(qū)鳳凰山 Fenghuangshan in Yian District of Tongling City；YS：池州市貴池區(qū)陰山 Yinshan in Guichi District of Chizhou City；DWD：池州市石臺縣大王洞 Dawangdong in Shitai County of Chizhou City；GC：池州市貴池區(qū)谷村 Gucun in Guichi District of Chizhou City；LXC：池州市石臺縣立新村 Lixincun in Shitai County of Chizhou City；LHT：池州市石臺縣蓮花田 Lianhuatian in Shitai County of Chizhou City.

2)居群內(nèi)安徽羽葉報春株數(shù) Individual number ofPrimulamerrillianaSchltr. in population.

1.2 方法

采用改良的CTAB法[17]提取各居群嫩葉的總DNA。選用本實驗室開發(fā)的擴增結(jié)果穩(wěn)定且擴增條帶多態(tài)性較高的10對SSR引物，各引物的序列及退火溫度見表2。引物合成交由生工生物工程(上海)股份有限公司，并對上游引物的5′端進行熒光修飾(FAM、HEX或TAMRA)[15]。

擴增反應體系總體積為15.0 μL，包括DreamTaq Green PCR Master Mix(2×)7.5 μL、100 ng·μL-1總DNA 0.4 μL、100 μmol·L-1正向引物和反向引物各0.3 μL、ddH2O 6.5 μL。使用Bio-Rad iCycler PCR儀(美國Bio-Rad公司)進行擴增反應，擴增程序為：94 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s、引物相應退火溫度退火60 s、72 ℃延伸90 s，35個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。

擴增產(chǎn)物在質(zhì)量體積分數(shù)2.0%瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測；按照不同熒光混合后交由上海點晶生物科技有限公司采用ABI 3700基因測序儀(美國ABI公司)進行毛細管電泳測序分析，使用GeneMarker 1.91軟件對測序結(jié)果進行判讀，獲得微衛(wèi)星基因型數(shù)據(jù)。

表2用于安徽羽葉報春6個居群PCR擴增的引物序列及退火溫度

Table2SequencesandannealingtemperaturesofprimersusedforPCRamplificationofsixpopulationsofPrimulamerrillianaSchltr.

引物編號No. of primer引物序列(5'→3') Primer sequence (5'→3')正向引物Forward primer反向引物Reverse primer退火溫度/℃Annealing temperaturePm2CGCCTACAGTGTTTGGGACTATCTCACCTGCGT-TCT52Pm6TACATCCCAATAAACTGATGTGGTGGCCTTCTA-ACT52Pm7TTGTTCACCGACGCATACTTACACGCACCAAAT-CAT48Pm8CATCACCCATTGTTCTTACTACTACATTGT-TATTTTAC53Pm9AGACTCACGAGGAATACGAGAAAAGGAGGAGA-CAAA52Pm10AACTCCACATAACATCTTAATTCTAAACTTA-AGGGT50Pm12TAAAACTCCTGGAGGGG-TACATCGCCCAATGGAGT-GAA56Pm13GAGGACAGGCACCACAGATCCCCAACTTCAT-GCTCTT55Pm16AACCACTCGTCGTCCTAACGATAGATTGCCTTAC-CC56Pm17TAAATCAAGGTAGCAACTTACCTACCATTACTCCC49

1.3 數(shù)據(jù)分析

使用Genepop 4.0軟件檢驗位點間是否存在連鎖不平衡及各居群是否偏離哈溫平衡；使用FSTAT 2.9.3軟件計算各居群的等位基因數(shù)、遺傳分化系數(shù)和近交系數(shù)；使用Popgene 3.2軟件計算各居群的觀測雜合度和期望雜合度；使用GenAlEx 6軟件計算各居群的有效等位基因數(shù)和稀有等位基因數(shù)。

使用TFPGA軟件對居群間的遺傳分化系數(shù)和遺傳距離與地理距離的相關(guān)性進行Mantel檢驗；使用BayesAss 1.3軟件計算居群間的基因流；使用Barrier 2.2軟件分析居群間可能存在的主要基因流屏障；使用Arlequin 3.5軟件對同型花和二型花居群間、所有居群間及各居群內(nèi)的遺傳變異進行分子方差分析(AMOVA)；使用Structure 2.2軟件對所有居群及樣株進行聚類分析，K值設(shè)為6，重復分析8次；burn-in設(shè)為100 000，run-length設(shè)為1 000 000，使用混合模型(admixture model)[18]計算ΔK值。使用GenAlEx 6軟件進行主坐標分析(PCoA)并制圖。

使用SPSS 19.0統(tǒng)計分析軟件對相關(guān)數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計和分析。

2 結(jié)果和分析

2.1 安徽羽葉報春居群的遺傳多樣性分析

采用供試10對SSR引物對安徽羽葉報春6個居群葉片的總DNA進行PCR擴增，其中，引物Pm10對銅陵市義安區(qū)鳳凰山(FHS)居群19個單株的擴增結(jié)果見圖1。10對SSR引物在6個居群的117個單株中共擴增出129個等位基因，平均每對引物擴增出約13個等位基因。Genepop軟件檢測結(jié)果表明：僅少量位點在個別居群中存在連鎖現(xiàn)象，未發(fā)現(xiàn)有位點在3個以上居群中與其他位點連鎖。

對安徽羽葉報春各居群的遺傳多樣性分析結(jié)果(表3)表明：安徽羽葉報春6個居群的等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)和稀有等位基因數(shù)的平均值分別為4.8、2.8和2.7，觀測雜合度、期望雜合度和近交系數(shù)的平均值分別為0.29、0.43和0.38。其中，F(xiàn)HS居群的等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、稀有等位基因數(shù)、觀測雜合度和期望雜合度均最低，分別為2.5、1.8、0.0、0.05和0.31，說明該居群的遺傳多樣性最低；池州市石臺縣立新村(LXC)和池州市石臺縣蓮花田(LHT)居群的上述指標均較高，2個居群的等位基因數(shù)分別為6.4和7.5，有效等位基因數(shù)分別為3.2和4.7，稀有等位基因數(shù)分別為4.0和8.0，觀測雜合度分別為0.48和0.37，期望雜合度分別為0.53和0.56，說明這2個居群的遺傳多樣性相對較高。值得注意的是，F(xiàn)HS居群的近交系數(shù)最高(0.81)，池州市貴池區(qū)陰山(YS)居群的近交系數(shù)也較高(0.51)，而LXC和LHT居群的近交系數(shù)相對較低(分別為0.11和0.36)。

1-19：單株編號 No. of individual；M：DNA marker.圖1 引物Pm10對安徽羽葉報春銅陵市義安區(qū)鳳凰山居群19個單株的擴增結(jié)果Fig. 1 Amplification result of nineteen individuals in population of Primula merrilliana Schltr. from Fenghuangshan in Yian District of Tongling City by primer Pm10

居群1)Population1)等位基因數(shù)Allele number有效等位基因數(shù)Effective allele number稀有等位基因數(shù)Rare allele number觀測雜合度Observed heterozygosity期望雜合度Expected heterozygosity近交系數(shù)Inbreeding coefficientFHS2.5±0.41.8±0.30.0±0.00.05±0.030.31±0.090.81±0.15YS3.4±1.02.4±0.70.0±0.00.20±0.090.38±0.100.51±0.13DWD4.9±1.02.5±0.43.0±0.00.41±0.100.46±0.090.15±0.12GC4.1±1.12.2±0.71.0±0.00.23±0.100.32±0.100.32±0.13LXC6.4±1.03.2±0.74.0±0.00.48±0.110.53±0.090.11±0.10LHT7.5±0.84.7±1.18.0±0.00.37±0.090.56±0.120.36±0.07平均值 Aver-age4.8±1.92.8±1.02.7±3.10.29±0.160.43±0.110.38±0.26HP3.0±0.62.1±0.40.0±0.00.12±0.100.35±0.050.66±0.21DP5.7±1.53.1±1.14.0±2.90.37±0.110.47±0.100.23±0.12

1)FHS：銅陵市義安區(qū)鳳凰山 Fenghuangshan in Yian District of Tongling City；YS：池州市貴池區(qū)陰山 Yinshan in Guichi District of Chizhou City；DWD：池州市石臺縣大王洞 Dawangdong in Shitai County of Chizhou City；GC：池州市貴池區(qū)谷村 Gucun in Guichi District of Chizhou City；LXC：池州市石臺縣立新村 Lixincun in Shitai County of Chizhou City；LHT：池州市石臺縣蓮花田 Lianhuatian in Shitai County of Chizhou City. HP：同型花居群 Homostyled population；DP：二型花居群 Distyled population.

對安徽羽葉報春同型花和二型花居群的遺傳多樣性分析結(jié)果(表3)表明：同型花居群的等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、觀測雜合度和期望雜合度(分別為3.0、2.1、0.12和0.35)均低于二型花居群(分別為5.7、3.1、0.37和0.47)，說明安徽羽葉報春同型花居群的遺傳多樣性低于二型花居群。然而，同型花居群(0.66)的近交系數(shù)卻明顯高于二型花居群(0.23)。值得注意的是，所有稀有等位基因均出現(xiàn)在二型花居群中，而在同型花居群中未檢測到稀有等位基因。

2.2 安徽羽葉報春居群的遺傳結(jié)構(gòu)分析

安徽羽葉報春6個居群間的遺傳分化系數(shù)和遺傳距離見表4。由表4可以看出：安徽羽葉報春6個居群間遺傳分化系數(shù)的平均值為0.34，其中，銅陵市義安區(qū)鳳凰山(FHS)和池州市貴池區(qū)陰山(YS)居群間的遺傳分化系數(shù)最大(0.45)，池州市石臺縣大王洞(DWD)和池州市石臺縣立新村(LXC)居群間的遺傳分化系數(shù)最小(0.22)。

由表4還可以看出：安徽羽葉報春6個居群間遺傳距離的平均值為0.56，其中，F(xiàn)HS和YS居群間的遺傳距離最大(0.74)，F(xiàn)HS和LXC居群間的遺傳距離最小(0.37)。

Mantel檢驗結(jié)果表明：安徽羽葉報春各居群間的遺傳分化系數(shù)和遺傳距離與地理距離的相關(guān)系數(shù)分別為0.356(P=0.193)和0.250(P=0.370)，說明安徽羽葉報春各居群間的遺傳分化系數(shù)和遺傳距離與地理距離無相關(guān)性。

安徽羽葉報春6個居群間的基因流計算結(jié)果(表5)表明：由LXC和池州市石臺縣蓮花田(LHT)居群向其他居群的基因流較大，為0.057～0.065；由DWD和池州市貴池區(qū)谷村(GC)居群向其他居群的基因流為0.050～0.053；由FHS和YS居群向其他居群的基因流較小，為0.044～0.046。上述結(jié)果說明越靠近秋浦河流域上游的安徽羽葉報春居群，其基因更容易向其他居群流動。進一步分析結(jié)果表明：第1基因流屏障介于FHS和其他居群間，第2基因流屏障介于二型花和同型花居群間。

表4安徽羽葉報春6個居群間的遺傳分化系數(shù)和遺傳距離1)

Table4GeneticdifferentiationcoefficientandgeneticdistanceamongsixpopulationsofPrimulamerrillianaSchltr.1)

居群Population遺傳分化系數(shù)或遺傳距離2)Genetic differentiation coefficient or genetic distance2)FHSYSDWDGCLXCLHTFHS—0.450.430.380.280.35YS0.74—0.360.410.340.34DWD0.700.61—0.320.220.29GC0.420.530.39—0.290.38LXC0.370.650.380.38—0.24LHT0.670.710.630.730.54—

1)FHS：銅陵市義安區(qū)鳳凰山 Fenghuangshan in Yian District of Tongling City；YS：池州市貴池區(qū)陰山 Yinshan in Guichi District of Chizhou City；DWD：池州市石臺縣大王洞 Dawangdong in Shitai County of Chizhou City；GC：池州市貴池區(qū)谷村 Gucun in Guichi District of Chizhou City；LXC：池州市石臺縣立新村 Lixincun in Shitai County of Chizhou City；LHT：池州市石臺縣蓮花田 Lianhuatian in Shitai County of Chizhou City.

2)“—”上方和下方數(shù)據(jù)分別為遺傳分化系數(shù)和遺傳距離 Data above and below “—” are genetic differentiation coefficient and genetic distance，respectively.

表5安徽羽葉報春6個居群間的基因流1)

Table5GeneflowamongsixpopulationsofPrimulamerrillianaSchltr.1)

居群2)Popula-tion2)基因流 Gene flowFHSYSDWDGCLXCLHTFHS—0.0440.0440.0440.0450.046YS0.045—0.0440.0440.0450.046DWD0.0520.052—0.0530.0530.052GC0.0500.0510.051—0.0510.050LXC0.0580.0580.0580.058—0.057LHT0.0630.0640.0640.0630.065—

1)FHS：銅陵市義安區(qū)鳳凰山 Fenghuangshan in Yian District of Tongling City；YS：池州市貴池區(qū)陰山 Yinshan in Guichi District of Chizhou City；DWD：池州市石臺縣大王洞 Dawangdong in Shitai County of Chizhou City；GC：池州市貴池區(qū)谷村 Gucun in Guichi District of Chizhou City；LXC：池州市石臺縣立新村 Lixincun in Shitai County of Chizhou City；LHT：池州市石臺縣蓮花田 Lianhuatian in Shitai County of Chizhou City.

2)表中數(shù)據(jù)為由此列中居群向其他居群的基因流 Data in the table are gene flows from populations in this column to other populations.

分子方差分析(AMOVA)結(jié)果(表6)表明：同型花和二型花居群間的遺傳差異不顯著(P>0.05)；各居群間出現(xiàn)一定的遺傳分化，居群間遺傳變異占總遺傳變異的36.40%(P<0.001)；64.76%的遺傳變異存在于居群內(nèi)，說明安徽羽葉報春居群的主要遺傳變異存在于居群內(nèi)。

聚類分析結(jié)果表明：lnP(D)值隨著K值的升高而持續(xù)且均勻的上升，且ΔK值無明顯峰值(最大值僅為6.75)，表明安徽羽葉報春各居群間的聚類結(jié)果并不明顯。

主坐標分析(PCoA)結(jié)果(圖2)表明：2個同型花居群的供試植株總體上均位于4個二型花居群供試植株的外圍，并且不同居群間的供試植株均存在一定程度的分離，但是同型花和二型花居群間的分離程度并未明顯大于二型花居群間的分離程度，說明安徽羽葉報春的同型花和二型花植株間并沒有產(chǎn)生明顯的遺傳分化。

表6安徽羽葉報春6個居群的分子方差分析(AMOVA)

Table6Analysisofmolecularvariance(AMOVA)amongsixpopulationsofPrimulamerrillianaSchltr.

變異來源Source of variation自由度Degree of freedom平方和Sum of square方差Variance方差比例/%Percentage of varianceP值P value同型花和二型花居群間Between homostyled and distyled populations139.21-0.03-1.16>0.05居群間 Among populations4173.431.0636.40<0.001居群內(nèi)Within population228430.021.8964.76<0.001合計 Total233642.662.92100.00

●：銅陵市義安區(qū)鳳凰山Fenghuangshan in Yian District of Tongling City；○：池州市貴池區(qū)陰山 Yinshan in Guichi District of Chizhou City；■：池州市貴池區(qū)谷村 Gucun in Guichi District of Chizhou City；□：池州市石臺縣大王洞 Dawangdong in Shitai County of Chizhou City；▲：池州市石臺縣立新村 Lixincun in Shitai County of Chizhou City；△：池州市石臺縣蓮花田 Lianhuatian in Shitai County of Chizhou City.圖2 安徽羽葉報春6個居群的主坐標分析(PCoA)Fig. 2 Principal coordinate analysis (PCoA) on six populations of Primula merrilliana Schltr.

3 討 論

安徽羽葉報春為中國特有的野生珍稀花卉種類，具有較高的園藝開發(fā)和應用價值[19]，現(xiàn)僅分布于安徽省南部的丘陵山區(qū)。本研究涉及的6個自然居群均位于安徽羽葉報春分布區(qū)的西北角，即牯牛降北坡及九華山西北坡的秋浦河流域。研究結(jié)果顯示：安徽羽葉報春6個居群的等位基因數(shù)、有效等位基因數(shù)、稀有等位基因數(shù)、觀測雜合度和期望雜合度的平均值均較低，分別為4.8、2.8、2.7、0.29和0.43，說明供試安徽羽葉報春各居群的遺傳多樣性較低；并且，4個二型花居群的等位基因數(shù)、觀測雜合度和期望雜合度的平均值分別為5.7、0.37和0.47，明顯低于安徽羽葉報春分布區(qū)中心的黃山及其周邊區(qū)域的居群(等位基因數(shù)、觀測雜合度和期望雜合度的平均值分別為8.1、0.46和0.59)[15]，據(jù)此判斷供試安徽羽葉報春居群遺傳多樣性的分布基本符合“核心-邊緣”假說[20]。與中心分布區(qū)居群相比，由于安徽羽葉報春邊緣分布區(qū)居群對生境的適應性較差，居群規(guī)模受氣候因子變化的影響較大，更易受到瓶頸效應的影響。另外，由于安徽羽葉報春邊緣分布區(qū)居群通常缺少傳粉昆蟲，其自交繁育系統(tǒng)更易被保留，居群的近交系數(shù)明顯升高。綜上所述，多因子綜合作用促使安徽羽葉報春邊緣分布區(qū)居群的遺傳多樣性明顯下降。

本研究中，銅陵市義安區(qū)鳳凰山(FHS)和池州市貴池區(qū)陰山(YS)居群為同型花居群，位于安徽羽葉報春分布區(qū)的最北緣，其等位基因數(shù)、觀測雜合度和期望雜合度的平均值分別為3.0、0.12和0.35，明顯高于安徽羽葉報春的近緣種堇葉報春(PrimulacicutariifoliaPax)(等位基因數(shù)、觀測雜合度和期望雜合度的平均值分別為1.4、0.01和0.07)[21]，但卻低于供試二型花居群。Mast等[8]認為，報春花屬中約10%的同型花種類由二型花種類進化而來，花型進化趨勢為由二型花向同型花轉(zhuǎn)變，據(jù)此推斷FHS和YS居群也是由二型花植株演化而來，可能是由于基因重組等原因在二型花居群中出現(xiàn)了少量的同型花植株，這些同型花植株的雌雄蕊等高且自交親和性強，無需傳粉昆蟲便可采用自交方式完成有性生殖過程，并且，這些同型花植株具有較好的生殖保障和自動選擇優(yōu)勢[22]，在分布區(qū)邊緣居群中具有較高的適合度，從而被保留，最終形成同型花居群。植物的繁育系統(tǒng)是影響其居群遺傳多樣性的重要因子，在由異交向自交的轉(zhuǎn)變過程中常常伴隨著有效種群減小、連鎖不平衡加劇及基因清除效應增強等現(xiàn)象，進而導致居群的遺傳多樣性降低甚至消失[23]。相關(guān)研究結(jié)果表明：具有自交繁育系統(tǒng)的植物種類的遺傳多樣性明顯低于具有異交繁育系統(tǒng)的近緣種[24-25]，即使是同種類的不同居群，也會由于繁育系統(tǒng)的自交化轉(zhuǎn)變而導致其遺傳多樣性明顯下降[23，26-27]，這可能是導致安徽羽葉報春FHS和YS 2個同型花居群遺傳多樣性低于其附近區(qū)域二型花居群的主要原因。

本研究中，秋浦河流域上游的池州市石臺縣蓮花田(LHT)和池州市石臺縣立新村(LXC)居群的遺傳多樣性均較高，且由這2個居群向其他居群的基因流較大，說明研究區(qū)域內(nèi)的安徽羽葉報春居群的遺傳多樣性與居群位置有一定關(guān)系，建議加強對秋浦河流域上游安徽羽葉報春居群的保護，尤其應注意對居群生境的保護。位于秋浦河流域下游低矮丘陵山區(qū)的FHS和YS居群為同型花居群，其繁育系統(tǒng)已經(jīng)變?yōu)樽越环庇?，與二型花居群的繁育系統(tǒng)(異交繁育)已經(jīng)明顯不同，且與二型花居群間存在明顯的基因流屏障，因此，建議將其視為不同于二型花居群的獨立單元來進行遺傳保護。

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