老年胃間質瘤組織中DOG1表達及對預后的影響

魏 娜

(中航工業(yè)三六三醫(yī)院消化內科，四川 成都 610000)

胃間質瘤(GST)是一種起源于胃間葉組織的腫瘤，是消化系統(tǒng)較為常見的腫瘤之一〔1〕。該腫瘤具有一定的惡性度，根據其惡性程度劃分有極低，低，中，高度危險性等，對于腫瘤直徑大于4 cm，核分裂象>5/50 HPF考慮惡性可能較大。該病的發(fā)病機制尚不明確，可能與c-kit基因或血小板源生長因子(PDGF)的基因突變有關〔2〕?？捎诟髂挲g段起病，但以中老年人群最為常見，其中40歲以后發(fā)病率較高。該病早期臨床癥狀不明顯，等腫瘤增長到一定程度常表現(xiàn)為上腹部不適，消化道出血等癥狀〔3〕。GST的診斷缺乏特異性的標準，臨床上以免疫組化標記CD117為確診間質瘤的重要參考〔4〕。此外需要結合腫瘤的形態(tài)學改變，例如腫瘤呈現(xiàn)梭形、核分裂象增多等〔5，6〕。但對于鏡下形態(tài)學不典型的腫瘤常不能完全確定其來源及性質，因此，臨床上急需擴充間質瘤的診斷指標，特別是能用于判斷患者預后的指標。GST中發(fā)現(xiàn)的蛋白(DOG)1由960個氨基酸組成，可能是一種通過鈣離子激活的氯離子通道蛋白，近年發(fā)現(xiàn)，DOG1蛋白與GST發(fā)生、發(fā)展密切相關的指標〔7〕。本研究分析DOG1在瘤體內的表達及對老年GST患者預后的判斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 2013年1月至2016年12月在中航工業(yè)三六三醫(yī)院接受外科手術治療的老年GST患者86例，納入標準：年齡≥60歲，經臨床、影像學及病理學檢測明確診斷為GST(高危)，患者及家屬術前均告知相關情況，并自愿簽署知情同意書。排除標準：①合并其他組織起源的惡性腫瘤；②嚴重的肝腎功能障礙；③合并自身免疫性疾??；④活動性感染；⑤臨床資料缺失。其中男35例，女51例，平均年齡(66.1±4.2)歲，平均病程(7.3±2.6)個月。以相對DOG1水平中位數(shù)(7.26)為界，將患者分為DOG1高水平組(DOG1≥7.26，n=43)及DOG1低水平組(DOG1<7.26，n=43)。

1.2標準及檢測 GST的診斷標準參照中國胃腸間質瘤診斷治療共識(2013年版)〔8〕?；颊呔邮芡唤M醫(yī)師所施行的手術治療，術前準備及術后處理均由同一組醫(yī)師評估和指導，術后留取腫瘤組織及瘤旁正常組織。手術標本一部分采用甲醛溶液固定，制作石蠟切片采用免疫組化標記CD117及DOG1。一部分手術標本采集后充分研磨，提取蛋白后采用Western印跡半定量檢測CD117及DOG1的水平。比較間質瘤中不同水平DOG1患者術后1年累積復發(fā)率。

1.3統(tǒng)計學方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行t檢驗，復發(fā)率應用Kaplan-Meier曲線計算，采用Log-rank檢驗。

2 結 果

2.1DOG1及CD117在GST中的表達 免疫組化染色證實間質瘤中表達CD117及DOG1。Western印跡檢測表明，間質瘤組織中CD117(6.7±1.30)與DOG1表達水平(7.2±1.50)顯著高于瘤旁正常組織(1.0±0.27，1.0±0.30)(P<0.05)。見圖1和圖2。

圖1 GST組織DOG1和CD117表達(×200,免疫組化)

圖2 DOG1及CD117在GST中的表達Western印跡檢測

2.2GST中DOG1表達與CD117表達相關性 DOG1表達與CD117表達呈正相關(P<0.01)。見圖3。

2.3GST中不同水平DOG1患者術后1年累積復發(fā)率的比較 DOG1高水平組術后1年累積復發(fā)率(25.58%)顯著高于DOG1低水平組(9.30%)(P=0.042)，見圖4。

圖3 GST中DOG1表達與CD117表達相關性

圖4 GST中不同水平DOG1患者術后1年累積復發(fā)率的比較

3 討 論

胃腸道間質瘤是一種起源于胃腸道間葉組織腫瘤，其發(fā)病率在消化道系統(tǒng)腫瘤中約占2%，可發(fā)生消化道的任何部位，其中胃的發(fā)病率最高。男女發(fā)病相當，常見于50歲以上的中老年人，年輕患者也可發(fā)病，兒童較為罕見。李軍川等〔9〕研究認為，間質瘤的危險因素和腫瘤發(fā)生部位、年齡和性別等無明顯關系。間質瘤主要起源于胃腸道平滑肌，較少來源于血管和神經等組織，但卻與神經功能密切相關，是一種性質不明的腫瘤。消化道間質細胞起源于中胚層，分化程度較低，具有多種分化潛能，可分化為成纖維細胞、脂肪細胞、血管內皮細胞和滑膜細胞等。由于早期無明顯特異性癥狀，隨著腫瘤生長，可表現(xiàn)為胃腸道系統(tǒng)多種癥狀，如腹部包塊、出血、梗阻等，可出現(xiàn)血液轉移和局部侵犯，臨床容易漏診和誤診〔10〕。部分間質瘤為惡性或可發(fā)展為惡性間質瘤。胃腸間質瘤在腹部CT和磁共振成像(MRI)表現(xiàn)無特異性，早期病變在內鏡下主要變現(xiàn)為隆起型病變，對于懷疑為間質瘤患者常需結合超聲內鏡，操作較復雜。需和平滑肌瘤、神經鞘瘤、炎性肌纖維母細胞瘤和惡性間皮瘤等多種疾病相鑒別。胃腸間質瘤是起源于平滑肌細胞和神經組織的腫瘤，且按照其大小、鏡下細胞的形態(tài)學改變，是否合并出血、壞死等鑒定其良惡性。吳紅梅等〔11〕從臨床病理學研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑，手術是否殘留，核分裂數(shù)及細胞形態(tài)和異形性顯著影響患者預后。但近年來研究認為，其判定為良性的間質瘤也可發(fā)生轉移，因此對于根據病理學鏡下特點鑒別良惡性具有一定的局限性〔12〕。目前該病的確診方法主要依靠病理學檢測，特別是CD117的免疫組化檢測。因間質瘤具有一定的致死率，特別是分級為高危的間質瘤，具有高復發(fā)率和低生存期。單純依據CD117的表達來診斷間質瘤具有一定局限性，且少數(shù)間質瘤可呈現(xiàn)CD117陰性的情況〔12〕。DOG1是新近發(fā)現(xiàn)的與間質瘤發(fā)生發(fā)展密切相關的指標。DOG1定位于人類11q13上細胞周期蛋白(CCN)D1基因座，含有26個外顯子，是一種8次穿膜蛋白〔12〕。研究發(fā)現(xiàn)DOG1分布在各種內分泌上皮細胞、視網膜和感覺神經元細胞等，肝內外膽管上皮細胞和睪丸間質細胞及胃腸間質瘤等多處〔13〕。多項研究均顯示DOG1在人類胃腸道間質瘤中的表達陽性率超過90%〔10，14〕。

CD117是c-kit基因的表達產物，是多次跨膜的酪氨酸激酶受體，高度表達以胃間質瘤細胞膜和細胞質中，目前診斷胃間質瘤的主要手段采用形態(tài)學鏡下觀察和免疫組化，其中免疫組化重要的依據就是檢測CD117的表達〔15〕。既往認為，CD117陽性是診斷間質瘤的“金標準”，近年來發(fā)現(xiàn)，胃間質瘤中約95%患者表達CD117，通過大體標本情況和鏡下細胞形態(tài)并結合免疫組化檢測CD117可準確診斷胃間質瘤，但部分患者由于c-kit基因的缺失或變異，導致CD117表達陰性，尚需要其他指標來診斷〔16，17〕。臨床中對于CD117陰性患者及部分形態(tài)不典型的患者常需選取CD34蛋白輔助診斷，由于CD34在總體胃腸道間質瘤(GIST)中的陽性率約70%，且在原始造血干細胞、內皮細胞和肌成纖維細胞中均有表達，臨床特異性不高。近年來研究發(fā)現(xiàn)，DOG1在胃腸道間質瘤中高度表達不受c-kit基因等的表達影響，DOG1是Cajal間質細胞中鈣離子調節(jié)的氯通道蛋白，對于間質瘤具有高度特異性。研究表明在CD117陰性情況下，多數(shù)患者標本DOG1仍高度表達，因此對于臨床特征不明顯、免疫組化診斷不明時患者行DOG1檢測，對于準確診斷為間質瘤具有重要意義〔18～20〕。

本研究提示DOG1與CD117類似，對間質瘤的診斷具有一定價值，這與許春偉等〔21〕研究結果一致。本文結果和李寶江等〔22〕的研究結果一致，李寶江等〔22〕認為，DOG1的表達與患者年齡、性別、腫瘤的起源部位、腫瘤的細胞起源、有無侵襲性等因素均無顯著相關。提示DOG1與CD1117在胃間質瘤中均高度表達，且DOG1也具有和CD117程度相當?shù)脑\斷準確性，亦有可能兩種蛋白在間質瘤的發(fā)生過程中存在內在共同的聯(lián)系，但具體機制尚需進一步研究以明確。間質瘤是一種具有潛在惡性行為的交界性腫瘤。雖然行邊緣陰性的手術切除術有望使患者獲得根治，但術后仍然有一部分患者存在復發(fā)傾向〔6，23〕。本文提示DOG1在瘤體內水平對患者術后復發(fā)具有一定輔助判斷價值，為臨床中預后的判斷提供量化標準。本研究由于樣本量有限所得結果可能存在一定的偏倚，尚需更多樣本量和多中心性研究加以驗證；此外，本研究雖然發(fā)現(xiàn)DOG1在間質瘤中的水平改變對胃間質瘤的臨床預后有一定的影響，但DOG1在間質瘤發(fā)生發(fā)展中的具體作用和對復發(fā)等的影響，尚需進一步實驗加以論證。

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