瑞舒伐他汀對高脂血癥病人ApoE基因型的影響

瑞舒伐他汀是他汀類藥物，對降低血脂特別是改善低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)作用具有較好的療效，因此將其應用于治療高脂血癥具有較好的效果，但不同個體之間存在明顯差異，對其進行詳細分析可得到不同個體的治療效果。通過遺傳藥理學研究，脂代謝過程相關(guān)基因多態(tài)性引起基因表達發(fā)生變化，不同病人進行他汀類藥物降脂療效存在差異[1-2]。人類載脂蛋白E(apolipoprotein E，ApoE)基因有3種等位共顯性基因，產(chǎn)生6種表型[3]。不同ApoE基因型與脂蛋白膽固醇受體結(jié)合能力差異較大，嚴重影響血脂水平。本研究探討瑞舒伐他汀對高脂血癥病人ApoE 6種基因型的療效影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2014年8月—2016年8月高脂血癥病人108例為研究對象。納入標準：通過各項檢查確診為高脂血癥病人；表現(xiàn)為高脂血癥的臨床癥狀；病人知情并簽訂知情同意書。排除標準：合并嚴重肝、腎功能損害病人；血糖未控制好的糖尿病病人；合并內(nèi)分泌失調(diào)及甲狀腺疾病病人。男64例，女44例；年齡45歲～78歲(59.9歲±10.2歲)；病程1年～10年(4.5年±0.8年)。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 所有病人均進行瑞舒伐他汀治療，瑞舒伐他汀(阿斯利康制藥有限公司分裝，國藥準字J20120006)15 mg，每日1次，4周為1個療程，連續(xù)服用3個療程。

1.2.2 血脂水平測定 病人于治療前后分別抽取空腹靜脈血5 mL，測定血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、LDL-C和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，采用化學測定法進行測定，使用全自動生化分析儀進行分析。

1.2.3 ApoE基因型的檢測 采用等位基因特異性多重PCR技術(shù)對ApoE基因進行分型檢測。序列如下[4-5]，P1：5’-GCTGAGGTGACCCTTGTCTC-3’，P2：5’-CTCCCCACCAGACCATGA-3’分別檢測基因型中158位的Cys和Arg；P3：5’-GTGGAGAT GGACGAGGTTT-3’，P4：5’-CAGCTGCCAGACATGAGAA-3’，分別檢測基因型中112位的Cys和Arg；P5：5’-CATGCGTCTTCACCTGGAA-3’，作為公共引物。首先制備電泳膠，之后按照操作要求將制備好的電泳膠放入電泳槽，同時將PCR產(chǎn)物倒入，加入緩沖液(6×Loading Buffer)，樣本混勻后放入電泳膠孔。PCR反應條件[6]：95 ℃預變性5 min ，95 ℃變性反應45 s，52 ℃條件下退火45 s，72 ℃延伸反應1.5 min，重復35個循環(huán)，72 ℃延伸反應15 min，之后進行PCR擴增，擴增后采用1.5%瓊脂糖電泳檢測擴增產(chǎn)物。控制電泳電壓100 V，將電泳膠放入凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果并照相。

2 結(jié) 果

2.1 治療前ApoE不同基因型血脂水平比較 108例基因型為E3/3病人40例， E3/2病人29例，E4/3病人39例，未檢測到E4/4，E4/2和E2/2。檢測到的病人治療前ApoE 3種基因型病人TC、LDL-C比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TG和HDL-C比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表1。

基因類型nTCTGHDL-CLDL-CE3/3406.38±0.65 3.01±0.221.02±0.024.96±0.69 E3/2295.78±0.361)3.02±0.251.01±0.024.33±0.561)E4/3396.89±0.891)2.86±0.241.02±0.025.36±0.581) 與E3/3基因型比較,1)P<0.05。

2.2 治療后ApoE不同基因型血脂水平比較 瑞舒伐他汀治療后ApoE 3種基因型病人TC、LDL-C比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TG和HDL-C比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。詳見表2。

基因類型nTCTGHDL-CLDL-CE3/3404.38±0.65 2.02±0.392.23±0.153.48±0.59 E3/2293.72±0.361)1.39±0.382.24±0.112.65±0.561)E4/3392.89±0.891)1.35±0.392.26±0.114.01±0.581) 與E3/3基因型比較,1)P<0.05。

2.3 治療后ApoE不同基因型不良反應比較 瑞舒伐他汀治療后ApoE 3種基因型病人不良反應率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表3。

表3 治療后ApoE不同基因型不良反應比較 例(%)

3 討 論

高脂血癥是一種發(fā)生于中老年人的常見代謝性疾病，屬于血脂異常類疾病[7]。該病的發(fā)生多與羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶的活性有關(guān)，HMG-CoA還原酶是一種內(nèi)源性膽固醇合成限速酶，可調(diào)節(jié)膽固醇代謝，而且HMG-CoA還原酶變化導致血脂異常，因此臨床多采用他汀類藥物治療高脂血癥病人，他汀類藥物通過抑制HMG-CoA還原酶活性，達到降低血脂TC和LDL-C水平[8]，起到治療作用。大量研究顯示，參與他汀類代謝的酶蛋白和參與脂代謝的蛋白發(fā)生基因變異，影響蛋白表達，最終導致不同病人機體對相同濃度的他汀類藥物產(chǎn)生不同反應，進而影響病人的治療效果[9-10]。為研究攜帶不同載脂蛋白基因型是否影響病人的治療效果，分析瑞舒伐他汀治療前后ApoE 3種基因型病人的血脂水平，確定ApoE不同基因型對高脂血癥病人臨床療效的影響。

本研究收集108例高脂血癥病人進行ApoE 6種基因型檢測，結(jié)果顯示基因型E3/3病人40例，E3/2病人29例，E4/3病人39例，未檢測到E4/4，E4/2和E2/2。結(jié)果顯示，治療前ApoE 3種基因型病人TC、LDL-C比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TG和HDL-C比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。治療后ApoE 3種基因型病人TC、LDL-C比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；TG和HDL-C比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，說明TC和LDL-C水平是引起高脂血癥的重要指標[11-12]。治療后E3/3、E3/2、E4/3基因型病人不良反應率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，說明不同體質(zhì)病人對藥物反應不同，基因型之間差異可能影響病人對藥物反應。不良反應方面受到E3/3、E3/2、E4/3基因型影響的研究相關(guān)報道較少，但E3/3、E3/2、E4/3基因型影響藥物治療前后血脂水平，與其他研究結(jié)果基本一致[13-15]。

攜帶ApoE不同基因型病人出現(xiàn)不同的血脂水平差異，瑞舒伐他汀治療后E3/3、E3/2、E4/3基因型TC和LDL-C水平發(fā)生明顯變化，說明ApoE的E3/3、E3/2、E4/3基因型影響瑞舒伐他汀等藥物的降脂效果，可見ApoE 3種基因型可能影響高脂血癥病人他汀類藥物降脂效果。

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