承德牛肝菌多糖對(duì)2型糖尿病大鼠胰腺的影響

肖艷紅 陳 龍 鄒怡鴿 劉歡歡 劉 楠 周曉慧

(承德醫(yī)學(xué)院，河北 承德 067000)

隨著生態(tài)環(huán)境以及人們生活方式的改變，2型糖尿病(T2DM)已成為老年人最常見的慢性疾病之一〔1〕。作為京津冀重要的食用菌輸出地，河北承德以其獨(dú)特的天然環(huán)境和地理優(yōu)勢(shì)孕育了諸多野生食藥用真菌,牛肝菌即為其一?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)該菌所含生物堿可以治療腰腿疼痛、手足麻木、四肢抽搐與婦女白帶異常等癥狀〔2，3〕。研究表明牛肝菌生理活性多種多樣，如提高免疫力、抗疲勞、抗腫瘤、抗氧化、抗衰老等〔4～8〕。近年報(bào)道植物多糖的降血糖作用取得了一定的進(jìn)展〔9～12〕，但關(guān)于牛肝菌多糖對(duì)T2DM的影響未見報(bào)道。本研究采用高脂高糖飼喂結(jié)合鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射法成功構(gòu)建T2DM大鼠模型〔13〕，牛肝菌多糖灌胃干預(yù)后，對(duì)其降糖作用及對(duì)胰腺組織的影響進(jìn)行研究。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 健康清潔級(jí)Wistar大鼠40只，雄性，體重180～200 g，12周齡，由北京華阜康科技股份有限公司提供。動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(京)2009-0008。飼養(yǎng)于承德醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，自由攝食水，室溫20℃～22℃，自然采光，通風(fēng)良好。大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料及高脂高糖飼料由北京科澳協(xié)力飼料有限公司提供，其中高脂高糖飼料的配方為：豬油10%、蛋黃粉8%、膽固醇1.5%、蔗糖20%、膽酸鈉0.1%、標(biāo)準(zhǔn)飼料60.4%。

1.2試藥與儀器 牛肝菌由承德潤(rùn)隆食品有限公司提供，產(chǎn)于承德市平泉縣山區(qū)；多糖由承德醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室制備，粉末狀4℃冰箱儲(chǔ)存；STZ(美國(guó)Sigma公司，100 mg/瓶，批號(hào)031M1287V)用時(shí)溶解于0.1 mol/L(pH=4.3)檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液中，現(xiàn)用現(xiàn)配；鹽酸二甲雙胍(中美上海施貴寶制藥有限公司，0.5 g/片，批號(hào)1311123)；血糖儀及配套試紙(三諾生物傳感股份有限公司)；蠟塊包埋機(jī)、Olympus顯微鏡和蠟塊切割機(jī)(德國(guó)Leica公司)。

1.3方法

1.3.1動(dòng)物造模 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后給予高脂高糖飼料，為期3 w。后禁食12 h，一次性腹腔注射35 mg/kg STZ，72 h后檢測(cè)空腹血糖(FPG)含量。以FPG≥16.7 mmol/L為成功T2DM模型。

1.3.2動(dòng)物分組及給藥 取40只大鼠，隨機(jī)分為正常組、模型組、牛肝菌多糖低劑量組、牛肝菌多糖高劑量組和二甲雙胍正常組，每組8只。標(biāo)準(zhǔn)飼料正常飼養(yǎng)1 w后，除正常組外其他造模；正常組繼續(xù)給予標(biāo)準(zhǔn)飼料后注射同等劑量的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。72 h后經(jīng)內(nèi)眥采血，測(cè)FPG≥16.7 mmol/L為造模成功。各組分籠飼養(yǎng)，正常組、模型組給予生理鹽水灌胃，牛肝菌多糖低、高劑量組給予牛肝菌多糖(0.2 g/kg、0.4 g/kg)，二甲雙胍組給予二甲雙胍(0.2 g/kg)，1次/d，連續(xù)給藥3 w。

1.3.3指標(biāo)檢測(cè) 給藥前及末次給藥后2次進(jìn)行各組大鼠內(nèi)眥采血，血糖儀檢測(cè)血清葡萄糖(GLU)的含量；送承德市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測(cè)胰島素(INS)的含量。

1.3.4制作胰腺組織HE染色切片 分別取各組大鼠胰腺固定于10%甲醛溶液固定保存。過(guò)夜后經(jīng)脫水，透明，浸蠟，包埋，切片，展片，烘片，脫蠟，染色，封片后光鏡下觀察胰腺組織的形態(tài)變化。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行方差分析及q檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1牛肝菌多糖對(duì)大鼠GLU的影響 給藥前各造模組GLU均顯著高于正常組(P<0.01)，且均≥16.7 mmol/L，說(shuō)明造模成功。與給藥前對(duì)比，給藥3 w后牛肝菌多糖低、高劑量組與二甲雙胍組GLU水平均明顯下降(P<0.01)。給藥3 w后，模型組GLU水平仍顯著高于正常組(P<0.01)；各藥物干預(yù)組GLU水平顯著低于模型組(P<0.01)；其中，牛肝菌多糖高劑量組與二甲雙胍組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2牛肝菌多糖對(duì)大鼠INS水平的影響 給藥前各組INS水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，給藥后模型組INS水平與正常組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，牛肝菌多糖低、高劑量組及二甲雙胍組INS水平均較給藥前有所提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，且與模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表1 牛肝菌多糖對(duì)大鼠GLU水平的影響

與正常組比較：1)P<0.01；與本組給藥前比較：2)P<0.01 ；與模型組比較：3)P<0.01

表2 牛肝菌多糖對(duì)大鼠INS水平影響

2.3牛肝菌多糖對(duì)大鼠胰腺組織形態(tài)的影響 正常組大鼠胰島組織中胰島數(shù)量很多，結(jié)構(gòu)完整，輪廓清晰，外形飽滿規(guī)則；模型組大鼠胰島結(jié)構(gòu)受破壞，胰島細(xì)胞明顯減少，胰島組織明顯萎縮，形態(tài)不規(guī)則，部分胰島細(xì)胞呈現(xiàn)出變性、核固縮現(xiàn)象。牛肝菌多糖低、高劑量組與二甲雙胍組胰島細(xì)胞較多，且結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)規(guī)則，排列整齊。尤其牛肝菌多糖高劑量組與二甲雙胍組胰島組織形態(tài)基本恢復(fù)正常；牛肝菌多糖低劑量組部分恢復(fù)，表明牛肝菌多糖能夠有效保護(hù)T2DM的胰島組織免受損傷，且有劑量依賴性。見圖1。

圖1 各組胰腺組織形態(tài)學(xué)觀察(HE，×400)

3 討 論

T2DM的主要發(fā)病機(jī)制為INS分泌不足或INS抵抗。部分患者并非INS產(chǎn)生不足，而是由于INS的作用效果減弱所致〔14，15〕。正常人體內(nèi)INS通過(guò)受體向下游傳遞信號(hào)，促進(jìn)GLU的利用并抑制其合成，從而降低GLU的含量。T2DM患者基于INS抵抗的存在，INS不能發(fā)揮正常作用，從而使GLU水平一直保持在較高狀態(tài)。本研究顯示牛肝菌多糖干預(yù)后可以明顯降低T2DM大鼠的GLU水平，高劑量組與二甲雙胍組藥效相當(dāng)，T2DM基本病理特點(diǎn)為INS絕對(duì)和相對(duì)不足或外周組織對(duì)INS的敏感性下降。本文結(jié)果說(shuō)明，胰島細(xì)胞分泌INS正常，推測(cè)發(fā)生INS抵抗，即外周組織對(duì)INS敏感性降低。胰腺組織HE染色結(jié)果表明，牛肝菌多糖能有效保護(hù)胰島，減輕損傷，進(jìn)而維持胰腺組織的完整結(jié)構(gòu)，有利于INS受體及其下游分子發(fā)揮作用，緩解INS抵抗帶來(lái)的病理特征。

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