超聲預(yù)處理輔助酶解玉米胚芽 ACE抑制肽的研究

王 珂,馬海樂,李 景,熊 建,劉 瀟

(江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院,江蘇鎮(zhèn)江 212013)

玉米胚芽粕是玉米胚芽經(jīng)過壓榨法或浸出法提取油脂后得到的殘?jiān)?其主要營(yíng)養(yǎng)成分為玉米胚芽蛋白,是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)資源[1]。目前,玉米胚芽粕主要用作動(dòng)物飼料,未能實(shí)現(xiàn)資源高值化利用。研究表明,玉米胚芽蛋白經(jīng)蛋白酶酶解的產(chǎn)物玉米胚芽肽,具有抗氧化、降血壓等功效[2-4],其中對(duì)抗氧化功能的研究較為充分,而降血壓功能還處于初步探索階段,故本實(shí)驗(yàn)主要研究玉米胚芽肽的降血壓活性。傳統(tǒng)酶解法制備生物活性肽存在一些弊端,如酶解效率低、酶解時(shí)間長(zhǎng)、酶的利用率低等[5]。近年來,超聲波技術(shù)在蛋白酶解領(lǐng)域有較好的應(yīng)用前景,具有提高蛋白轉(zhuǎn)化率、提高產(chǎn)物活性、縮短蛋白質(zhì)的酶解時(shí)間[6-10]等優(yōu)勢(shì)。但由于實(shí)驗(yàn)條件的限制,超聲波設(shè)備常局限于超聲波洗槽和超聲細(xì)胞破碎儀等,工作模式較為單一,無法在優(yōu)化超聲工作模式的基礎(chǔ)上再進(jìn)行超聲參數(shù)的選擇,從而難以達(dá)到理想的效果。

本研究使用的是自主研發(fā)的雙頻逆流聚能式和三頻發(fā)散式超聲設(shè)備,有多種頻率組合可供選擇,雙頻逆流聚能式超聲屬于探頭式超聲,超聲能量比較集中;三頻發(fā)散式超聲屬于平板式超聲,超聲能量平均分散分布。雙頻或三頻組合預(yù)處理原料蛋白后,能促進(jìn)蛋白的酶解,有利于ACE抑制肽的制備。

目前,酶解法制備ACE抑制肽的指標(biāo)大多為上清液多肽的ACE抑制率和水解度,而超聲預(yù)處理對(duì)許多原料蛋白的水解度沒有顯著影響,如玉米醇溶蛋白[7]、谷朊蛋白[11]、麥胚蛋白[12-13]、大米蛋白[14]等,且ACE抑制率主要與上清液多肽濃度和多肽ACE抑制活性有關(guān),多肽ACE抑制活性又與肽的分子量區(qū)間密切相關(guān),所以本研究選取蛋白轉(zhuǎn)化率與高活性肽占比為指標(biāo),能更好的反映出酶解效果,即酶解的產(chǎn)量和產(chǎn)物活性,若擴(kuò)大到工業(yè)生產(chǎn)中,也更加符合企業(yè)的生產(chǎn)要求。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

玉米胚芽粕(自測(cè),蛋白含量18.93%) 山東三星玉米產(chǎn)業(yè)科技有限公司;血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE) 自提[15];呋喃丙烯酰三肽(FAPGG)、HEPES(4-羥乙基哌嗪乙磺酸) Sigma公司;色譜純甲醇、乙腈 Tedia公司;堿性蛋白酶(酶活1.89×105U/mL) 南京誠(chéng)納化工有限公司;其他試劑 均為國(guó)產(chǎn)分析純。

雙頻逆流聚能式超聲設(shè)備逆流超聲波設(shè)備、發(fā)散三頻超聲設(shè)備 江蘇大學(xué)自主研發(fā);對(duì)振雙頻超聲設(shè)備 美國(guó)先聲科技有限公司;Pellicon小型超濾系統(tǒng) 美國(guó)Millipore公司;Card-Waters1525型高效液相色譜系統(tǒng) 美國(guó)Waters公司;Infinite 200 PRO多功能酶標(biāo)儀 瑞士Tecan公司;PHS-3C酸度計(jì) 海鴻蓋儀器有限公司;BT600S型蠕動(dòng)泵 保定雷弗流體科技有限公司;SPX-250B生化培養(yǎng)箱 常州國(guó)華電器有限公司;DL-5臺(tái)式離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;HH-S2數(shù)顯恒溫水浴鍋 金壇市醫(yī)療儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 蛋白轉(zhuǎn)化率的測(cè)定

上清液多肽含量:福林酚法[16]。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:取1 mL濃度為0～250 μg/mL的牛血清白蛋白于試管,加入5 mL堿性銅試劑(A液含2%Na2CO3,0.1 mol/L NaOH;B液含0.5% CuSO4·5H2O,1%酒石酸鉀鈉;A液與B液按50∶1的比例混合即為堿性銅試劑),混勻,于30 ℃水浴10 min;再在每支試管中加入0.5 mL福林酚試劑,立即振蕩混勻,在30 ℃下水浴30 min;以不加標(biāo)準(zhǔn)蛋白的溶液為空白對(duì)照,在680 nm下測(cè)定各試管溶液的吸光值。以蛋白濃度為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線y=2.5835x+0.016,R2=0.9993。以1 mL稀釋后的酶解上清液代替牛血清白蛋白,測(cè)定樣品的吸光值,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線后,即可求得上清液肽含量。

原料底物總蛋白:GB5009.5-2010,凱氏定氮法。

1.2.2 高活性肽占比 參考龔洋的方法[17],采用高效凝膠過濾色譜法測(cè)定多肽的分子量分布。

色譜柱:TSK gel G2000(300 mm×7.8 mm)流動(dòng)相的組成為:乙腈∶水∶三氟乙酸45∶5∶0.1,洗脫流速:0.5 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):220 nm,柱溫:30 ℃,進(jìn)樣量:10 μL。液相系統(tǒng)的程序控制和數(shù)據(jù)處理采用軟件Breeze(Waters,MA,USA)。以保留時(shí)間(t)為橫坐標(biāo),分子量的對(duì)數(shù)值(lg Mr)為縱坐標(biāo),并采用以下已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品作標(biāo)準(zhǔn)曲線:牛血清白蛋白(67000 Da)、細(xì)胞色素 C(12500 Da)、桿菌肽(1450 Da)、L-色氨酸(204 Da)。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程:Y=-0.283X+7.981(R2=0.998,X為保留時(shí)間,Y為分子量的對(duì)數(shù)值lg Mr)對(duì)各樣品的色譜峰進(jìn)行積分,并根據(jù)分子量大小分割成五個(gè)相對(duì)獨(dú)立的區(qū)域,即分子量大于5000、3000～5000、1000～3000、300～1000 Da和小于300 Da,每塊區(qū)域的相對(duì)峰面積大小即為各分子量大小范圍的相對(duì)含量。

1.2.3 樣品ACE抑制活性及IC50檢測(cè) 酶解上清液通過5000、3000、1000、300 Da的再生纖維素膜分離得到不同分子量區(qū)間的多肽液,測(cè)定其IC50值。

采用毛舒云[7]等酶標(biāo)法測(cè)定ACE抑制肽活性。ACE底物為FAPGG,按表1添加各反應(yīng)組分,用酶標(biāo)儀來測(cè)定目標(biāo)肽的ACE抑制活性。在340 nm波長(zhǎng)下,分別測(cè)定空白孔和樣品孔的初始吸光度(a1和b1),和37 ℃反應(yīng)30 min后的吸光度(a2和b2)。對(duì)照孔的吸光度減少值A(chǔ)=a1-a2,樣品孔的吸光度減少值B=b1-b2,抑制率(%)=(A-B)/A×100。

表1 ACE抑制活性的測(cè)定Table 1 Determination of ACE inhibiting activity

測(cè)定不同濃度下樣品的ACE抑制率,以濃度為橫坐標(biāo),ACE抑制率為縱坐標(biāo),繪制關(guān)系曲線,從中得出抑制率為50%時(shí)的樣品濃度,即為IC50值。

1.2.4 超聲模式的篩選 實(shí)驗(yàn)使用雙頻逆流聚能式超聲設(shè)備、發(fā)散三頻超聲設(shè)備和美國(guó)進(jìn)口的對(duì)振雙頻超聲設(shè)備,雙頻逆流聚能式超聲設(shè)備的工作組合為20/28、20/35、20/40、20/50(kHz/kHz),工作模式為同步工作和交替工作(共8種);發(fā)散三頻超聲工作組合為 20/28/40、20/35/50、20/40/60(kHz/kHz/kHz),工作模式為同步工作和交替工作(共6種);對(duì)振雙頻超聲工作組合為16/20(kHz/kHz)。

稱取玉米胚芽粕粉,配成底物濃度10%的料液,進(jìn)行超聲預(yù)處理,處理?xiàng)l件為:單位體積超聲功率100 W/L、超聲溫度20 ℃(超聲過程控制溫度)、超聲同步工作脈沖/間歇時(shí)間比5 s/2 s、交替工作時(shí)間為每種頻率各5 s、超聲處理時(shí)間30 min。經(jīng)超聲預(yù)處理的料液用堿性蛋白酶進(jìn)行酶解,酶解條件如下:加酶量2000 U/g蛋白、pH9.0、溫度55 ℃,在酶解60 min后,沸水浴中滅酶10 min,冷卻至室溫后于4000 r/min離心15 min,取上清液,測(cè)定蛋白轉(zhuǎn)化率(主要指標(biāo))和高活性肽占比,篩選出最優(yōu)的超聲模式。以未經(jīng)超聲預(yù)處理的料液為對(duì)照組。

1.2.5 超聲預(yù)處理參數(shù)的篩選 在最優(yōu)的超聲模式條件下,對(duì)超聲預(yù)處理?xiàng)l件進(jìn)行單因素逐步優(yōu)化實(shí)驗(yàn),考察超聲功率密度、底物濃度、超聲處理時(shí)間、超聲初始溫度對(duì)酶解的影響,確定最佳的超聲預(yù)處理工藝,酶解條件同1.2.4。具體步驟如下:底物濃度10%、超聲處理時(shí)間30 min,超聲初始溫度20 ℃,超聲功率密度取值為40、60、80、100、120 W/L;超聲功率密度為前組單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化值,超聲溫度20 ℃、超聲處理時(shí)間為30 min,底物濃度取值為4%、6%、8%、10%、12%、14%;超聲功率密度和底物濃度為前組實(shí)驗(yàn)優(yōu)化值,超聲處理時(shí)間取值為10、20、30、40、50 min;超聲功率密度、底物濃度和處理時(shí)間為前組實(shí)驗(yàn)優(yōu)化值,超聲溫度取值為20、30、40、50、60 ℃。

1.2.6 超聲處理后酶解參數(shù)的優(yōu)化 在最優(yōu)的超聲模式和預(yù)處理參數(shù)的條件下,進(jìn)行酶解參數(shù)的優(yōu)化,酶解溫度55 ℃、pH9.0、酶解時(shí)間1 h,加酶量取值為1000、1500、2000、2500、3000 U/g蛋白;酶解溫度55 ℃、pH9.0、加酶量為前組實(shí)驗(yàn)優(yōu)化值,酶解時(shí)間取值為1、1.5、2、2.5、3 h。

1.2.7 未超聲處理直接酶解的效果 未進(jìn)行超聲預(yù)處理,直接酶解玉米胚芽蛋白,酶解溫度55 ℃、pH9.0,加酶量和酶解時(shí)間取1.2.6的最優(yōu)值,測(cè)定蛋白轉(zhuǎn)化率和高活性肽占比。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 不同分子量區(qū)間的多肽ACE抑制活性

由表2可知,在300～1000 Da分子量區(qū)間的多肽ACE抑制活性最高,IC50值為0.78 mg/mL,1000～3000 Da的多肽次之,IC50值為0.85 mg/mL,兩者無顯著性差異。小于300 Da和3000～5000 Da的多肽活性較低,IC50分別為1.69和1.93 mg/mL,而分子量大于5000 Da的多肽活性最低。因此,通過膜分離去掉大分子低活性多肽后,富集的小分子多肽與未過膜的原液相比,活性顯著提高。本研究旨在通過超聲預(yù)處理,提高底物蛋白的轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)物多肽的ACE抑制活性,所以選取酶解液中活性高的300～3000 Da多肽占總肽的比值作為一個(gè)考察指標(biāo)。

2.2 最優(yōu)超聲模式的篩選

由圖1可知,不同的超聲模式預(yù)處理原料蛋白后酶解,與未超聲的對(duì)照組相比,均能明顯提高蛋白轉(zhuǎn)化率與高活性肽占比?？偟膩碚f,雙頻超聲組合的效果高于三頻組合和對(duì)振雙頻,而三頻組合的作用與對(duì)振雙頻差異不大。在雙頻超聲組合中,20/40 kHz組合效果最突出,同步和交替組合的蛋白轉(zhuǎn)化率分別達(dá)到69.80%和70.08%,與對(duì)照比較分別提高了17.78%和18.23%,高活性肽占比分別達(dá)到26.39%和29.67%。超聲波作用原料蛋白主要是空化效應(yīng),從而改變蛋白結(jié)構(gòu)[9,18],使其疏水基團(tuán)暴露,從而有利于蛋白酶解制備ACE抑制肽。不同頻率下的超聲波的空化效應(yīng)強(qiáng)弱不同,多頻超聲作用時(shí),不同波之間存在交互影響,在本實(shí)驗(yàn)中20/40 kHz組合對(duì)原料蛋白的預(yù)處理存在協(xié)同作用,由于雙頻超聲組合輻射提供了一個(gè)更寬的頻譜作用范圍,對(duì)聲化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)額的提高具有明顯的增強(qiáng)效應(yīng),導(dǎo)致雙頻超聲同時(shí)輻射的合效應(yīng)均明顯大于各頻率超聲單獨(dú)輻射效應(yīng)之和[19],使蛋白轉(zhuǎn)化率最高。而在20/40 kHz組合中,交替雙頻與同步雙頻作用后的蛋白轉(zhuǎn)化率差異不大,但高活性多肽占比顯著高于同步雙頻,這可能是20/40 kHz的超聲波交替作用,克服了同步超聲瞬間空化效應(yīng)差的問題,使酶解產(chǎn)生更多的高活性肽[11]。故選擇20/40 kHz交替雙頻進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖1 不同超聲處理模式對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響Fig.1 Effects of ultrasonic frequency on enzymatic hydrolysis of corn germ meal注:不同字母a、b、c、d、e,A、B、C、D、E 表示組間具有顯著性差異(p<0.05)；表2～表7同。

2.3 超聲預(yù)處理參數(shù)的篩選

2.3.1 超聲功率密度對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響 由圖2可以看出,隨著超聲功率密度增加,高活性肽占比呈現(xiàn)小幅度波動(dòng)的趨勢(shì),占比在26.34%～27.68%之間,在60 W/L處達(dá)到最大值27.68%,100 W/L處次之,為27.67%。功率密度對(duì)蛋白轉(zhuǎn)化率影響較大,轉(zhuǎn)化率呈現(xiàn)先增后小幅下降再增的趨勢(shì),在100 W/L處蛋白轉(zhuǎn)化率達(dá)到最大值72.85%,繼續(xù)增大功率,轉(zhuǎn)化率保持不變。這是因?yàn)楣β试酱?超聲的聲強(qiáng)越大,空化效應(yīng)產(chǎn)生的空化泡破裂時(shí)產(chǎn)生的能量越大,攻擊玉米胚芽蛋白顆粒時(shí),改變了蛋白的結(jié)構(gòu),使更多的疏水氨基酸基團(tuán)暴露出來,由于含有疏水氨基酸的肽通常具有較高的ACE抑制率[20],從而有利于酶解產(chǎn)生更多的活性肽;但是,功率過高時(shí),超聲產(chǎn)生的空化泡過多,形成聲波屏障,不利于超聲作用到全部物料[12]。功率密度120 W/L時(shí)蛋白轉(zhuǎn)化率沒有增加,可能是部分聲場(chǎng)能量與聲波屏障的效果相抵消導(dǎo)致的。所以,功率密度選擇100 W/L進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖2 超聲功率密度對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響Fig.2 Effects of ultrasonic power density on enzymatic hydrolysis of corn germ meal注:不同字母a、b、c,A、B、C等表示組間 具有顯著性差異(p<0.05)。

2.3.2 底物濃度對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響 由圖3可知,隨著底物濃度的增加,蛋白轉(zhuǎn)化率與高活性肽占比呈現(xiàn)出先增后降的趨勢(shì),在底物濃度8%時(shí),兩者均達(dá)到最大值,蛋白轉(zhuǎn)化率為74.17%,高活性肽占比為29.64%。底物濃度低時(shí),原料蛋白能夠過量地受到超聲的空化作用;在底物濃度為8%時(shí),蛋白顆粒能充分地受到空化作用,使酶解效果達(dá)到最好;底物濃度繼續(xù)增加,因料液黏度增加,超聲波的傳遞受阻,影響了空化作用[21]。因此,底物濃度選擇為8%進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖3 底物濃度對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響Fig.3 Effects of substrate concentration on enzymatic hydrolysis of corn germ meal

2.3.3 超聲處理時(shí)間對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響 從圖4可知,隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng),蛋白轉(zhuǎn)化率先增后降,在20 min時(shí)達(dá)到75.33%,在30 min時(shí)達(dá)到最大值,為75.97%。高活性肽占比呈現(xiàn)先增后降再增的趨勢(shì),在20 min時(shí)達(dá)到最大值,為29.64%。短時(shí)間的超聲處理能使玉米胚芽蛋白的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,蛋白顆粒變得疏松,疏水基團(tuán)暴露出來。超聲時(shí)間延長(zhǎng),疏水基團(tuán)暴露增多,有利于酶解產(chǎn)生ACE抑制肽。30 min時(shí)高活性肽占比急劇下降的原因可能是暴露出的疏水基團(tuán)中缺少堿性蛋白酶的酶切位點(diǎn),導(dǎo)致酶解后得到較多的大分子肽,使得高活性肽所占比例降低。40 min時(shí)高活性肽占比上升,可能是超聲繼續(xù)作用,蛋白結(jié)構(gòu)持續(xù)變得疏松,更多的酶切位點(diǎn)暴露出來,堿性蛋白酶酶解后產(chǎn)生的小分子活性肽占比增加。但超聲時(shí)間過長(zhǎng),暴露的疏水基團(tuán)會(huì)互相交聯(lián),疏水性氨基酸被隱藏,不利于產(chǎn)生ACE抑制肽[11,22],這可能是30 min后蛋白轉(zhuǎn)化率下降的原因。在實(shí)驗(yàn)中,超聲處理30 min時(shí)蛋白轉(zhuǎn)化率最高,但與超聲處理20 min無顯著性差異;而處理20 min的高活性肽占比29.64%是處理30 min占比26.64%的1.11倍。綜合考慮,選擇超聲處理時(shí)間為20 min。

圖4 超聲處理時(shí)間對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響Fig.4 Effects of ultrasonic time on enzymatic hydrolysis of corn germ meal

2.3.4 超聲溫度對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響 根據(jù)圖5得出,超聲處理溫度越高,蛋白轉(zhuǎn)化率和高活性肽占比先增加后趨于穩(wěn)定,其中,超聲溫度40 ℃時(shí)蛋白轉(zhuǎn)化率最高,為75.74%;超聲溫度50 ℃時(shí),高活性肽占比最大,為29.06%。溫度主要影響料液的濃度和超聲的空化作用。溫度升高,料液的黏度降低,有利于超聲波的傳遞。溫度過低時(shí),超聲波的機(jī)械能量被底物料液大量吸收,空化效果減弱;溫度升高,空化作用達(dá)到飽和,繼續(xù)升高溫度會(huì)造成能源浪費(fèi)。由于30 ℃時(shí)的蛋白轉(zhuǎn)化率73.89%與40 ℃時(shí)不存在顯著性差異,綜合考慮超聲效果和電量消耗,超聲溫度30 ℃較為理想。

圖5 超聲溫度對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響Fig.5 Effects of ultrasonic temperature on enzymatic hydrolysis of corn germ meal

2.4 超聲后酶解條件的確定

2.4.1 加酶量對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響 由圖6可知,隨著加酶量的增加,蛋白轉(zhuǎn)化率先大幅升高后趨于平緩,在加酶量為2000 U/g處有明顯的轉(zhuǎn)折點(diǎn),此時(shí)蛋白轉(zhuǎn)化率為76.44%;增大加酶量為2500和3000 U/g時(shí)的蛋白轉(zhuǎn)化率為77.68%和78.62%。高活性肽占比隨著加酶量的增加先增大后降低:加酶量越多,酶與玉米胚芽蛋白結(jié)合越多,蛋白轉(zhuǎn)化率越高;而加酶量持續(xù)增加,酶與底物反應(yīng)飽和,過量的酶轉(zhuǎn)而優(yōu)先酶解上清液的多肽,導(dǎo)致產(chǎn)物過度酶解,小于300 Da的多肽占比增大,高活性肽占比降低。蛋白轉(zhuǎn)化率在2500 U/g處達(dá)到最大值29.91%;2000 U/g次之,為28.51%。由于2000和2500 U/g的蛋白轉(zhuǎn)化率和高活性肽占比無顯著性差異,故選擇2000 U/g的加酶量進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖6 加酶量對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響Fig.6 Effects of enzyme dosage on enzymatic hydrolysis of corn germ meal

2.4.2 酶解時(shí)間對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響 根據(jù)圖7,酶解時(shí)間越長(zhǎng),蛋白轉(zhuǎn)化率越高,在3 h時(shí)達(dá)到最大值86.65%;2.5 h處次之,為85.00%。而高活性肽占比隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng),呈現(xiàn)先緩慢增加后急劇降低的趨勢(shì),這是因?yàn)樵诿附?.5 h前,原料蛋白還未充分酶解,酶解時(shí)間越長(zhǎng),蛋白的轉(zhuǎn)化率就越大。而2.5 h后,原料蛋白受到了較為充分的酶解,延長(zhǎng)酶解時(shí)間,蛋白轉(zhuǎn)化率的增加無顯著性差異;高活性肽占比急劇下降的原因可能是堿性蛋白酶酶解上清液中的產(chǎn)物多肽,產(chǎn)物過度酶解[11]。所以,酶解時(shí)間選擇2.5 h較為合適。

圖7 酶解時(shí)間對(duì)玉米胚芽蛋白酶解效果的影響Fig.7 Effects of hydrolysis time on enzymatic hydrolysis of corn germ meal

2.5 未超聲處理直接酶解的效果

未進(jìn)行超聲預(yù)處理,直接酶解玉米胚芽蛋白,加酶量2000 U/g蛋白,酶解時(shí)間2.5 h后,測(cè)定蛋白轉(zhuǎn)化率為73.01%±0.21%,高活性肽占比為26.00%。

3 結(jié)論

超聲波預(yù)處理能顯著提高玉米胚芽蛋白的轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)物多肽的ACE抑制活性,最佳的超聲波工作模式是20/40 kHz交替雙頻逆流聚能式超聲。

超聲預(yù)處理的最優(yōu)條件為:單位體積超聲功率100 W/L,底物濃度8%,超聲處理時(shí)間20 min,超聲溫度30 ℃;超聲后酶解參數(shù)為:加酶量2000 U/g蛋白,酶解時(shí)間2.5 h。在最優(yōu)條件下,蛋白轉(zhuǎn)化率為85.00%,相比于未超聲組的73.01%提高了16.42%,300～3000 Da高活性肽占比為29.63%,相比于未超聲組的26.00%提高了13.96%,表明逆流雙頻超聲波輔助酶解法能有效提高玉米胚芽蛋白的轉(zhuǎn)化率和產(chǎn)物多肽的ACE抑制活性,有利于酶解制備玉米胚芽ACE抑制肽。

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