大、小葉欖仁葉小極性成分分析

呂閃閃，孫連娜，熊筱娟

(1.宜春學(xué)院化學(xué)與生物工程學(xué)院，江西，宜春 336000；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，上海 200032）

大葉欖仁(Terminalia catappa L.)是屬于使君子科(Combretaceae)欖仁屬（Terminalia）的一種植物。因其果實(shí)的形狀與欖仁相似而得名。枝葉往上成層狀分布，形似雨傘，因此又名雨傘樹。在我國廣東、廣西、海南、臺(tái)灣、福建地區(qū)也有廣泛的分布。大葉欖仁樹形態(tài)優(yōu)美，具有很好的綠化和觀賞價(jià)值，大多作為風(fēng)景樹種植。大葉欖仁葉在阿育吠陀是一個(gè)公認(rèn)的草藥，新鮮葉子的汁外敷可用來治療麻風(fēng)病和疥瘡，內(nèi)服可用于治胃痛和頭痛。果實(shí)是一種可食用的堅(jiān)果，具有重要的營養(yǎng)價(jià)值。大葉欖仁葉中含有酚類、類黃酮和類胡蘿卜素以及小極性等成分[1]，眾多藥理研究證實(shí)了該植物表現(xiàn)出抗菌[2]、抗炎[3]、抗氧化劑[4-5]、肝保護(hù)[3]和抗癌[6]性質(zhì)。大葉欖仁果實(shí)及葉子提取物具有抗糖尿病的作用[7-8]。

小葉欖仁（Terminalia mantaly.)，又稱為雨傘樹、非洲欖仁或細(xì)葉欖仁，屬于使君子科欖仁屬植物。在我國福建、廣東、廣西、香港、臺(tái)灣等地作為風(fēng)景樹栽培，資源非常豐富。通過查閱文獻(xiàn)，欖仁屬植物的相關(guān)研究很多，主要化學(xué)成分是三萜類和鞣質(zhì)類[9-12]。欖仁屬植物對(duì)心血管疾病具有一定的治療作用，小極性的三萜類化合物是其主要活性成分[13-14]。

由于大葉欖仁葉和小葉欖仁葉的化學(xué)成分的相關(guān)研究報(bào)道較少，因此本研究制備大、小葉欖仁葉的小極性部位，采用GC-MS方法分析大、小葉欖仁葉中小極性部位的化學(xué)成分，利用面積歸一法計(jì)算各化合物相對(duì)含量[15]，對(duì)比其成分和相對(duì)含量的異同，旨在為進(jìn)一步開發(fā)利用提供參考。

1 儀器和材料

1.1 儀器

Thermo DSQ Ⅱ質(zhì)譜儀，Thermo Trace GC Ultra氣相色譜儀（購自美國賽默飛世爾公司），Xcalibur工作站；ZX98-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（購自上海魯伊工貿(mào)有限公司）；SHB-Ⅲ循環(huán)真空泵（購自鄭州長城科學(xué)工貿(mào)有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（購自上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司）；JT3101N電子精密天平（購自上海精天科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 試劑

乙醇（分析純）、二氯甲烷（分析純）、甲醇（分析純），提取分離用水為蒸餾水，分析用水為娃哈哈純凈水。

1.3 植物原料

大、小葉欖仁葉，2016年10月采集自福建省福州市，經(jīng)由第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定學(xué)教研室孫連娜副教授鑒定為使君子科(Combretaceae)欖仁屬（Terminalia）植物大葉欖仁(Terminalia catappaL.)和小葉欖仁（Terminalia mantaly.)的干燥葉。

2 方法和結(jié)果

2.1 供試品的準(zhǔn)備

大、小欖仁葉葉干燥藥材采用相同的方法分別處理，使用藥材量的15倍的 80%乙醇冷浸提取 3次，提取液合并后減壓濃縮至浸膏狀。加水混懸，采用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取極性由小到大依次萃取，采用減壓旋蒸濃縮萃取液，得到二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位四個(gè)萃取部位。二氯甲烷部位樣品和硅膠粉 1：1拌樣，使用十倍量的硅膠粉減壓裝柱，以石油醚-乙酸乙酯（50:1,30:1,15:1,7:1,5:1,3:1,1:1,0:1）梯度洗脫，得到的50:1部位采用GC-MS法進(jìn)行成分鑒定。

2.2 GC-MS測(cè)試條件及方法

色譜條件：色譜柱：HP-1MS石英毛細(xì)管色譜柱30 m×0.32 mm×0.25 μm；程序升溫條件：起始溫度100 ℃，以每分鐘20 ℃升溫至160 ℃，保持時(shí)間8 min，然后以每分鐘10 ℃升溫到300 ℃，保持時(shí)間15 min；進(jìn)樣口的溫度為250 ℃，分流比為10:1，進(jìn)樣量1μL，流速1.0 mL/min；載氣為高純氮?dú)狻?/p>

質(zhì)譜條件：電離方式EI，電離能量70 eV，傳輸線溫度為250 ℃，離子源溫度200 ℃，掃描質(zhì)量范圍30～550。

2.3 樣品測(cè)定

用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析鑒定大、小葉欖仁葉的小極性部位樣品。通過G1701BA化學(xué)工作站的數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，運(yùn)用NIST98譜圖庫進(jìn)行檢索，并分別與八峰索引和EPA/NIH質(zhì)譜圖集的標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對(duì)照、復(fù)核，再結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行人工解析，確定大、小葉欖仁葉小極性中各個(gè)化學(xué)成分。采用峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，分別求得各化學(xué)成分在大、小葉欖仁葉中的相對(duì)百分含量。大葉欖仁葉小極性成分總離子見圖1，化學(xué)成分及相對(duì)含量結(jié)果見表1；小葉欖仁葉小極性成分總離子見圖2，化學(xué)成分及相對(duì)含量結(jié)果見表2。

圖1 大葉欖仁葉小極性成分總離子Fig.1 Small polar components total ion map of Terminalia catappa L. Leaves

圖2 小葉欖仁葉小極性成分總離子Fig.2 Small polar components total ion map of Terminalia mantaly Leaves

表1 大葉欖仁葉小極性成分化合物及含量Table 1 Small polar compounds and contents of Terminalia catappa L. Leaves

表2 小葉欖仁葉小極性成分化合物及含量Table 2 Small polar compounds and contents of Terminalia mantaly Leaves

3 討論

對(duì)大葉欖仁葉中小極性成分進(jìn)行 GC-MS 分析，共鑒定出 41個(gè)化合物；利用面積歸一法計(jì)算各化合物相對(duì)含量，已鑒定化合物含量占總體的87.04%，主要為脂類33.81%、萜類32.21%、芳香族13.26%、烷烴類4.36%。含量最高的成分為植醇，占總量的25.42%；其次為9,12,15-十八碳三烯酸甲酯、十六碳烯酸乙酯和1 -乙基- 3 -甲基苯，分別占15.59%、13.34%、9.40%。據(jù)報(bào)道，萜類化合物中的羽扇豆醇具有抗炎、抗菌、抗瘧疾、抗腫瘤等多種藥理作用[16]。實(shí)驗(yàn)表明羽扇豆醇對(duì)乳腺癌、前列腺癌等多種腫瘤細(xì)胞具有明顯的抑制活性[17]。芳香族的維生素E具有抗氧化的作用。

對(duì)小葉欖仁葉中小極性成分進(jìn)行 GC-MS 分析，共鑒定出 42個(gè)化合物；利用面積歸一法計(jì)算各化合物相對(duì)含量，已鑒定化合物含量占總體的91.12%，主要為脂類63.9%、烷烴類12.38%、萜類9.54%，芳香族3.9%。含量最高的成分為棕櫚酸乙酯，占總量的20.58%；其次為亞麻酸乙酯、亞油酸乙酯、角鯊烯和花生酸乙酯，分別占 18.42%、14.71%、8.24%和6.91%。其中，萜類化合物中的β-廣藿香烯具有抗炎活性[18]，木栓酮具有抗炎、抗腫瘤活性及抑制真菌生長的作用[19]，角鯊烯具有抗氧化[20]、抗癌[21]、降膽固醇[22]、解毒[23]等多種生理功能。芳香族中的生育酚具有抗氧化作用。

大、小葉欖仁葉中小極性成分進(jìn)行的 GC-MS分析結(jié)果對(duì)比可知大、小葉欖仁中含量最高的一類化合物都是脂類，但是小葉欖仁葉中脂類化合物含量遠(yuǎn)高于大葉欖仁葉。大葉欖仁葉中含有較高的萜類化合物，其中植醇含量最高。二者中的成分差異較大，相同的化合物只有烷烴類的二十烷和二萜植醇，二者中均含有具有抗炎、抗腫瘤、抗氧化等多種活性的一些萜類化合物。因此，大葉欖仁葉和小葉欖仁葉具有較好的開發(fā)價(jià)值，各自都具有它的優(yōu)勢(shì)成分，值得后續(xù)進(jìn)一步的分離。

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