胃腺癌中巨噬細(xì)胞加帽蛋白G和基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達(dá)及相關(guān)性

王 靜 于 敏 牛亞靖 張 紅

(錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院外科，遼寧 錦州 121001)

胃癌最常見(jiàn)的病理類(lèi)型是腺癌，病變形成過(guò)程中腫瘤細(xì)胞具有明顯的遷移特征，對(duì)周?chē)M織的侵襲和破壞能力明顯〔1〕。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2具有較強(qiáng)的溶解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的作用，可以使腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障打開(kāi)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的播散〔2〕。巨噬細(xì)胞加帽蛋白(Cap)G是凝膠溶素超家族中的肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，通過(guò)給微絲末端加帽和形成驅(qū)動(dòng)力來(lái)控制微絲的移動(dòng)，并對(duì)維持細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，調(diào)控腫瘤細(xì)胞的遷移〔3〕。本研究關(guān)注胃腺癌中CapG和MMP-2的表達(dá)，分析其臨床意義及相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2015年1月至2016年12月錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院行根治手術(shù)后的59例胃腺癌患者為觀(guān)察組，留取完整的臨床資料及術(shù)后新鮮的組織。男31例，女28例，年齡38～87(平均62.9)歲。病例均經(jīng)病理醫(yī)師確診，并符合世界衛(wèi)生組織(WHO)中的診斷標(biāo)準(zhǔn)及分型。排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前行放、化療；②有風(fēng)濕免疫性疾?。虎郯橛衅渌鞴賽盒阅[瘤。選擇12例距腫瘤邊緣>5 cm的非腫瘤性胃黏膜組織為對(duì)照組，留取新鮮組織，其中男6例，女6例，年齡40～82歲，平均59.8歲。兩組性別、年齡構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2兩組CapG和MMP-2表達(dá)檢測(cè) 兩組新鮮標(biāo)本取材后均立即置于70%的酒精中固定。CapG和MMP-2檢測(cè)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)。取出70%酒精固定后組織，用眼科剪刀將其剪碎成漿糊狀，放在不銹鋼網(wǎng)上輕搓后，用生理鹽水輕輕沖洗，300目銅網(wǎng)過(guò)濾后收集細(xì)胞懸液，離心1 min后制備單細(xì)胞懸液(1×106/ml)。取1 ml，嚴(yán)格按實(shí)驗(yàn)步驟加入一抗、磷酸鹽緩沖液(PBS)及異硫氰酸熒光素(FITC)-IgG二抗等試劑后，應(yīng)用美國(guó)BC公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測(cè)，應(yīng)用系統(tǒng)的自帶的 Expo32 ADC軟件進(jìn)行分析。

1.3結(jié)果判定 以熒光指數(shù)(FI)表示蛋白表達(dá)的半定量。FI=(癌組織中蛋白表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度-對(duì)照樣品平均熒光強(qiáng)度)/正常對(duì)照樣品平均熒光強(qiáng)度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)及線(xiàn)性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組CapG和MMP-2表達(dá)的比較 觀(guān)察組CapG和MMP-2表達(dá)量明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組CapG和MMP-2表達(dá)的比較

2.2CapG和MMP-2表達(dá)在觀(guān)察組不同臨床病理特征中比較 觀(guān)察組CapG和MMP-2表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管累犯和癌結(jié)節(jié)顯著相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表2。

2.3觀(guān)察組CapG和MMP-2相關(guān)性 CapG和MMP-2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.48，P<0.05)。

表2 CapG和MMP-2表達(dá)在觀(guān)察組不同臨床病理特征中的比較

3 討 論

胃腺癌是由胃黏膜上皮異型增生引起的，引發(fā)高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變并癌變，癌細(xì)胞形成后腫瘤多數(shù)表現(xiàn)為低分化的，腫瘤細(xì)胞體積小，具有侵襲性生長(zhǎng)的特征，同時(shí)具有明顯遷移潛能〔4，5〕。MMPs家族是一類(lèi)蛋白，具有類(lèi)似結(jié)構(gòu)，由疏水信號(hào)肽序列、富含脯氨酸鉸鏈區(qū)、催化活性區(qū)、前肽區(qū)、羧基末端區(qū)構(gòu)成。其中前肽區(qū)和催化活性區(qū)具有高度保守性〔6〕。MMP-2屬于明膠酶，其基因定位在染色體16q21，由12個(gè)內(nèi)含子和13個(gè)外顯子構(gòu)成，其表達(dá)蛋白的分子量是72 kD〔7〕。MMP-2的功能調(diào)節(jié)源于轉(zhuǎn)移后的分泌、前酶原的激活?；罨蟮腗MP-2在降解細(xì)胞外間質(zhì)的作用過(guò)程中有“鉆頭”的作用〔8，9〕，MMP-2的作用有促進(jìn)細(xì)胞增殖，使分離脫落的腫瘤細(xì)胞侵入脈管系統(tǒng)；調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)，促進(jìn)趨化性；促進(jìn)腫瘤間質(zhì)新生血管形成〔10，11〕。CapG含有348個(gè)氨基酸，大小為38.5 kD，廣泛表達(dá)于巨噬細(xì)胞相關(guān)的組織中〔12〕。肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架是細(xì)胞有眾多功能的特征，對(duì)保持細(xì)胞形態(tài)有重要作用〔13〕。當(dāng)鈣離子存在的作用下，CapG作為Actin結(jié)合的蛋白，可以與鈣離子形成有效的結(jié)合，能在F-actin延伸末端加帽，阻止其延伸，參與肌動(dòng)蛋白和肌動(dòng)纖維的重塑過(guò)程中，對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移及調(diào)節(jié)胞吞作用有重要價(jià)值〔14，15〕。CapG尤其在細(xì)胞高增殖、局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處播散的腫瘤中表達(dá)升高，認(rèn)為CapG是細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)促進(jìn)蛋白〔16〕。

本研究提示CapG和MMP-2高表達(dá)是胃腫瘤形成的重要蛋白因素，二者可能具有癌基因的類(lèi)似作用；CapG和MMP-2二者高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和脈管侵犯的過(guò)程，由于上述因素是腫瘤進(jìn)展及不良預(yù)后的重要指標(biāo)，因此CapG和MMP-2高表達(dá)預(yù)示著腫瘤具有高度侵襲性的生物學(xué)行為和不良的預(yù)后。本文提示CapG和MMP-2二者在對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及進(jìn)展的調(diào)節(jié)作用過(guò)程中具有一定的協(xié)同效應(yīng)，并非是完全通過(guò)獨(dú)立的通路實(shí)現(xiàn)的。CapG可能作為上游信號(hào)對(duì)MMP-2進(jìn)行高效調(diào)節(jié)。有研究認(rèn)為CapG高表達(dá)有助于上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，使腫瘤細(xì)胞與間質(zhì)的同質(zhì)性增強(qiáng)，增加轉(zhuǎn)移潛能〔17〕。此時(shí)失去極性的胃腺癌上皮細(xì)胞易于轉(zhuǎn)化為運(yùn)動(dòng)能力強(qiáng)的間質(zhì)樣腫瘤細(xì)胞，使腫瘤細(xì)胞與定植部位的組織黏附性增強(qiáng)，腫瘤出現(xiàn)定植，生長(zhǎng)，形成轉(zhuǎn)移瘤〔18，19〕。

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