• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    同/異型乳酸菌對青貯玉米開窖后品質(zhì)及微生物的影響

    2018-06-05 06:55:21王旭哲張凡凡馬春暉唐開婷李菲菲
    農(nóng)業(yè)工程學(xué)報 2018年10期
    關(guān)鍵詞:布氏青貯飼料乙酸

    王旭哲,張凡凡,馬春暉,苗 芳,唐開婷,李菲菲

    (石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,石河子 832003)

    0 引 言

    隨著畜牧業(yè)的發(fā)展,玉米青貯飼料的重要性日益突顯[1-2]。玉米青貯主要依靠乳酸菌厭氧發(fā)酵產(chǎn)生乳酸降低pH值,并通過降低葉片呼吸和酶活性,抑制霉菌、梭狀芽孢桿菌、酵母菌和其他不利微生物生長,從而使玉米青貯得以保存[3-4],因此乳酸菌被認(rèn)為是青貯飼料發(fā)酵過程中最重要的因素之一[5]。其發(fā)酵產(chǎn)生高濃度的乳酸,但在開窖后,不良微生物的大量消耗致使青貯飼料有氧穩(wěn)定性降低,即青貯過程中微生物群落的變化將影響最終青貯飼料的品質(zhì)和有氧穩(wěn)定性[6-8]。主要由于酵母菌等微生物在好氧條件中利用這些化合物作為底物產(chǎn)生CO2、水和熱量,進(jìn)而導(dǎo)致pH值上升,致使不耐低pH值的絲狀真菌和芽孢菌等有害菌生長增殖[9]。

    為提高玉米青貯有氧穩(wěn)定性,很多學(xué)者提出使用乳酸菌添加劑[10-11],認(rèn)為乳酸菌添加劑能有效地改善發(fā)酵青貯飼料的質(zhì)量,主要通過改變pH值,抑制有害的附生微生物生長來提高有氧穩(wěn)定性[12-14]。Kharazian等[4]從伊朗玉米青貯飼料中分離得到的乳酸菌具有較高的抗真菌活性,可用作青貯飼料添加劑提高青貯玉米的質(zhì)量和有氧穩(wěn)定性。青貯飼料引入添加微生物菌劑這一概念是為了控制發(fā)酵,加入快速發(fā)酵的同型乳酸菌提高青貯飼料品質(zhì)[15]。根據(jù)Yuan等[5]研究可知,青貯飼料添加同型乳酸菌植物乳桿菌(Lactobacillus plantarumas)導(dǎo)致乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較對照有所提高。Liu等[16]的研究中同樣發(fā)現(xiàn)相對于未經(jīng)處理的青貯飼料,接種植物乳桿菌能提高青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)。此外,乳酸桿菌屬(Lactobacillus)或片球菌屬(Pediococcus)的其他菌也經(jīng)常被使用[17]。但同型乳酸菌對于提高有氧穩(wěn)定性作用不顯著,近年來為提高有氧穩(wěn)定性并降低青貯發(fā)酵損失,異型發(fā)酵乳酸菌物種如布氏乳桿菌(Lactobacillus buchneri)作為青貯添加劑添加到青貯飼料中[15,18]。布氏乳桿菌可產(chǎn)生抗菌的乙酸和細(xì)菌素等副產(chǎn)物,減少有氧惡化并改善青貯品質(zhì)[19]。微生物菌劑必須具備足夠數(shù)量以有效控制發(fā)酵,目前普遍認(rèn)為1×105cfu/g的乳酸菌添加量可以壓制青貯附生乳酸菌成為優(yōu)勢種群[20-21]。因此,應(yīng)用適當(dāng)?shù)娜樗峋臃N量可以確保青貯飼料質(zhì)量,防止青貯飼料變質(zhì),提高經(jīng)濟(jì)效益[22]。此外,已經(jīng)提出同型發(fā)酵乳酸菌與布氏乳桿菌復(fù)合進(jìn)行添加,因為這 2類微生物的結(jié)合有可能提高發(fā)酵速度并提高有氧穩(wěn)定性[23-24]。然而,2種同型發(fā)酵乳酸菌共同添加或2種同型發(fā)酵乳酸菌與布氏乳桿菌復(fù)合添加提高玉米青貯有氧穩(wěn)定性及發(fā)酵特性的能力是未知的。

    基于此,本研究設(shè)置添加不同發(fā)酵類型的乳酸菌處理,探究同時添加 2種同型發(fā)酵乳酸菌、單一添加布氏乳桿菌以及 2種同型發(fā)酵乳酸菌與布氏乳桿菌復(fù)合添加對開窖后玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)、微生物數(shù)量及有氧穩(wěn)定性的影響。旨在明確添加不同發(fā)酵類型的乳酸菌處理在玉米青貯開窖后,能否改善發(fā)酵品質(zhì)、降低有害微生物數(shù)量、提高有氧穩(wěn)定性,為生產(chǎn)實(shí)踐提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料和樣地

    試驗選用新飼玉10號作為青貯原料。試驗選定在石河子大學(xué)的牧草試驗站(N 44°20′,E 88°30′,H 420 m)開展。其生長期:4月10日~8月20日(2015年),共計112 d,青貯玉米的刈割期定于乳熟末期/蠟熟初期進(jìn)行(玉米乳線超過2/3時),收割全株玉米,將青貯玉米切碎至1~2 cm。真空袋規(guī)格為50 cm×40 cm×0.24 mm。全株玉米青貯原料營養(yǎng)成分和微生物數(shù)量見表1。

    表1 玉米青貯原料營養(yǎng)組成和微生物數(shù)量Table 1 Nutrients composition and microbial populations of corn silage of ensiling material

    1.2 試驗設(shè)計

    試驗將添加乳酸菌設(shè)計為4個處理,CK處理(不加任何菌劑);T處理(同型發(fā)酵乳酸菌):Lactobacillus plantarum和Pediococcus acidilactici復(fù)合添加,添加量為1∶1,1×105cfu/g;Y 處理(異型發(fā)酵乳酸菌):Lactobacillus buchneri,添加量為1×105cfu/g;TY處理(同型+異型發(fā)酵乳酸菌):Lactobacillus plantarum、Pediococcus acidilactici和Lactobacillus buchneri復(fù)合添加,添加量為1∶1∶1,1×105cfu/g。并將各菌種在MRS(de man rogosa sharpe)液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),平板計數(shù)后確定其數(shù)量,按比例配置菌液。用滅菌噴壺均勻的噴灑至待貯青貯玉米表面(CK處理噴灑等量的去離子水)。噴灑完畢后立刻進(jìn)行青貯。采用真空袋法調(diào)制,每個處理4袋,每袋2.0 kg,室溫(25±3)℃下發(fā)酵60 d后(開窖0 h)開窖。檢測開窖后第0、48、96、144、192,240 h青貯pH值、可溶性碳水化合物(water soluble carbohydrate,WSC)、乳酸(lactic acid,LA)、乙酸(acetic acid,AA)、氨態(tài)氮(NH3-N)、乳酸菌、霉菌、酵母菌以及好氧細(xì)菌數(shù)量的變化,對 CO2產(chǎn)量進(jìn)行分析。開窖全程動態(tài)監(jiān)測各處理青貯溫度變化。應(yīng)用隸屬函數(shù)法對青貯發(fā)酵品質(zhì)及微生物數(shù)量進(jìn)行綜合評判。

    1.3 測定方法

    DM 采用 105 ℃烘干法測定[25];pH 值利用酸度計(PHS-3C,上海雷磁)測定;CP測定采用凱氏定氮法[10];NDF和ADF采用范氏法(Van Soest)[25];WSC測定采用蒽酮比色法測定[26];有機(jī)酸(乳酸、乙酸、丙酸、丁酸)用液相色譜法測定[18],氨態(tài)氮采用苯酚-次氯酸鈉比色法測定[27];微生物數(shù)量采用平板計數(shù)法計數(shù),乳酸菌、霉菌、酵母菌以及好氧細(xì)菌分別用MRS培養(yǎng)基、高鹽察氏培養(yǎng)基、麥芽糖浸粉瓊脂培養(yǎng)基和營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。有氧穩(wěn)定性測定在發(fā)酵60 d后打開全部實(shí)驗室青貯發(fā)窖袋,袋口用雙層紗布包裹,防止果蠅等其他雜質(zhì)污染和水分散失,空氣可自由進(jìn)入發(fā)酵袋中,置于室溫條件下保存。將多點(diǎn)式溫度記錄儀(i500-E3TW,玉環(huán)智拓儀器科技有限公司)的多個探頭分別放置于發(fā)酵袋的幾何中心,同時在環(huán)境中放置3個探頭,用于測定環(huán)境溫度,溫度記錄儀測量時間間隔設(shè)置為5 min,每個處理放置 3個溫度探頭。如果樣品溫度高于環(huán)境溫度2 ℃,說明青貯開始腐敗變質(zhì),此時記錄時間即為有氧穩(wěn)定時間。CO2的測定采用CO2產(chǎn)氣裝置進(jìn)行測定。CO2產(chǎn)氣裝置:按Ashbell等[28]的描述,自制評定有氧穩(wěn)定性的CO2產(chǎn)氣裝置。每套裝置包括2個500 mL 礦泉水塑料瓶,分上(放置25 g樣品)下(KOH溶液)2部分。取20 mL 20% KOH溶液,放入上述產(chǎn)氣裝置內(nèi),置于30 ℃的恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行CO2產(chǎn)氣量測定。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    在Excel中作數(shù)據(jù)的基本處理,用SPSS 20.0對各處理的pH值、WSC、NH3-N、乳酸、乙酸、丙酸、丁酸含量、CO2、乳酸菌、霉菌、酵母菌以及好氧細(xì)菌數(shù)量以及氧穩(wěn)定時間進(jìn)行方差分析,通過Duncan法對各處理間的差異進(jìn)行比較,并對上述指標(biāo)進(jìn)行具有互作效應(yīng)的雙因素方差分析。采用Origin 9.0進(jìn)行繪圖,對開窖時間和各微生物數(shù)量進(jìn)行擬合分析。應(yīng)用 Fzuuy數(shù)學(xué)中隸屬函數(shù)法進(jìn)行青貯發(fā)酵品質(zhì)以及微生物數(shù)量的綜合評判。其中,與發(fā)酵品質(zhì)呈正相關(guān)的指標(biāo)(WSC、乳酸、乙酸、乳酸菌、有氧穩(wěn)定性)采用公式(1)計算,與發(fā)酵品質(zhì)呈負(fù)相關(guān)的指標(biāo)(pH值、NH3-N、NH3-N/TN、霉菌、酵母菌、好氧細(xì)菌和CO2含量)采用公式(2)計算。

    式中Fij為第i個處理第j個指標(biāo)的隸屬度;Xij為第i個處理第 j個指標(biāo)測定值;Xmax、Xmin為所有供試對象中第 j項指標(biāo)的最大值、最小值。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 添加不同乳酸菌有氧穩(wěn)定性變化及CO2產(chǎn)氣分析

    玉米青貯中添加乳酸菌處理的有氧穩(wěn)定性如圖 1所示,各處理有氧暴露后穩(wěn)定的時間分別為CK:131.71 h,T:131.54 h,Y:195.58 h,TY:196.21 h。其中Y和TY處理有氧穩(wěn)定時間顯著高于其余處理 63.87~64.67 h(P<0.05),且二者差異不顯著(P>0.05)。同時CK和T處理間差異不顯著(P>0.05)。

    圖1 不同處理玉米青貯的有氧穩(wěn)定性Fig. 1 Aerobic stability of different treatments corn silage

    開窖后,對各處理青貯樣品進(jìn)行CO2產(chǎn)氣分析(圖2),發(fā)現(xiàn)各處理的CO2產(chǎn)量和開窖時間滿足Allometric1非線性關(guān)系(P<0.01),其關(guān)系式為(3)。

    試驗結(jié)果表明,隨著開窖時間的延長,各處理的CO2產(chǎn)氣量逐步增加。對比各處理的產(chǎn)氣量發(fā)現(xiàn),在開窖全程 CK處理的 CO2產(chǎn)量始終顯著高于 T處理(1.8%~87.2%)、Y處理(33.7%~88.6%)和TY處理(9.9%~88.3%)(P<0.05)。除開窖240 h時添加乳酸菌的處理間差異不顯著(P>0.05)外,其余開窖過程中Y和 TY處理的CO2產(chǎn)量始終顯著低于T處理(P<0.05),且Y處理顯著低于TY處理。即玉米青貯中乳酸菌的添加有助于降低在開窖過程中玉米青貯中的 CO2濃度,同時異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)的添加更易于減少CO2的產(chǎn)生。

    圖2 開窖后添加不同乳酸菌玉米青貯CO2產(chǎn)量變化Fig. 2 Change of CO2 production of corn silage adding different lactic acid bacteria after silos opened

    2.2 添加不同乳酸菌處理開窖后發(fā)酵品質(zhì)動態(tài)變化

    玉米青貯開窖后,各處理pH值逐漸增加(表2),且在開窖240 h時較開窖0 h時上升了9.1%~15.1%。開窖后CK處理pH值始終顯著高于其余處理3.5%~13.2%(P<0.05),且在開窖240 h后CK處理的pH值超過劣質(zhì)青貯的規(guī)定值4.80。而其余pH值均屬于青貯品質(zhì)一般的pH值范圍,T處理pH值始終顯著低于CK處理(6.0%~15.2%)、Y處理(2.4%~5.6%)和 TY處理(0.5%~3.9%)(P<0.05)。Y 處理的 pH 值僅在開窖96,144和192 h顯著高于TY處理(P<0.05),在開窖結(jié)束時二者差異不顯著(P>0.05)。由上可知,添加乳酸菌處理在開窖后pH值均較未添加處理低,即玉米青貯中乳酸菌的添加有助于抑制開窖后青貯飼料pH值的升高。

    各玉米青貯處理 WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)在開窖后的變化見表2,開窖240 h時各處理WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)均較開窖0 h時減少了31.4%~45.4%,即玉米青貯開窖后各處理WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)逐漸在減少,尤其CK 處理在開窖0 h時WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于其余處理11.1%~11.8%(P<0.05),但開窖0 h之后其WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)迅速降低,直至開窖144 h時顯著低于其余處理(P<0.05)。由表2可知,玉米青貯開窖0 h之后,Y處理WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)始終顯著高于CK處理(10.3%~23.9%)、T處理(3.5%~16.2%)和TY處理(9.7%~24.5%)(P<0.05),即單一添加異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)可在開窖后減緩玉米青貯中WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)的減少。

    開窖后,各玉米青貯處理乳酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨開窖時間的延長而減少,開窖240 h時各玉米青貯乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)處理較開窖0 h時降低了52.2%~69.5%。開窖后T處理乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)始終顯著高于CK處理(2.4%~46.5%)和Y處理(8.3%~31.5%)(P<0.05),同時除開窖96 h外顯著高于 TY處理 3.8%~25.3%(P<0.05)。除開窖48和96 h外,其余開窖時間CK處理的乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)始終顯著低于其余處理(P<0.05)。而 Y處理在開窖過程中乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)始終顯著低于 TY處理 5.0%~9.6%(P<0.05)。由上可知,玉米青貯中乳酸菌的添加可以降低開窖后乳酸的減少量,尤其是添加同型發(fā)酵乳酸菌效果較為明顯。

    表2 開窖后添加不同乳酸菌玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)變化Table 2 Change of fermentation characteristics of corn silage adding different lactic acid bacteria after silos opened

    由表 2可知,玉米青貯開窖后,各處理的乙酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)均出現(xiàn)一定程度的上升趨勢(T和TY0~96 h,CK和Y0~144 h),之后逐漸下降,除T處理外,其余處理在240 h的乙酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)均較開窖0 h減少22.9%~52.3%。其中開窖后Y和TY處理乙酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)始終顯著高于CK和T處理(P<0.05)。而在開窖0~96 h,TY處理乙酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)始終顯著高于 Y處理(P<0.05),此后直至開窖結(jié)束時始終顯著低于 Y處理(P<0.05)。由此可知,玉米青貯中添加含有異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)的處理均對開窖后抑制乙酸的損失具有積極作用。丙酸和丁酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低,低于檢出線。

    玉米青貯開窖后,各處理NH3-N質(zhì)量分?jǐn)?shù)迅速增加,開窖后240 h較開窖0 h時增加了82.8%~251.5 %(表2)。其中CK處理的NH3-N質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加量最大,達(dá)251.5%,且開窖0 h之后的有氧暴露過程中始終顯著高于T處理(11.1%~23.1%)、Y處理(14.9%~43.7%)和TY處理(15.0%~42.7%)(P<0.05)。Y和TY處理 NH3-N質(zhì)量分?jǐn)?shù)除開窖0和48 h外,其余時間均顯著低于T處理(P<0.05),但僅在開窖0,96和240 h,Y處理NH3-N質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著高于TY處理(P<0.05)。同時NH3-N/TN的變化與NH3-N質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化極為相似。因此,玉米青貯添加乳酸菌后在開窖過程中可減少NH3-N的產(chǎn)生,且異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)的添加更易于減少NH3-N的產(chǎn)生。

    2.3 添加不同乳酸菌處理開窖后微生物數(shù)量動態(tài)變化

    各玉米青貯處理中開窖后 240 h乳酸菌數(shù)量顯著高于開窖0 h時的10.7%~16.1%(P<0.05,圖3a),其中添加乳酸菌處理的玉米青貯中 240 h乳酸菌數(shù)量極顯著高于開窖0 h時(P<0.01)。將各處理的乳酸菌數(shù)量與開窖時間進(jìn)行擬合發(fā)現(xiàn)滿足ExpDec1非線性關(guān)系(P<0.01),其關(guān)系式為式(4)。

    試驗結(jié)果表明,隨著開窖時間的延長,各處理的乳酸菌數(shù)量逐步增加。同時,T和TY處理乳酸菌數(shù)量除開窖0和48 h外其余時間均顯著高于CK處理(P<0.05),即玉米青貯中乳酸菌的添加有助于增加開窖過程中玉米青貯中乳酸菌數(shù)量。

    開窖后,對各處理青貯樣品進(jìn)行霉菌數(shù)量分析(圖3b),將各處理的霉菌數(shù)量和開窖時間進(jìn)行擬合發(fā)現(xiàn)滿足一元線性關(guān)系(P<0.01),其關(guān)系式見式(5)。

    隨著開窖時間的延長,各處理的霉菌數(shù)量逐步增加。同時發(fā)現(xiàn)各處理開窖后240 h霉菌數(shù)量著高于開窖0 h時2.7%~21.7%(P<0.05),其中添加乳酸菌處理的玉米青貯中240 h霉菌數(shù)量極顯著高于開窖0 h時(P<0.01)。Logistic開窖后Y處理的霉菌數(shù)量始終顯著低于CK處理(4.6%~31.3%)、T處理(24.7%~34.4%)和 TY處理(31.0%~45.2%)(P<0.05)。而 T和 TY處理的霉菌數(shù)量在開窖后始終顯著高于其余處理(P<0.05),即單一添加異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)可在開窖后抑制玉米青貯中霉菌的增長,但添加同型發(fā)酵乳酸菌的效果不明顯,且復(fù)合添加 2種發(fā)酵類型的乳酸菌反而使開窖后霉菌數(shù)量增加。

    玉米青貯開窖后,各處理酵母菌數(shù)量變化如圖3c所示,開窖后240 h酵母菌數(shù)量均極顯著高于開窖0 h時117.7%~206.3%(P<0.01),并從各處理的酵母菌數(shù)量與開窖時間擬合分析中發(fā)現(xiàn)二者呈顯著的 Logistic非線性關(guān)系(P<0.01),且關(guān)系式為式(6)。

    圖3 開窖后添加不同乳酸菌玉米青貯微生物數(shù)量變化Fig. 3 Change of microbial populations of corn silage at adding different lactic acid bacteria after silos opened

    隨著開窖時間的延長,各處理的酵母菌數(shù)量逐步增加。除48和192 h外,其余開窖時間T處理酵母菌數(shù)量始終顯著低于TY處理1.7%~17.4%(P<0.05)。而CK處理的酵母菌數(shù)量在 96~192 h顯著高于 T和 Y處理(P<0.05)。即添加2種同型發(fā)酵乳酸菌或單一添加異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)可在開窖后大部分時間內(nèi)抑制玉米青貯中酵母菌的增長,但復(fù)合添加 2種發(fā)酵類型的乳酸菌反而效果不佳。

    各處理玉米青貯開窖 240 h好氧細(xì)菌數(shù)量均極顯著高于開窖0 h時10.0%~22.2%(P<0.01,圖3d),將各處理的好氧細(xì)菌數(shù)量和開窖時間進(jìn)行擬合發(fā)現(xiàn)二者滿足一元線性關(guān)系,其關(guān)系式為式(7)。

    隨著開窖時間的延長,各處理的好氧細(xì)菌數(shù)量逐步增加。CK處理好氧細(xì)菌數(shù)量始終顯著高于 T處理(1.2%~15.1%)、Y處理(3.8%~15.1%)和 TY處理(3.1%~6.2%)(P<0.05)。同時,Y 處理好氧細(xì)菌數(shù)量除開窖96 h外均顯著低于TY處理(P<0.05),并在開窖第48、144和240 h顯著低于T處理(P<0.05)。由此可知,玉米青貯中添加乳酸菌有助于降低開窖過程的好氧細(xì)菌數(shù)量,同時異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)的單一添加更易于減少好氧細(xì)菌的產(chǎn)生。

    2.4 開窖時間及添加不同乳酸菌處理對開窖后玉米青貯品質(zhì)的交互作用

    開窖時間及試驗設(shè)置的添加不同乳酸菌處理均對玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)和微生物數(shù)量產(chǎn)生極顯著影響(P<0.01,表3),通過雙因素方差分析可知開窖時間與處理的交互作用對上述所有指標(biāo)均產(chǎn)生極顯著影響(P<0.01)。

    2.5 添加不同乳酸菌處理開窖后玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)及微生物數(shù)量的綜合評價

    采用模糊數(shù)學(xué)隸屬函數(shù)值法,以pH值、WSC、乳酸、乙酸、NH3-N、NH3-N/TN、CO2產(chǎn)氣量、有氧穩(wěn)定性、乳酸菌、霉菌、酵母菌和好氧細(xì)菌數(shù)量12個指標(biāo),對添加不同乳酸菌處理的玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)及微生物數(shù)量進(jìn)行綜合評價(表4)。綜合評價分值越高則青貯品質(zhì)越好,反之越差。開窖240 h后,對添加不同乳酸菌處理的玉米青貯發(fā)酵特性以及微生物數(shù)量的綜合排序為:

    Y處理>TY處理>T處理>CK處理。

    表4 開窖后添加不同乳酸菌玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)及微生物數(shù)量隸屬函數(shù)分析Table 4 Analysis of membership function of fermentation characteristics and microbial quantity of corn silage adding different lactic acid bacteria after silos opened

    3 討 論

    3.1 添加不同乳酸菌對玉米青貯有氧穩(wěn)定性及 CO2產(chǎn)量的影響

    青貯飼料在青貯容器開封后的穩(wěn)定程度稱之為青貯飼料的有氧穩(wěn)定性。在生產(chǎn)實(shí)踐中,有氧穩(wěn)定性代表青貯飼料對溫度升高的抵抗力,而對青貯溫度的監(jiān)測是開窖后最常見的物料穩(wěn)定性的指標(biāo)[9]。本研究中各處理的CO2產(chǎn)量隨著開窖時間逐漸增加,因為青貯開窖后,厭氧環(huán)境立即轉(zhuǎn)變?yōu)橛醒醐h(huán)境,其中好氧微生物的活動性增強(qiáng),其利用青貯發(fā)酵底物產(chǎn)生水、CO2和熱量[29],直接導(dǎo)致青貯溫度上升。但添加乳酸菌有助于降低開窖過程中玉米青貯中的 CO2濃度。因為青貯主要依靠乳酸菌進(jìn)行厭氧發(fā)酵產(chǎn)生乳酸,降低 pH從而抑制不良微生物生長,減少營養(yǎng)損失,進(jìn)一步減少 CO2的產(chǎn)生[21]。同時本研究發(fā)現(xiàn)玉米青貯中添加乳酸菌可適當(dāng)提高有氧穩(wěn)定性,這與Jungbluth等[30]的研究結(jié)果一致,Jungbluth通過生物添加劑成功地抑制了青貯飼料的好樣腐敗,同時減少 CO2產(chǎn)量并提高有氧穩(wěn)定性。本研究中異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)的添加更易于提高有氧穩(wěn)定性,減少CO2的產(chǎn)生,因為異型發(fā)酵的布氏乳桿菌可產(chǎn)生更多的乙酸,抑制好氧變質(zhì),延長有氧穩(wěn)定時間,而在有氧暴露期間,同型發(fā)酵乳酸菌所產(chǎn)生的乳酸可作為酵母菌生長的底物,僅產(chǎn)生少量能抑制酵母菌和霉菌生長的短鏈脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)[29]。這一結(jié)果也從前人研究中得到了大量驗證[15,31-32],因此,單一接種同型發(fā)酵乳酸菌的玉米青貯有氧穩(wěn)定性較差。另一方面,從本研究結(jié)果中可知同型發(fā)酵乳酸菌和異型發(fā)酵乳酸菌的復(fù)合添加的處理有氧穩(wěn)定時間最長,顯著高于對照組和單一接種同型發(fā)酵乳酸菌的玉米青貯處理(P<0.05),但與單一接種異型發(fā)酵乳酸菌的玉米青貯有氧穩(wěn)定性無顯著差異(P>0.05),這與Filya[33]報道較為相似。Filya用布氏乳桿菌和植物乳桿菌聯(lián)合接種高粱與玉米,與單獨(dú)使用布氏乳桿菌相比,得到折中的實(shí)驗結(jié)果,而聯(lián)合接種的青貯飼料比未接種的具有更好的有氧穩(wěn)定性。

    3.2 添加不同乳酸菌對開窖后玉米青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響

    青貯飼料暴露在空氣中,pH值的增加是青貯飼料變質(zhì)的一個重要指標(biāo)[9]。因為在青貯開窖后便進(jìn)入有氧發(fā)酵階段,此時大量以有機(jī)酸(乳酸、可溶性糖和乙醇)為主要營養(yǎng)基質(zhì)維持生存的微生物大量生長。而乳酸在降低和維持低pH值青貯飼料中起著極為重要的作用[34]。當(dāng)大量以酵母菌為主的好氧微生物接觸到空氣時,消耗乳酸引起pH值的增加。因此,本研究中無論是否添加乳酸菌的處理pH均隨開窖時間的延長逐漸增加。但是添加乳酸菌處理在開窖后pH值均較未添加處理低。這與前人研究結(jié)果一致[30-31],由于同型發(fā)酵乳酸菌在發(fā)酵過程中產(chǎn)生較多乳酸,開窖后雖然有所損失,仍然較其余處理質(zhì)量分?jǐn)?shù)高,可以維持較低pH環(huán)境[35]。同時,異型發(fā)酵乳酸菌在開窖后可分解乳酸產(chǎn)生乙酸,在一定程度上維持了玉米青貯中低pH水平[36]。

    本研究發(fā)現(xiàn),各處理的WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)均逐漸減少。因為在開窖初期細(xì)胞呼吸作用,以及隨開窖時間的增加青貯溫度的升高促進(jìn)酶的水解,可能引起部分WSC的分解,造成不消化成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的相對增加,其中,WSC發(fā)酵轉(zhuǎn)化為 CO2[37]。但是單一添加異型發(fā)酵布氏乳桿菌可在開窖后減緩玉米青貯中WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)的減少。因為,異型發(fā)酵布氏乳桿菌產(chǎn)生乙酸抑制好氧微生物增殖,降低WSC的消耗。而異型發(fā)酵乳酸菌除利用WSC產(chǎn)生乙酸外,還可以利用乳酸產(chǎn)生乙酸和少量的1,2-丙二醇[38],即損失的WSC質(zhì)量分?jǐn)?shù)較少,乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)低,但高于對照組。本研究中添加同型發(fā)酵乳酸菌的玉米青貯處理開窖后乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高。因為在開窖初期氧氣質(zhì)量分?jǐn)?shù)較少,少量的氧氣刺激同型發(fā)酵乳酸菌利用青貯飼料中的WSC產(chǎn)生乳酸以維持低pH環(huán)境防止有氧腐敗,與Wang等[27]的研究結(jié)果相似。Romero的研究同樣表明添加布氏乳桿菌的青貯飼料在增加乙酸生產(chǎn)的同時,其乳酸濃度較未添加任何乳酸菌的對照組高[36]。Kleinschmit等[39]將全株玉米青貯接種布氏乳桿菌和片球菌,在51~361 d中比未接種組得到更高濃度的乙酸和1,2-丙二醇。從本研究中也發(fā)現(xiàn)同型發(fā)酵乳酸菌和異型發(fā)酵乳酸菌的復(fù)合添加的處理具有較高的乳酸和乙酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)。其原因是該處理的WSC被大量消耗,主要被同型發(fā)酵乳酸菌用以產(chǎn)生乳酸,而其中一部分被異型發(fā)酵乳酸菌用以產(chǎn)生乙酸,同時異型發(fā)酵乳酸菌還利用乳酸產(chǎn)生乙酸。

    NH3-N濃度主要反映蛋白質(zhì)的降解程度,是評價青貯飼料品質(zhì)的一個重要指標(biāo)。玉米青貯開窖后,pH值逐漸上升,當(dāng)pH值>4.2時不良微生物的活動,氨基酸被分解成氨、硫化氫和胺類,降解率增大,使得NH3-N質(zhì)量分?jǐn)?shù)增加[40]。本研究發(fā)現(xiàn)玉米青貯添加乳酸菌后在開窖過程中可減少NH3-N的產(chǎn)生。Junior等[9]研究發(fā)現(xiàn)添加乳酸菌處理相比對照處理,能有效地降低青貯飼料中蛋白質(zhì)的降解。Wang等[27]的研究中也得到了相應(yīng)的證實(shí),該研究通過設(shè)置玉米和苜蓿混合青貯中添加植物乳桿菌,在開窖后發(fā)現(xiàn)青貯飼料的發(fā)酵特性提高且保持低pH值,具有較高乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù),同時降低氨態(tài)氮濃度。而本研究結(jié)果顯示異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)的添加更易于減少NH3-N的產(chǎn)生,歸咎于異型發(fā)酵乳酸菌所產(chǎn)生的乙酸抑制好氧微生物的活動,減緩對氨基酸的分解[11]。由于異型發(fā)酵的乳酸菌的作用,在復(fù)合添加乳酸菌的處理中NH3-N質(zhì)量分?jǐn)?shù)較低。

    3.3 添加不同乳酸菌對開窖后玉米青貯微生物數(shù)量的影響

    青貯飼料發(fā)酵過程中乳酸菌數(shù)量占主導(dǎo)地位,使好氧微生物的活動受到限制[15]。本研究發(fā)現(xiàn)玉米青貯中乳酸菌的添加有助于增加開窖過程中玉米青貯中乳酸菌數(shù)量。因為開窖后同型和異型發(fā)酵乳酸菌利用WSC等營養(yǎng)物質(zhì),維持生長繁殖,由于添加的乳酸菌數(shù)量在青貯中占主導(dǎo)地位,因此即使開窖后有氧環(huán)境不適于乳酸菌繼續(xù)生長,但其數(shù)量仍然緩慢增加。Tran等[38]研究發(fā)現(xiàn)青貯飼料中固有的布氏乳桿菌暴露于空氣后,其活性不足以維持青貯飼料的安全穩(wěn)定。而布氏乳桿菌添加劑的使用可進(jìn)一步促進(jìn)乙酸產(chǎn)生,從而抑制好氧微生物的生長,降低霉菌數(shù)量。本研究中單一添加異型發(fā)酵乳酸菌(布氏乳桿菌)可在開窖后抑制玉米青貯中霉菌的增長,但添加同型發(fā)酵乳酸菌的效果不明顯,且復(fù)合添加2種發(fā)酵類型的乳酸菌反而使開窖后霉菌數(shù)量增加??赡苡捎陂_窖后玉米青貯中的厭氧環(huán)境被打破,且單一添加同型發(fā)酵乳酸菌及復(fù)合添加2種發(fā)酵類型乳酸菌的玉米青貯中含有較高的乳酸,為霉菌的生長繁殖創(chuàng)造了有利條件,雖然含有部分乙酸但其對霉菌的抑制作用弱于霉菌數(shù)量的增長。

    Jungbluth等[30]研究發(fā)現(xiàn)微生物開始改變它們的新陳代謝,并利用氧作為對厭氧階段的直接反應(yīng)。一旦它們的新陳代謝從厭氧變成有氧,氧氣被微生物呼吸所消耗,伴隨著溫度上升。試驗過程中各處理在開窖后好氧細(xì)菌均有不同程度的增加,青貯pH環(huán)境的變化促使好氧微生物生長,造成青貯營養(yǎng)成分的進(jìn)一步的損失[41]。本研究中添加乳酸菌的玉米青貯中好氧細(xì)菌數(shù)量較對照組少,同時異型發(fā)酵乳酸菌的單一添加更易于減少好氧細(xì)菌的產(chǎn)生。這些抗菌性能是通過有機(jī)酸穿過細(xì)胞膜在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)解離并釋放H+的結(jié)果。其結(jié)果使細(xì)胞內(nèi)的pH迅速降低,產(chǎn)生大量ATP抵抗pH值下降以維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài),最終導(dǎo)致細(xì)胞減少或停止生長[27]。在Kharazian等[4]對生物測定的結(jié)果中反映出,異型發(fā)酵乳酸菌相對于同型發(fā)酵菌具備較高抑菌性能。本研究發(fā)現(xiàn)單一添加同型或異型發(fā)酵乳酸菌可在開窖后大部分時間內(nèi)抑制玉米青貯中酵母菌的增長,但復(fù)合添加 2種發(fā)酵類型的乳酸菌反而效果不佳。是由于開窖后復(fù)合添加同型或異型發(fā)酵乳酸菌的玉米青貯中,其pH值高于添加同型發(fā)酵乳酸菌的玉米青貯處理,乙酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)低于單一添加異型發(fā)酵乳酸菌的玉米青貯中的玉米青貯處理。

    Baek等[42]報道,明串珠菌和魏斯氏乳酸菌所產(chǎn)生的乳酸和乙酸的是主要抗菌物質(zhì)。已有的研究表明乳酸在抑菌中起重要作用,但不是唯一的一種。在 Kharazian等[4]的研究中,一些乳酸菌菌株沒有高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的乳酸生產(chǎn)但顯示出較高的抑菌率,因此乳酸菌可能會產(chǎn)生一些其他的抗真菌物質(zhì)。異型發(fā)酵乳酸菌能抑制好氧變質(zhì),其產(chǎn)生的乙酸被看作是主要的抑制物質(zhì)[18]。但Akihisa等[43]研究發(fā)現(xiàn)添加異型發(fā)酵乳酸菌 TM2的黑麥草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)好,乙酸和丙酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)也較少但有氧穩(wěn)定性比乙酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)較多的乙酸添加青貯飼料好,說明乳酸菌TM2能產(chǎn)生乙酸以外的抗酵母菌和霉菌的物質(zhì)。最近的研究已經(jīng)證實(shí),一些乳酸菌生產(chǎn)其他抗真菌化合物,如環(huán)二肽、蛋白質(zhì)類化合物、有機(jī)酸、脂肪酸和抑菌素[44-45]。因此,添加這類不僅能提高青貯發(fā)酵品質(zhì),而且能改善青貯飼料有氧穩(wěn)定性的乳酸菌值得研究與利用。

    4 結(jié) 論

    綜上所述,玉米青貯中添加不同乳酸菌對開窖后青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)、微生物數(shù)量、有氧穩(wěn)定性影響顯著。綜合評價表明,單一添加異型發(fā)酵乳酸菌(Lactobacillus buchneri,添加量為 1×105cfu/g)的處理評分最高(0.790)。因此,單一添加異型發(fā)酵乳酸菌的玉米青貯,開窖后在改善發(fā)酵品質(zhì)、降低有害微生物數(shù)量、提高有氧穩(wěn)定性方面均優(yōu)于單一添加同型或復(fù)合添加乳酸菌的玉米青貯。

    [1] Ferreira G, Alfonso M, Depino S, et al. Effect of planting density on nutritional quality of green-chopped corn for silage[J]. Journal of Dairy Science, 2014, 97(9): 5918-5921.

    [2] Neumann M, Horts E H, Figueira D N, et al. Potential of corn silage production in different sowing times in the Paraná Midwest region[J]. 2016, 9(1): 37-44.

    [3] Keller L A M, Pereyra M L G, Keller K M, et al. Fungal and mycotoxins contamination in corn silage: monitoring risk before and after fermentation[J]. Journal of Stored Products Research, 2013, 52(1): 42-47.

    [4] Kharazian Z A, Jouzani G S, Aghdasi M, et al. Biocontrol potential of Lactobacillus, strains isolated from corn silages against some plant pathogenic fungi[J]. Biological Control,2017, 110(4): 33-43.

    [5] Yuan X J, Guo G, Wen A Y, et al. The effect of different additives on the fermentation quality, in vitro, digestibility and aerobic stability of a total mixed ration silage[J]. Animal Feed Science & Technology, 2015, 207(6): 41-50.

    [6] Ni K, Wang Y, Li D, et al. Characterization, identification and application of lactic acid bacteria isolated from forage paddy rice silage[J]. Plos One, 2015, 10(3): 1-14.

    [7] Jr K L, Robinson J R, Ranjit N K, et al. Microbial populations, fermentation end-products, and aerobic stability of corn silage treated with ammonia or a propionic acid-based preservative.[J]. Journal of Dairy Science, 2000, 83(7): 1479-1486.

    [8] Muck R E. Silage microbiology and its control through additives.[J]. Revista Brasileira De Zootecnia, 2010, 39(39):183-191.

    [9] Junior V H B, Fortaleza A P D S, Junior F L M, et al.Aerobic stability in corn silage (Zea mays L.) ensiled with different microbial additives[J]. Acta Scientiarum Animal Sciences, 2017, 39(4): 357-362.

    [10] Rabelo C H S, Rezende A V D, Nogueira D A, et al. Perdas fermentativas e estabilidade aeróbia de silagens de milho inoculadas com bactérias ácido-láticas em diferentes estádios de maturidade[J]. Revista Brasileira De Saúde E Produ??o Animal, 2012, 13(3): 656-668.

    [11] Silva N C D, Dos Santos J P, ávila, Carla L. S, et al.Evaluation of the effects of two Lactobacillus buchneri strains and sodium benzoate on the characteristics of corn silage in a hot-climate environment[J]. Grassland Science,2015, 60(3): 169-177.

    [12] Denek N, Can A, Avci M, et al. The effect of molasses-based pre-fermented juice on the fermentation quality of first-cut lucerne silage[J]. Grass & Forage Science, 2011, 66(2): 243-250.

    [13] Chen L, Guo G, Yuan X, et al. Effects of applying molasses,lactic acid bacteria and propionic acid on fermentation quality, aerobic stability and in vitro gas production of total mixed ration silage prepared with oat–common vetch intercrop on the Tibetan Plateau[J]. Journal of the Science of Food & Agriculture, 2016, 96(5): 1678-1685.

    [14] Trabi E B, Yuan X, Li J, et al. Effect of glucose and lactic acid bacteria on the fermentation quality, chemical compositions and in vitro digestibility of mulberry (Morus Alba) leaf silage[J]. Pakistan Journal of Zoology, 2017, 49(6):2271-2277.

    [15] Koc F, Aksoy S O, Okur A A, et al. Effect of pre-fermentated juice, Lactobacillus plantarum and Lactobacillus buchneri on the fermentation characteristics and aerobic stability of high dry matter alfalfa bale silage[J]. Journal of Animal & Plant Sciences, 2017, 27(5): 1426-1431.

    [16] Liu Q H, Shao T, Bai Y F. The effect of fibrolytic enzyme;Lactobacillus plantarum, and two food antioxidants on the fermentation quality; alpha-tocopherol and beta-carotene of high moisture napier grass silage ensiled at different temperatures[J]. Animal Feed Science & Technology, 2016,221(8): 1-11.

    [17] Dunière L, Sindou J, Chaucheyras-Durand F, et al. Silage processing and strategies to prevent persistence of undesirable microorganisms[J]. Animal Feed Science &Technology, 2013, 182(1-4): 1-15.

    [18] Rabelo C H S, Basso F C, Lara E C, et al. Effects of Lactobacillus buchneri as a silage inoculant and as a probiotic on feed intake, apparent digestibility and ruminal fermentation and microbiology in wethers fed low-dry-matter whole-crop maize silage[J]. Grass & Forage Science, 2018,73(1): 534-544.

    [19] Rabelo C, Basso F, Mcallister T A, et al. Influence of Lactobacillus buchneri and forage: Concentrate ratio on the growth performance, fatty acid profile in longissimus muscle and meat quality of beef cattle[J]. Canadian Journal of Animal Science, 2016, 96(4): 550-562.

    [20] Li X, Xu W, Yang J, et al. Effects of applying lactic acid bacteria to the fermentation on a mixture of corn steep liquor and air-dried rice straw[J]. Animal Nutrition, 2016, 2(3): 229-233.

    [21] Abdul R N, Abd Halim M R, Mahawi N, et al. Determination of the use of Lactobacillus plantarum and Propionibacterium freudenreichii application on fermentation profile and chemical composition of corn silage[J]. BioMed Research International, 2017(1): 1155-1162.

    [22] Huisden C M, Adesogan A T, Kim S C, et al. Effect of applying molasses or inoculants containing homofermentative or heterofermentative bacteria at two rates on the fermentation and aerobic stability of corn silage[J].Journal of Dairy Science, 2009, 92(2): 690-697.

    [23] Weinberg Z G, Ashbell G, Hen Y, et al. Ensiling whole-crop wheat and corn in large containers with Lactobacillus plantarum and Lactobacillus buchneri[J]. Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 2002, 28(1): 7-11.

    [24] Adesogan A T, Salawu M B. Effect of applying formic acid,heterolactic bacteria or homolactic and heterolactic bacteria on the fermentation of bi-crops of peas and wheat[J]. Journal of the Science of Food & Agriculture, 2004, 84(9): 983-992.

    [25] 張麗英. 飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)(第 2版)[M]. 北京:中國農(nóng)業(yè)出版社, 2002.

    [26] 高俊鳳. 植物生理學(xué)實(shí)驗指導(dǎo)[M]. 北京:高等教育出版社,2006.Gao Junfeng. Plant Physiology Experimental Guidance [M].Beijing: Higher Education Press, 2006. (in Chinese with English abstract)

    [27] Wang M, Yu Z, Wu Z, et al. Effect of Lactobacillus plantarum‘KR107070’ and a propionic acid-based preservative on the fermentation characteristics, nutritive value and aerobic stability of alfalfa-corn mixed silage ensiled with four ratios[J]. Grassland Science, 2017, 64: 51-60.

    [28] Ashbell G, Weinberg Z G, Azrieli A, et al. A simple system to study the aerobic deterioration of silages[J]. El Día Médico,1991, 30(64): 391-393.

    [29] Wang M, Yang C, Jia L, et al. Effect of Lactobacillus buchneri and Lactobacillus plantarum on the fermentation characteristics and aerobic stability of whipgrass silage in laboratory silos[J]. Grassland Science, 2015, 60(4): 233-239.

    [30] Jungbluth K H, Trimborn M, Maack G C, et al. Effects of three different additives and two different bulk densities on maize silage characteristics, temperature profiles, CO2and O2-dynamics in small scale silos during aerobic exposure[J].Applied Sciences, 2017, 7(6): 545-556.

    [31] Kristensen N B, Sloth K H, H?jberg O, et al. Effects of microbial inoculants on corn silage fermentation, microbial contents, aerobic stability, and milk production under field conditions[J]. Journal of Dairy Science, 2010, 93(8): 3764-3774.

    [32] Tabacco E, Piano S, Revellochion A, et al. Effect of Lactobacillus buchneri LN4637 and Lactobacillus buchneri LN40177 on the aerobic stability, fermentation products, and microbial populations of corn silage under farm conditions.[J]. Journal of Dairy Science, 2011, 94(11): 5589-5598.

    [33] Filya I. The Effect of Lactobacillus buchneri, and Lactobacillus plantarum, on the fermentation, aerobic stability, and ruminal degradability of low dry matter corn and sorghum silages[J]. Journal of Dairy Science, 2003,86(11): 3575-3581.

    [34] Jungbluth K, Maack C, Büscher W, et al. A new ex-situ method to investigate aerobic stability of maize silage faces[J]. Journal of Agricultural Science and Technology.2016, 2, 49-54.

    [35] Yuan X J, Wang J, Guo G, et al. Effects of ethanol, molasses and Lactobacillus plantarum on fermentation characteristics and aerobic stability of total mixed ration silages[J]. Grass &Forage Science, 2016, 71(2): 328-338.

    [36] Romero J J, Zhao Y, Balseca-Paredes M A, et al. Laboratory silo type and inoculation effects on nutritional composition,fermentation, and bacterial and fungal communities of oat silage[J]. Journal of Dairy Science, 2017, 100(3): 1812-1828.

    [37] ávila C L S, Pinto J C, Sugawara M S, et al. Effect of addition of a bacteria isolated from sugarcane silage on the quality of the silage[J]. Acta Scientiarum Animal Sciences,2008, 30(3): 255-261.

    [38] Tran T M T, Nguyen M T, Nguyen H V, et al. Effects of wilting and lactic acid bacteria inoculation on fermentation and microbial community of elephant grass silage produced in Vietnam[J]. Grassland Science, 2017, 10: 1-5.

    [39] Kleinschmit D H, Jr K L. A meta-analysis of the effects of Lactobacillus buchneri on the fermentation and aerobic stability of corn and grass and small-grain silages[J]. Journal of Dairy Science, 2006, 89(10): 4005-4013.

    [40] Hashemzadeh-Cigari F, Khorvash M, Ghorbani G R, et al.Interactive effects of molasses by homofermentative and heterofermentative inoculants on fermentation quality,nitrogen fractionation, nutritive value and aerobic stability of wilted alfalfa (Medicago sativa L) silage[J]. Journal of Animal Physiology & Animal Nutrition, 2013, 98(2): 290-299.

    [41] Borreani G, Piano S, Tabacco E. Aerobic stability of maize silage stored under plastic films with different oxygen permeability. Journal of the Science of Food & Agriculture,2014, 94(13): 2684-2690.

    [42] Baek E, Kim H, Choi H, et al. Antifungal activity of Leuconostoc citreum, and Weissella confusa, in rice cakes[J].Journal of Microbiology, 2012, 50(5): 842-848.

    [43] Akihisa Y, Hidenori K, Yasuhiro A, et al. Effects of addition of acetic acid, 1,2-propanedol and lactic acid bacteria on the aerobic stability of Italian ryegrass silage[C]// Grassland Agriculture: Balancing Production and Environmental Protection----Proceedings of the, China-Japan-Korea Grassland Conference, 2006: 93-95.

    [44] Crowley S, Mahony J, Sinderen D V. Current perspectives on antifungal lactic acid bacteria as natural bio-preservatives[J].Trends in Food Science & Technology, 2013, 33(2): 93-109.

    [45] Gajbhiye M H, Kapadnis B P. Antifungal-activity-producing lactic acid bacteria as biocontrol agents in plants[J].Biocontrol Science & Technology, 2016, 26(11): 1451-1470.

    猜你喜歡
    布氏青貯飼料乙酸
    乙醇和乙酸常見考點(diǎn)例忻
    兩種不同青貯劑對青貯飼料品質(zhì)的影響
    青貯飼料在肉牛養(yǎng)殖中的使用
    湖南飼料(2019年5期)2019-10-15 08:59:12
    青貯飼料在豬日糧中的的應(yīng)用研究
    布氏菌病患者抗體測定與細(xì)菌學(xué)檢驗結(jié)果的比較觀察
    DMAC水溶液乙酸吸附分離過程
    滴鼻免疫布氏菌活疫苗保護(hù)效果的研究
    乙酸仲丁酯的催化合成及分析
    羊種布氏菌043強(qiáng)毒株BRA0434基因缺失突變株的構(gòu)建與毒力的初步評價
    布氏菌與巨噬細(xì)胞的相互作用機(jī)制
    在线观看av片永久免费下载| 亚洲av一区综合| 国产一区二区三区av在线 | 天堂影院成人在线观看| 午夜免费激情av| 国产亚洲91精品色在线| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲,欧美,日韩| 老司机福利观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久人人爽人人爽人人片va| 日日啪夜夜撸| 成人精品一区二区免费| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲av成人精品一区久久| 最近2019中文字幕mv第一页| 久久综合国产亚洲精品| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 波多野结衣高清无吗| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美成人精品欧美一级黄| 午夜老司机福利剧场| 天堂√8在线中文| 日本与韩国留学比较| 看十八女毛片水多多多| 最近最新中文字幕大全电影3| 人妻少妇偷人精品九色| 免费观看人在逋| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产精品爽爽va在线观看网站| av国产免费在线观看| 一级黄色大片毛片| av专区在线播放| 亚洲一区高清亚洲精品| 一区二区三区免费毛片| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲自拍偷在线| 国产老妇女一区| 成人精品一区二区免费| 久99久视频精品免费| 嫩草影院新地址| 久久久久久久久大av| 波多野结衣高清无吗| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品永久免费网站| 亚洲av免费高清在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品久久久久久久久亚洲| 免费观看在线日韩| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 内地一区二区视频在线| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲国产欧美人成| avwww免费| 久久久久久九九精品二区国产| 国产探花极品一区二区| 国产成人a区在线观看| 国产亚洲欧美98| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲av成人av| av国产免费在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩精品中文字幕看吧| 免费人成在线观看视频色| 精品日产1卡2卡| 国产人妻一区二区三区在| 99国产精品一区二区蜜桃av| 哪里可以看免费的av片| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久久久久九九精品二区国产| 99久久九九国产精品国产免费| 欧美潮喷喷水| 内地一区二区视频在线| 美女 人体艺术 gogo| 午夜精品在线福利| 国产精品女同一区二区软件| 一进一出好大好爽视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 中文亚洲av片在线观看爽| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产成人a区在线观看| 99久国产av精品| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品久久久久久av不卡| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩制服骚丝袜av| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 不卡视频在线观看欧美| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日本三级黄在线观看| 秋霞在线观看毛片| 久久久久九九精品影院| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精品av视频在线免费观看| 国产爱豆传媒在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产午夜精品论理片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日本在线视频免费播放| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产真实乱freesex| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲av一区综合| 男女边吃奶边做爰视频| 久久久久久久久大av| 美女免费视频网站| 亚洲av中文av极速乱| 国产成人精品久久久久久| 欧美最新免费一区二区三区| 欧美人与善性xxx| 真人做人爱边吃奶动态| 级片在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 天堂网av新在线| 中文字幕免费在线视频6| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲熟妇熟女久久| 一进一出抽搐gif免费好疼| 看免费成人av毛片| 在线播放无遮挡| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产成人a区在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产v大片淫在线免费观看| 久久久色成人| 日韩高清综合在线| 99久久无色码亚洲精品果冻| 综合色丁香网| 丰满乱子伦码专区| 长腿黑丝高跟| 亚洲国产欧美人成| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 美女免费视频网站| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 国内精品久久久久精免费| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品久久久久久久久免| 日本黄色片子视频| 久久人人爽人人片av| 能在线免费观看的黄片| 精品欧美国产一区二区三| 日本一二三区视频观看| 精品久久久久久久末码| 91久久精品国产一区二区成人| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久精品欧美日韩精品| 国产一区二区在线av高清观看| 久久精品影院6| 日本精品一区二区三区蜜桃| 我的女老师完整版在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 搡老岳熟女国产| 亚洲自拍偷在线| 日本与韩国留学比较| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 嫩草影视91久久| 大型黄色视频在线免费观看| 91久久精品电影网| 91久久精品电影网| 免费观看在线日韩| 成年女人看的毛片在线观看| 免费观看在线日韩| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国产激情偷乱视频一区二区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品电影一区二区三区| 国产色婷婷99| 99热精品在线国产| 国产精品野战在线观看| 看片在线看免费视频| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 观看免费一级毛片| av在线老鸭窝| av在线老鸭窝| 精品久久久久久久久久免费视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久久精品大字幕| 一级毛片aaaaaa免费看小| av专区在线播放| 波多野结衣巨乳人妻| 久久亚洲国产成人精品v| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产精品免费一区二区三区在线| 久久中文看片网| 国产私拍福利视频在线观看| 日韩欧美三级三区| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲国产欧美人成| 最近视频中文字幕2019在线8| 18禁在线播放成人免费| 男女之事视频高清在线观看| 色播亚洲综合网| 成人无遮挡网站| 午夜精品在线福利| 久99久视频精品免费| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲图色成人| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久久久久久中文| 亚洲欧美日韩东京热| 国产成人一区二区在线| 久久久久久久久久久丰满| 日本黄色片子视频| 亚洲国产精品成人久久小说 | 99九九线精品视频在线观看视频| 一个人免费在线观看电影| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美成人a在线观看| 午夜免费激情av| 成人性生交大片免费视频hd| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 又爽又黄无遮挡网站| 九九爱精品视频在线观看| 丝袜喷水一区| 国产色爽女视频免费观看| 99久久精品一区二区三区| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲性久久影院| 亚洲性久久影院| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 成年女人毛片免费观看观看9| 在线看三级毛片| 最近的中文字幕免费完整| 久久99热6这里只有精品| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩国内少妇激情av| 国产精品久久久久久久电影| 久久精品人妻少妇| 五月伊人婷婷丁香| 日韩三级伦理在线观看| 中文字幕熟女人妻在线| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 欧美在线一区亚洲| 午夜精品在线福利| 欧美3d第一页| 日韩欧美国产在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲欧美精品自产自拍| av在线观看视频网站免费| 国产伦精品一区二区三区视频9| 村上凉子中文字幕在线| 香蕉av资源在线| 亚洲最大成人av| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 乱系列少妇在线播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲性久久影院| 亚洲专区国产一区二区| 1000部很黄的大片| 日韩精品有码人妻一区| 九色成人免费人妻av| 亚洲av熟女| 成人性生交大片免费视频hd| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产伦一二天堂av在线观看| av.在线天堂| 深夜a级毛片| 波多野结衣高清作品| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲国产色片| 内地一区二区视频在线| 成人欧美大片| 婷婷亚洲欧美| 日韩精品青青久久久久久| 免费av毛片视频| 一级毛片久久久久久久久女| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 天堂网av新在线| 少妇高潮的动态图| 12—13女人毛片做爰片一| 国产爱豆传媒在线观看| 欧美bdsm另类| 淫秽高清视频在线观看| 99riav亚洲国产免费| 成人二区视频| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产黄片美女视频| av天堂在线播放| 深夜精品福利| 亚洲国产精品成人综合色| 久99久视频精品免费| 久久人人爽人人片av| 国产综合懂色| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 中文字幕av成人在线电影| 国产成人91sexporn| 日本免费a在线| 人妻少妇偷人精品九色| 村上凉子中文字幕在线| 国产高清视频在线观看网站| 91久久精品国产一区二区成人| 热99re8久久精品国产| 观看免费一级毛片| 国产亚洲精品av在线| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 一进一出好大好爽视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 一进一出抽搐动态| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 欧美高清成人免费视频www| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 久久人妻av系列| 伦理电影大哥的女人| 国产三级在线视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一级av片app| 观看免费一级毛片| 看十八女毛片水多多多| 亚洲av中文av极速乱| 免费高清视频大片| 日韩欧美精品免费久久| 成熟少妇高潮喷水视频| 中文资源天堂在线| 我的老师免费观看完整版| 搡老岳熟女国产| 中国国产av一级| 成人无遮挡网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 嫩草影院入口| 亚洲精品久久国产高清桃花| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲乱码一区二区免费版| 床上黄色一级片| 99久国产av精品国产电影| 精品久久久久久久久久久久久| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产熟女欧美一区二区| 国产高清激情床上av| 亚洲av熟女| 国产精品久久久久久久久免| 免费一级毛片在线播放高清视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 色吧在线观看| 国产成人影院久久av| 色尼玛亚洲综合影院| 伦理电影大哥的女人| www日本黄色视频网| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 亚洲av二区三区四区| 成人av一区二区三区在线看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲不卡免费看| 免费无遮挡裸体视频| 美女大奶头视频| 欧美日韩乱码在线| 成人鲁丝片一二三区免费| 91在线观看av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久亚洲精品不卡| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲精品456在线播放app| av专区在线播放| 免费在线观看影片大全网站| 天堂动漫精品| 99在线视频只有这里精品首页| 精品久久久噜噜| 国产精品一区二区性色av| 长腿黑丝高跟| 国产人妻一区二区三区在| av专区在线播放| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久久久久午夜电影| 热99re8久久精品国产| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久热精品热| 久久久精品94久久精品| 午夜激情欧美在线| 在线播放无遮挡| 最好的美女福利视频网| 免费大片18禁| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲欧美日韩东京热| 国产一区二区在线观看日韩| 精品免费久久久久久久清纯| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲高清免费不卡视频| 天堂影院成人在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久久久九九精品影院| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 97超碰精品成人国产| 亚洲自拍偷在线| 亚洲av熟女| 精品久久久久久久久久久久久| 日本黄色视频三级网站网址| 精品午夜福利在线看| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩在线高清观看一区二区三区| 午夜影院日韩av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产乱人偷精品视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 有码 亚洲区| a级毛色黄片| 大香蕉久久网| 久久中文看片网| 国产真实乱freesex| 欧美日本视频| 一a级毛片在线观看| 插阴视频在线观看视频| 青春草视频在线免费观看| 午夜福利在线在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲美女搞黄在线观看 | 卡戴珊不雅视频在线播放| 久久综合国产亚洲精品| 欧美成人免费av一区二区三区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲18禁久久av| 少妇熟女欧美另类| 欧美激情国产日韩精品一区| 最新中文字幕久久久久| 久久久久久久午夜电影| 简卡轻食公司| 日韩大尺度精品在线看网址| 日韩精品中文字幕看吧| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 全区人妻精品视频| 一级毛片电影观看 | 99热精品在线国产| 欧美+亚洲+日韩+国产| 91在线精品国自产拍蜜月| 午夜久久久久精精品| 22中文网久久字幕| 一夜夜www| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久久综合国产亚洲精品| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲成人久久性| 观看美女的网站| 真实男女啪啪啪动态图| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 岛国在线免费视频观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 99热只有精品国产| 最近2019中文字幕mv第一页| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美在线一区亚洲| 中文字幕久久专区| 91av网一区二区| 99久国产av精品国产电影| 亚洲无线观看免费| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲av五月六月丁香网| 久久精品影院6| 99久国产av精品| 三级国产精品欧美在线观看| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品一区二区三区av网在线观看| 午夜福利18| 国内精品宾馆在线| 国产成人freesex在线 | 精品人妻一区二区三区麻豆 | 亚州av有码| 99热6这里只有精品| 伦理电影大哥的女人| 变态另类丝袜制服| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产精品综合久久久久久久免费| av视频在线观看入口| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲精品国产av成人精品 | 国产成人福利小说| 欧美高清性xxxxhd video| 日韩精品青青久久久久久| 一区二区三区免费毛片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 99热网站在线观看| 美女高潮的动态| 国产成人精品久久久久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 欧美潮喷喷水| 色综合亚洲欧美另类图片| 桃色一区二区三区在线观看| 成年女人看的毛片在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产精品野战在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 桃色一区二区三区在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 91久久精品电影网| 精品久久久久久久末码| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 深夜精品福利| 成人亚洲精品av一区二区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 插阴视频在线观看视频| 日韩国内少妇激情av| 国产一区二区激情短视频| 国产在视频线在精品| 美女大奶头视频| 三级毛片av免费| 小说图片视频综合网站| 校园人妻丝袜中文字幕| 波多野结衣巨乳人妻| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久精品人妻少妇| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品国产高清国产av| 激情 狠狠 欧美| 国产精品电影一区二区三区| 久久久久久久久大av| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 免费观看的影片在线观看| 精品福利观看| 欧美日韩乱码在线| 久久久久久久久中文| 国产亚洲91精品色在线| 又爽又黄a免费视频| www日本黄色视频网| 国产精品一二三区在线看| 国产精品综合久久久久久久免费| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品精品国产色婷婷| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲av美国av| 在线播放国产精品三级| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 午夜免费男女啪啪视频观看 | 又爽又黄a免费视频| 国产不卡一卡二| 国产精品伦人一区二区| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 午夜爱爱视频在线播放| 永久网站在线| 久久久久九九精品影院| 国产黄片美女视频| 亚洲av熟女| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 在线国产一区二区在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久久精品大字幕| 国产精品,欧美在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲国产高清在线一区二区三| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 淫秽高清视频在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 日本三级黄在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲成人精品中文字幕电影| 夜夜夜夜夜久久久久| 国产三级在线视频| 色av中文字幕| eeuss影院久久| 人妻久久中文字幕网| 美女免费视频网站| 中出人妻视频一区二区| 久久国产乱子免费精品| 欧美3d第一页| 欧美日韩在线观看h| 免费看av在线观看网站| 无遮挡黄片免费观看| 干丝袜人妻中文字幕| 色在线成人网| 成年女人毛片免费观看观看9| 日韩欧美精品v在线| 欧美3d第一页| 国产 一区精品| 亚洲av不卡在线观看| 久久精品国产自在天天线| 午夜福利成人在线免费观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国产真实伦视频高清在线观看| 成年免费大片在线观看| 亚洲自拍偷在线| 国产v大片淫在线免费观看| www日本黄色视频网| 亚洲av电影不卡..在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美高清性xxxxhd video| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲国产精品国产精品|