廣西沿海四種紅樹(shù)植物抗腫瘤活性的篩選

譚德超 羅花 鄧家剛 郝二偉 易湘茜 馮小慧 韋林垚 夏中尚 徐煒杰 謝金玲 侯小濤

摘 要：該研究采用超聲提取法，得到紅海欖的葉、秋茄的莖和葉、水黃皮的葉和桐花樹(shù)的莖的95%乙醇提取物，并用MTS法檢測(cè)提取物對(duì)前列腺癌DU145、PC3細(xì)胞增殖抑制效果，結(jié)果桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物對(duì)DU145細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)，對(duì)DU145干預(yù)24、48、72 h的IC50分別為75.23、88.81、76.53 μg·mL-1。在此基礎(chǔ)上，依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇對(duì)桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物進(jìn)行梯度萃取，得到不同極性部位后選擇桐花樹(shù)莖乙酸乙酯部位（EACS）對(duì)19種腫瘤細(xì)胞（HT-29，SW480，DLD-1，COLO205，PC3，DU145，SKOV3-S，A2780，SGC-7901，Tca-8113，MDA-MB-231，HepG2，SMMC-7721，Bel-7402，MHCC-97H，Hela，PANC-1，EJ，A549）和3種正常細(xì)胞（HUVEC，EC304，RWPE-1）進(jìn)行MTS實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其抗增殖作用，用集落形成進(jìn)一步檢測(cè)EACS對(duì)細(xì)胞HT-29、DLD-1、SW480、DU145、PC3、SKOV3-S的增殖影響。結(jié)果表明：EACS對(duì)16個(gè)腫瘤細(xì)胞和3個(gè)正常細(xì)胞均具有不同程度的增殖抑制作用，其中對(duì)RWPE-1的增殖抑制作用最強(qiáng)，藥物作用72 h后的IC50為22.78 μg·mL-1;EACS對(duì)細(xì)胞HT-29、DLD-1、SW480、DU145、PC3、SKOV3-S的集落形成均具有抑制作用，抑制作用強(qiáng)度與濃度成正相關(guān)關(guān)系。

關(guān)鍵詞：紅樹(shù)植物，抗腫瘤活性，篩選，MTS，集落形成

中圖分類(lèi)號(hào)：R932

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1000-3142（2018）10-1267-10

Abstract：Ninety-five percent of? ethanol extracts from the leaves of Rhizophora stylosa，stems and leaves of Kandelia candel，leaves of Pongamia pinnata and stems of Aegiceras corniculatum were extracted by ultrasonic extraction method. The cytotoxicity of 95% ethanol extracts from these four mangrove plants on prostate cancer cells DU145 with 24，48 and 72 h and PC3 were tested by MTS assay. The results showed that the anti-proliferation on prostate cancer cell DU145 of 95% ethanol extract of A. corniculatum stems was the strongest among the tested samples with IC50 value of 75.23，88.81 and 76.53 μg·mL-1 to DU145，respectively. On this basis，the ethanol extract of A. corniculatum stems was successively treated with petroleum ether，ethyl acetate and n-butanol to yield four fractions ，then the ethyl acetate fraction of A. corniculatum stems（EACS） were tested for anticancer activities against nineteen tumor cells（HT-29，SW480，DLD-1，COLO205，PC3，DU145，SKOV3-S，A2780，SGC-7901，Tca-8113，MDA-MB-231，HepG2，SMMC-7721，Bel-7402，MHCC-97H，Hela，PANC-1，EJ，A549） and antiproliferative effects of three normal cells（HUVEC，EC304，RWPE-1） by MTS assay，the effects of EACS on proliferation of HT-29，DLD-1，SW480，DU145，PC3 and SKOV3-S cells were detected by the colony formation assay. The results showed that EACS exhibited different degrees of inhibitory effect on proliferation of sixteen tumor cells and three normal cells，and had the stronger inhibitory effect on the proliferation of RWPE-1 with IC50 value of 22.78 μg·mL-1 after 72 h drug treatment. EACS inhibited the colony formations of HT-29，DLD-1，SW480，DU145，PC3 and SKOV3-S cells in a dose-dependent manner.

Key words：mangrove plants，antitumor activity，screening，MTS，colony formation

腫瘤是目前世界上發(fā)病率及致死率高的疾病之一。2012年全球腫瘤新增病例約有1 410萬(wàn)，死亡病例有820萬(wàn);欠發(fā)展國(guó)家的新增病例占57%，死亡病例占65%（Torre et al，2015）。中國(guó)2015年的癌癥新發(fā)病例達(dá)429萬(wàn)，死亡病例281萬(wàn)（Chen et al，2016）;中國(guó)癌癥發(fā)病占全球癌癥發(fā)病的21.8%，癌癥死亡占全球的26.9%，發(fā)病率處于世界癌癥平均發(fā)病水平，但死亡率相對(duì)較高（高婷等，2016）。目前臨床上治療腫瘤的藥物種類(lèi)及數(shù)量較多，但多數(shù)藥物均具有惡心、嘔吐等毒副作用從而限制了其使用范圍。因此，尋找有效低毒的新型抗腫瘤藥物是極為迫切的。

藥物的傳統(tǒng)來(lái)源是陸生植物或微生物的天然產(chǎn)物，尤其是次生代謝產(chǎn)物，如阿司匹林、青霉素、嗎啡的發(fā)現(xiàn)。在腫瘤領(lǐng)域的臨床用藥至少60%是天然藥物來(lái)源（Das et al，2015），如多柔比星、紫杉醇。相對(duì)陸生植物資源的藥用研究，海洋生態(tài)系統(tǒng)相當(dāng)于藥用研究領(lǐng)域的新大陸，且與陸地生態(tài)系統(tǒng)差異顯著，有望從豐富的資源中分離出化學(xué)結(jié)構(gòu)多樣的活性成分（Molinski et al，2009）。紅樹(shù)植物生長(zhǎng)于熱帶和亞熱帶沿海潮間帶（Mercer & Hamilton，1984），是海洋生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分。高鹽、高溫、潮濕、強(qiáng)風(fēng)等潮間帶環(huán)境，迫使紅樹(shù)植物通過(guò)合成新穎的次生代謝產(chǎn)物來(lái)保護(hù)自身（Scholander et al，1962;Zhang et al，2007）。環(huán)境的特殊性使紅樹(shù)植物相對(duì)于其他陸生植物更易產(chǎn)生一些結(jié)構(gòu)新穎的生物活性成分，從中找到新藥先導(dǎo)化合物的可能性極大。此外，紅樹(shù)植物在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中應(yīng)用廣泛，可用于治療腫瘤、糖尿病、麻風(fēng)病、眼病、肝炎等病癥（Bandaranayake，1998）。基于生理特異性和傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)應(yīng)用，紅樹(shù)植物是值得應(yīng)用現(xiàn)代醫(yī)藥技術(shù)進(jìn)行深入研究的。

現(xiàn)代研究表明紅樹(shù)植物中的主要化合物有脂肪族醇、氨基酸、多不飽和脂肪酸、萜類(lèi)、黃酮類(lèi)、生物堿類(lèi)、醌類(lèi)、木脂素類(lèi)、甾醇類(lèi)、鞣質(zhì)、雜環(huán)化合物等，并具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗高血壓、抗炎、抗氧化、蟲(chóng)魚(yú)毒性等生物活性（Bandaranayake，2002;Patra & Thatoi，2011;楊維等，2011）。近年來(lái)，紅樹(shù)植物的抗腫瘤研究證明其具有廣泛的抗腫瘤活性，并從中分離出眾多具有抗腫瘤活性的成分（Das et al，2015），如桐花樹(shù)果甲醇提取物對(duì)VERO、NIH3T3、AGS、HT-29、MCF-7、MDA-MB-231具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，IC50在0.000 5～0.998 mg·mL-1之間（Akter et al，2014）。從桐花樹(shù)中分離出具有抗腫瘤活性的aegicoroside A、sakurasosaponin、sakurasos-aponin methyl ester（Vinh et al，2017）、5-氧-乙基信筒子醌、5-氧-甲基信筒子醌（徐岷涓等，2008）和Embelin及其洐生物（Thota et al，2016;李勇，2010）。此外，還從木果楝（Xylocarpus granatum）中分離出具有抗腫瘤活性的xylogranatin A、xylogranatin B、xylogranatin C、xylogranatin D（Yin et al，2006）等。但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，目前對(duì)于桐花樹(shù)抗腫瘤作用的系統(tǒng)研究偏少，對(duì)其抗腫瘤作用的機(jī)理及活性成分研究仍有待深入?？偟膩?lái)說(shuō)，紅樹(shù)植物仍是一類(lèi)資源豐富但藥物開(kāi)發(fā)研究相對(duì)較少的物種（Kathiresan et al，2006;Harshad，2016）。應(yīng)當(dāng)在現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)上開(kāi)展更深入的研究，以期從中分離出更多具有生物活性的天然化合物及開(kāi)發(fā)出優(yōu)于當(dāng)前臨床治療腫瘤的藥物。本研究對(duì)廣西沿海的四種紅樹(shù)植物進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)來(lái)評(píng)價(jià)它們對(duì)前列腺癌細(xì)胞DU145、PC3的增殖抑制作用，并進(jìn)一步選擇作用較強(qiáng)的桐花樹(shù)進(jìn)行體外抗腫瘤活性評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑、耗材和儀器

四種紅樹(shù)植物：紅海欖（109°40′03.3″ E，21°32′11.8″ N）、水黃皮（109°39′58.4″ E，21°32′04.9″ N）、秋茄（109°40′05.2″ E，21°32′14.3″ N），2016年7月采自廣西北海市合浦縣山口國(guó)家級(jí)紅樹(shù)林生態(tài)自然保護(hù)區(qū);桐花樹(shù)（108°03′49.7″ E ，21°32′06.7″ N），2016年7月采自廣西防城港市北侖河口紅樹(shù)林保護(hù)區(qū)。由廣西中醫(yī)藥大學(xué)韋松基教授分別鑒定為紅海欖（Rhizophora stylosa）的成熟葉及嫩葉，水黃皮（Pongamia pinnata）的成熟葉及嫩葉，秋茄（Kandelia candel）的莖和葉（成熟葉及嫩葉），桐花樹(shù)（Aegiceras corniculatum）的莖。干燥標(biāo)本保存于廣西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥效研究重點(diǎn)研究室中。

細(xì)胞系：人結(jié)直腸癌細(xì)胞 HT-29，SW480，DLD-1，COLO205; 人前列腺癌細(xì)胞 PC3，DU145; 人卵巢癌細(xì)胞 SKOV3-S，A2780; 人胃癌細(xì)胞 SGC-7901; 人舌癌細(xì)胞 Tca-8113;人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231; 人肝癌細(xì)胞 HepG2，SMMC-7721，Bel-7402，MHCC-97H; 人宮頸癌細(xì)胞 Hela; 人胰腺癌細(xì)胞 PANC-1; 人膀胱癌細(xì)胞 EJ; 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 A549; 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 HUVEC; 人血管內(nèi)皮細(xì)胞 EC304; 人正常前列腺上皮細(xì)胞 RWPE-1。

試劑：95%乙醇（批號(hào)為2016070601，廠家為成都科龍化工試劑廠）、乙酸乙酯（批號(hào)為2016090601，廠家為成都科龍化工試劑廠）、正丁醇（批號(hào)為2016092201，廠家為成都科龍化工試劑廠）、石油醚（批號(hào)為2016060101，廠家為成都科龍化工試劑廠）、水溶性甲臢鹽 MTS（批號(hào)為219904，廠家為Promega）、培養(yǎng)基RPMI 1640（批號(hào)為350006026，廠家為WISENT）、DMEM（批號(hào)為20170315，廠家為江蘇凱基）、 L15（批號(hào)為161109，廠家為江蘇凱基）、 McCoYs 5A（批號(hào)為20170407，廠家為江蘇凱基）、 MEM（批號(hào)為161227，廠家為江蘇凱基）、F12K（批號(hào)為319085020，廠家為WISENT）、胎牛血清 FBS（批號(hào)為1739463，廠家為Gibco）、青霉素/鏈霉素雙抗溶液（批號(hào)為1864844，廠家為Gibco）、胰酶0.25% Trypsin-EDTA（批號(hào)為1859509，廠家為Gibco）、平衡鹽溶液D-PBS（批號(hào)為311425016，廠家為WISENT），DMSO（批號(hào)為1029B033，廠家為Solarbio）。

耗材：96孔板（批號(hào)為3599，廠家為Corning）、5 mL移液管（批號(hào)為4487，廠家為Corning）、10 mL移液管（批號(hào)為4488，廠家為Corning）、15 mL離心管（批號(hào)為430791，廠家為Corning）、50 mL離心管（批號(hào)為430829，廠家為Corning）。

儀器：顯微鏡（型號(hào)為ECLIPSE TS100-F，廠家為Nikon）、生物安全柜（型號(hào)為1389，廠家為T(mén)hermo）、酶標(biāo)儀（型號(hào)為Multiskan，廠家為T(mén)hermo）、掃描儀（型號(hào)為9000F，廠家為Canon）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞分別接種在含有10% 胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、100 μg·mL-1鏈霉素的相應(yīng)培養(yǎng)基中，于37 ℃，5% CO2恒溫孵箱中培養(yǎng)。不完全培養(yǎng)基及相應(yīng)的細(xì)胞系依次為RPMI 1640（PC3，DU145，Bel-7402，DLD-1，EJ，SGC-7901，SMMC-7721，Tca-8113，COLO205，EC304）、DMEM（A2780，PANC-1，HUVEC，MHCC-97H）、L15（MDA-MB-231，SW480）、McCoYs 5A（HT-29，SKOV3-S）、MEM（HepG2，Hela）、Keratinocyte-SFM（RWPE）和F12K（A549）。

1.2.2 樣品的制備 將紅樹(shù)植物曬干，分揀莖、葉，粉碎后分別用95%乙醇超聲提取1 h，濾過(guò)后用冷凍真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙醇（低于60 ℃），濃縮至無(wú)醇味，60 ℃水浴干燥即得95%乙醇提取物。桐花樹(shù)莖的95%乙醇提取液在濃縮至無(wú)醇味后，依次進(jìn)行石油醚、乙酸乙酯、正丁醇的萃取，萃取物濃縮干燥得桐花樹(shù)莖不同極性部位。取以上的95%乙醇提取物和桐花樹(shù)莖乙酸乙酯部位（EACS）進(jìn)行腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性篩選。將提取物溶解于DMSO中，配成100 mg·mL-1的儲(chǔ)備液，提取物不易溶解時(shí)，置于超聲儀超聲溶解，并用0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾后分裝于EP管，保存于-20 ℃。

1.2.3 體外腫瘤細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)（MTS法） 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞種植在96孔板中，每孔2 000個(gè)細(xì)胞，每組設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，置于37 ℃，5% CO2恒溫孵箱中過(guò)夜貼壁后給藥。95%乙醇提取物給藥梯度各不同，EACS設(shè)5個(gè)給藥梯度組（50.0、75.0、100.0、150.0、200 μg·mL-1），每組給藥組分別設(shè)置相應(yīng)的藥物顏色扣除孔，以及培養(yǎng)液對(duì)照組、DMSO對(duì)照組，設(shè)置3塊板，分別進(jìn)行24、48、72 h的檢測(cè)。給藥后置于37 ℃，5% CO2恒溫孵箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。分別在培養(yǎng)24、48、72 h后，每孔加入20 μL完全融化后的Cell Titer 96 Aqueous One Solution Reagent，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2 h，于酶標(biāo)儀上在490 nm波光處讀取吸光度值。細(xì)胞活力=藥物干預(yù)組/對(duì)照組×100%。用GraphPad Prism 5作折線圖，用SPSS 21計(jì)算IC50。

1.2.4 集落形成實(shí)驗(yàn) 將細(xì)胞以每個(gè)孔400個(gè)的密度均勻地鋪于6孔板中，24 h之后給予藥物EACS（12.5、25 μg·mL-1）干預(yù)，并設(shè)置對(duì)照組。4 d后換一次液，新的液體分別為完全培養(yǎng)基、相同濃度的藥物組，8 d后終止克隆形成。將6孔板從培養(yǎng)箱中取出并吸走液體，用D-PBS緩沖液清洗兩遍后用4%的多聚甲醛固定20 min，吸走4%多聚甲醛后用結(jié)晶紫染色液染色18 min。吸走結(jié)晶紫并用D-PBS清洗干凈，將6孔板用掃描儀掃描?？寺⌒纬陕?克隆形成數(shù)/種板細(xì)胞數(shù)×100%。

2 結(jié)果與分析

2.1 四種廣西沿海紅樹(shù)植物對(duì)人前列腺癌細(xì)胞DU145、PC3的抑制作用

細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)表明，除了紅海欖，秋茄、桐花樹(shù)、水黃皮的95%乙醇提取物對(duì)人前列腺癌DU145、PC3增殖均表現(xiàn)出一定的抑制作用，且抑制作用隨著藥物濃度的增加而增強(qiáng)，呈量效關(guān)系。秋茄莖95%乙醇提取物對(duì)DU145、PC3細(xì)胞增殖抑制效果在作用了72 h時(shí)最強(qiáng)，IC50分別為81.48、97.77 μg·mL-1;秋茄葉95%乙醇提取物抑制DU145、PC3細(xì)胞的增殖也是在72 h時(shí)最強(qiáng)，IC50分別為93.21、59.75 μg·mL-1。桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物對(duì)DU145細(xì)胞增殖抑制作用在24 h時(shí)最強(qiáng)，IC50為75.23 μg·mL-1;而對(duì)PC3細(xì)胞增殖抑制作用則是在48 h時(shí)最強(qiáng)，IC50為97.13 μg·mL-1。水黃皮葉95%乙醇提取物對(duì)DU145、PC3細(xì)胞增殖抑制作用均在72 h時(shí)最強(qiáng)，IC50分別為170.57、184.82 μg·mL-1。結(jié)果見(jiàn)圖1和表1。

在藥物干預(yù)了48、72 h時(shí)，均是桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物對(duì)DU145細(xì)胞增殖抑制作用的IC50最小，表明其對(duì)DU145細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)。

2.2 EACS對(duì)19種人腫瘤細(xì)胞和3種人正常細(xì)胞的抑制作用

EACS對(duì)19種人腫瘤細(xì)胞和3種人正常細(xì)胞中的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，EACS在藥液濃度50～200 μg·mL-1的范圍內(nèi)對(duì)人肝癌細(xì)胞MHCC-97H、SMMC-7721和人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549無(wú)明顯細(xì)胞毒性，而對(duì)其他16種腫瘤細(xì)胞和3個(gè)正常細(xì)胞均具有不同程度的增殖抑制效果，抑制作用隨著濃度的增加而增強(qiáng)，呈量效關(guān)系。結(jié)果見(jiàn)圖2和表2。

以藥物作用48和72 h的IC50為參照，在16個(gè)腫瘤細(xì)胞中，EACS對(duì)結(jié)直腸癌COLO205細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)，IC50分別為83.51、117.03 μg·mL-1;其次是結(jié)直腸癌DLD-1細(xì)胞，細(xì)胞增殖抑制作用的IC50分別為142.45、146.28 μg·mL-1。EACS對(duì)3個(gè)正常細(xì)胞的增殖也具有抑制作用，對(duì)HUVEC、EC304、RWPE-1細(xì)胞增殖抑制作用依次增強(qiáng);在EACS干預(yù)48、72 h時(shí)，RWPE-1細(xì)胞增殖抑制作用的IC50分別為87.64、22.78 μg·mL-1。由此可見(jiàn)，EACS對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用不具有選擇特異性，不能區(qū)分腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞。若進(jìn)一步對(duì)EACS進(jìn)行分離，得到的細(xì)胞增殖抑制作用活性成分，可考慮化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾，以期從中得到具有選擇特異性的抗腫瘤活性成分。

EACS干預(yù)DU145細(xì)胞，在24、48和72 h時(shí)，細(xì)胞增殖抑制作用的IC50分別是144.36、166.02和158.64 μg·mL-1;EACS干預(yù)PC3細(xì)胞，在24、48和72 h時(shí)，抑制增殖的IC50分別是357.51、219.81和203.81 μg·mL-1。以上6個(gè)值均比桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物對(duì)DU145、PC3細(xì)胞增殖抑制作用的IC50大，說(shuō)明桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物對(duì)前列腺癌DU145、PC3細(xì)胞增殖抑制作用的活性成分不富集在EACS上，而在石油萃取物或者正丁醇萃取物中。

2.3 EACS對(duì)HT-29、DLD-1、SW480、DU145、PC3細(xì)胞集落形成的影響

EACS對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞HT-29、DLD-1、SW480的集落形成干預(yù)效果見(jiàn)圖3，對(duì)人前列腺癌細(xì)胞DU145、PC3及人卵巢癌細(xì)胞SKOV3-S的集落形成干預(yù)效果見(jiàn)圖4。通過(guò)克隆形成實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步證實(shí)了EACS對(duì)細(xì)胞HT-29、DLD-1、SW480、DU145、PC3、SKOV3-S的增殖抑制作用。如圖3和圖4所示，EACS對(duì)這6種細(xì)胞的克隆形成的抑制作用強(qiáng)度與濃度成正相關(guān)關(guān)系，藥物濃度越高，抑制作用越強(qiáng)。在與對(duì)照組比較的情況下，EACS對(duì)SW480的克隆形成無(wú)明顯的抑制效果，而對(duì)其他5種細(xì)胞的克隆形成的抑制效果較強(qiáng)，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

在12.5 μg·mL-1的EACS干預(yù)下，DU145細(xì)胞克隆形成數(shù)與空白對(duì)照組比較，差異具有極顯著意義（P < 0.01）;而DLD-1、PC3、SKOV3-S細(xì)胞克隆形成數(shù)與對(duì)照組比較，差異在濃度為25.0 μg·mL-1時(shí)才具有極顯著意義（P < 0.01）。在25.0 μg·mL-1 EACS干預(yù)下，HT-29細(xì)胞克隆形成數(shù)與對(duì)照組比較，差異具有顯著意義（P < 0.05）。

3 討論與結(jié)論

惡性腫瘤是目前世界上僅次于心血管疾病的第二大致死疾病。盡管現(xiàn)在有許多可應(yīng)用于治療惡性腫瘤的藥物，但是這些藥物往往會(huì)產(chǎn)生副作用。紅樹(shù)植物歷來(lái)被人們用來(lái)治療各種疾病，其中就包括治療腫瘤。紅樹(shù)林植物生長(zhǎng)于陸地與海洋的交界處，環(huán)境的特殊性使得紅樹(shù)植物易于產(chǎn)生新穎的次生代謝產(chǎn)物。目前為止，研究者發(fā)現(xiàn)多種紅樹(shù)植物具有抗腫瘤作用，并從中分離出了多種具有抗腫瘤活性的化學(xué)成分（韋林垚等，2018）。

紅樹(shù)植物的提取物或者從中分離出來(lái)的活性成分，它們的抗腫瘤機(jī)理各不相同，主要有阻滯細(xì)胞周期、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲、抑制腫瘤血管生成等。從桐花樹(shù)中分離出的抗腫瘤活性成分5-氧-乙基信筒子醌和5-氧-甲基信筒子醌阻斷腫瘤細(xì)胞周期在G0/G1期，并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡來(lái)抗腫瘤（徐岷涓等，2008）;從紅海欖中分離出的環(huán)木菠蘿苷可激活腫瘤細(xì)胞的Caspase-3和Capase7，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡（Huong et al，2014）;從白骨壤中分離出來(lái)的naphtho[1，2-b]sdfghijufuran-4，5-dione通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路抑制MDA-MB-231細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲（Hsieh et al，2013）;小花老鼠簕的提取物可抑制VEGF的表達(dá)，從而抑制腫瘤血管生成（Mahasiripanth et al，2012）。通過(guò)文獻(xiàn)檢索發(fā)現(xiàn)，多種紅樹(shù)植物具有抗腫瘤活性，并且機(jī)理多種多樣。此外，紅樹(shù)植物的抗腫瘤活性具有一定腫瘤選擇性，如從紅海欖葉中提取出來(lái)的環(huán)木菠蘿苷對(duì)扁平上皮癌KB細(xì)胞、肺腺癌LU-1細(xì)胞、黑色素瘤SK-Mel-2細(xì)胞均具有顯著的細(xì)胞毒性作用（Huong et al，2014），但在本研究中，紅海欖葉95%乙醇提取物對(duì)前列腺癌DU145、PC3細(xì)胞無(wú)明顯細(xì)胞毒性。同一種紅樹(shù)植物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞增殖抑制作用不同，提示對(duì)同一紅樹(shù)植物提取物或者從中分離出來(lái)的抗腫瘤活性成分進(jìn)行擴(kuò)大腫瘤細(xì)胞系篩選是很有必要的。同時(shí)，要對(duì)篩選出的抗腫瘤活性成分進(jìn)行進(jìn)一步的抗腫瘤機(jī)理研究。

本研究中，通過(guò)對(duì)紅海欖、秋茄、水黃皮、桐花樹(shù)不同部位的95%乙醇提取物抗腫瘤活性的篩選，發(fā)現(xiàn)桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物對(duì)DU145細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)。紅海欖葉95%乙醇提取物對(duì)前列腺癌DU145、PC3細(xì)胞增殖抑制作用的IC50大于800 μg·mL-1，推斷其對(duì)前列腺癌DU145、PC3細(xì)胞不具有抗腫瘤活性。進(jìn)一步對(duì)桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物進(jìn)行分離，并選擇了乙酸乙酯萃取物進(jìn)行多種腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性篩選，結(jié)果表明EACS對(duì)多種腫瘤細(xì)胞具有一定增殖抑制作用，但具有一定的選擇性，對(duì)MHCC-97H、SMMC-7721、A549細(xì)胞增殖無(wú)明顯抑制作用。EACS對(duì)DU145、PC3細(xì)胞增殖抑制作用比桐花樹(shù)莖95%乙醇提取物小，表明在石油醚或者正丁醇萃取物中具有抗腫瘤作用更強(qiáng)的活性成分，應(yīng)進(jìn)一步研究桐花樹(shù)莖石油醚、正丁醇萃取物的抗腫瘤活性。MTS實(shí)驗(yàn)中，EACS在48、72 h的干預(yù)下對(duì)結(jié)腸癌COLO205細(xì)胞增殖抑制作用最強(qiáng)，但因COLO205是半懸浮細(xì)胞，不利于進(jìn)行集落形成實(shí)驗(yàn)，所以在集落形成實(shí)驗(yàn)中選擇了細(xì)胞增殖抑制作用僅次于COLO205的DLD-1細(xì)胞及其同一腫瘤系的HT-29和SW480;此外還選擇了乙醇提取物初篩抗腫瘤活性的前列腺癌DU145、PC3細(xì)胞。

通過(guò)對(duì)紅海欖、秋茄、水黃皮、桐花樹(shù)等廣西四種紅樹(shù)植物抗腫瘤活性進(jìn)行篩選研究，發(fā)現(xiàn)秋茄、水黃皮、桐花樹(shù)均具有不同程度的抗腫瘤活性，其中桐花樹(shù)的抗腫瘤活性最強(qiáng)。桐花樹(shù)乙醇提取物的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（MTS）和EACS的細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)及集落形成實(shí)驗(yàn)，說(shuō)明桐花樹(shù)具有顯著的抗腫瘤活性，并為進(jìn)一步明確桐花樹(shù)的抗腫瘤活性部位，從中發(fā)現(xiàn)活性成分提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。后期可以該抗腫瘤活性篩選實(shí)驗(yàn)為指導(dǎo)，針對(duì)性研究具有抗腫瘤活性紅樹(shù)植物的化學(xué)成分，以期發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)新穎、療效顯著的天然抗腫瘤藥物。