整合素α6β1和CD44V4在卵巢上皮癌中表達(dá)及相關(guān)性分析

劉飛　葉帆　楊曉文

摘 要：目的 通過(guò)檢測(cè)上皮癌病理組織及正常卵巢組織中整合素α6β1和CD44V4表達(dá)情況，探討其表達(dá)特點(diǎn)與臨床病理特征的相關(guān)性。方法 收集2015年1月～2016年12月手術(shù)切除的20例正常卵巢組織、40例卵巢上皮良性腫瘤及65例卵巢上皮癌組織，利用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)整合素α6β1和CD44V4的表達(dá)水平，結(jié)合病理組織特征進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 卵巢上皮癌組織中整合素α6β1和CD44V4的表達(dá)水平顯著高于正常卵巢及上皮良性腫瘤組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且在不同病理分期及分化程度的卵巢上皮癌組織之間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；但在不同組織學(xué)分型病理組織中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；α6β1和與CD44V4在卵巢上皮癌組織中的表達(dá)存在明顯正相關(guān)（r=0.599，P<0.05）。結(jié)論 整合素α6β1和與CD44V4在卵巢上皮癌組織中高表達(dá)且有相關(guān)性，可作為卵巢上皮癌發(fā)展的分子標(biāo)志物。

關(guān)鍵詞：整合素α6β1；CD44V4；卵巢上皮癌

中圖分類號(hào)：R737.3 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.04.020

文章編號(hào)：1006-1959（2018）04-0062-03

Abstract：Objective To detect the expression of integrin α6β1 and CD44V4 in epithelial carcinoma and normal ovarian tissues，and to explore the correlation between the expression of integrin α6β1 and clinicopathological features.Methods 20 cases of normal ovarian tissue，40 cases of ovarian epithelial benign tumor and 65 cases of epithelial ovarian cancer surgically resected from January 2015 to December 2016 were collected.The expression of integrin α6β1 and CD44V4 were detected by immunohistochemistry.Tissue characteristics for correlation analysis.Results The expression of integrin α6β1 and CD44V4 in ovarian epithelial carcinoma was significantly higher than that in normal ovarian and benign epithelial tumors，the difference was statistically significant（P<0.05），there was a statistically significant difference in epithelial ovarian cancer between different pathological stages and differentiation degree（P <0.05），but there was no significant difference in pathological histology among different histological types（P>0.05）.There was a significant positive correlation between α6β1 and CD44V4 expression in epithelial ovarian cancer（r=0.599，P<0.05）.Conclusion The expression of integrin α6β1 and CD44V4 in epithelial ovarian cancer are highly correlated and may be used as molecular markers for the development of epithelial ovarian cancer.

Key words：Integrin α6β1；CD44V4；Epithelial ovarian carcinoma

卵巢腫瘤是發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌的惡性腫瘤，致死率居?jì)D科腫瘤之首，嚴(yán)重威脅女性健康[1]。卵巢惡性腫瘤以上皮癌最常見，明確卵巢上皮癌的發(fā)展機(jī)制及早期診斷物對(duì)該腫瘤的治療有重要意義[2]。該類腫瘤較強(qiáng)的侵襲及轉(zhuǎn)移能力是臨床治療困難的主要原因，細(xì)胞與基質(zhì)的黏附作用是惡性腫瘤侵襲的重要過(guò)程[3]。整合素是主要的細(xì)胞黏附分子，整合素α6β1與CD44V4多表達(dá)于淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞表面[4]，可能在卵巢上皮癌的發(fā)展中有重要作用。本文通過(guò)檢測(cè)整合素α6β1和CD44V4表達(dá)水平，結(jié)合臨床病理資料進(jìn)行分析，以探討整合素α6β1和CD44V4在卵巢上皮癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其相關(guān)性。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2015年1月～2016年12月萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院婦科行卵巢切除術(shù)切除的卵巢上皮癌組織標(biāo)本65例，卵巢上皮良性腫瘤組織40例，并選取20例正常卵巢組織做對(duì)照；所有標(biāo)本切除前均未接受放化療治療且經(jīng)均經(jīng)病理學(xué)專家盲法認(rèn)定。卵巢上皮癌組織根據(jù)臨床病例分型分類：根據(jù)病理分期（Ⅰ、Ⅱ期13例，Ⅲ、Ⅳ期34例）；組織學(xué)分型（子宮內(nèi)膜樣癌13例，粘液性囊腺癌20例，漿液性囊腺癌32例）；病理組織分化程度（低分化34例，中分化19例，高分化12例）。

1.2方法 ①主要試劑：兔抗整合素α6β1單克隆抗體、鼠抗CD44V4單克隆抗體，S-P試劑盒均為Sigma公司產(chǎn)品。②組織切片制作法：病理組織用10%甲醛室溫固定24 h后用梯度濃度乙醇脫水后晾干除去酒精，用二甲苯浸泡組織充分透明；完全透明的組織浸于混合蠟中，并放置于溫箱中透蠟；最后向包埋柜中加入融化好的石蠟充分包埋；LEICA石蠟切片機(jī)切片后烤干備用。③免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)：病理組織石蠟切片常規(guī)脫蠟后經(jīng)梯度濃度酒精逐步脫水；滴加適量過(guò)氧化氫溶液至切片以充分消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；高溫修復(fù)抗原后用山羊血清（1∶10正常山羊血清）封閉組織非特異性抗原；一二抗孵育后滴加HRP標(biāo)記鏈親和素工作液，37 ℃恒溫孵育30 min進(jìn)行DAB顯色；經(jīng)蘇木素復(fù)染后脫水透明中性樹膠封片觀察。

1.3陽(yáng)性結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 整合素α6β1表達(dá)水平根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量與染色強(qiáng)度評(píng)分綜合確定：蛋白染色根據(jù)染得強(qiáng)度設(shè)定0～3分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%計(jì)為0分；在10%～25%之間計(jì)為1分；25%～50%之間為2分；陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>50%為3分。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分相加分級(jí)：≤2分記為低表達(dá)（-）；3～4分記為中表達(dá)（+）；5～6分則記為高表達(dá)（++）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 利用SPSS19.0軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以（%）表示，采用？字2檢驗(yàn)，變量間差異分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05說(shuō)明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同病理組織中整合素α6β1與CD44V4表達(dá)水平比較 整合素α6β1在細(xì)胞中呈黃色或棕黃色顆粒，主要表達(dá)于卵巢上皮癌細(xì)胞胞漿中（72.31%），遠(yuǎn)高于正常卵巢與良性腫瘤組織中的表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CD44V4在卵巢上皮癌細(xì)胞胞漿中呈棕褐色顆粒，其表達(dá)水平顯著高于正常卵巢與卵巢良性腫瘤組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而正常卵巢與卵巢良性腫瘤組織間的兩者表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。

2.2整合素α6β1及CD44V4表達(dá)水平與卵巢上皮癌臨床病理關(guān)系 整合素α6β1與卵巢上皮癌組織學(xué)分型無(wú)關(guān)（P>0.05），而與組織分化程度及臨床分期有關(guān)，低分化組中整合素α6β1的表達(dá)明顯高于高分化組，且隨著臨床分期的升級(jí)，整合素α6β1的表達(dá)也明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CD44V4表達(dá)水平與卵巢上皮癌組織分化程度及病理分期同樣有關(guān)，隨著分化程度的提高其表達(dá)水平下降，同時(shí)表達(dá)水平隨著病理分期的增加而提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但在不同組織學(xué)分型的病理組織中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3整合素α6β1與CD44V4表達(dá)水平在卵巢上皮癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 經(jīng)Spearman分析顯示，整合素α6β1的表達(dá)水平與CD44V4呈正相關(guān)（r=0.599，P<0.05）。

3討論

全球癌癥每年發(fā)病率總體呈上升趨勢(shì)，其中卵巢惡性腫瘤是婦科常見致死性腫瘤，多為上皮性卵巢癌。我國(guó)上皮性卵巢癌的發(fā)病情況在近十幾年來(lái)呈上升趨勢(shì)，已然成為威脅女性健康的最大殺手[5]。而卵巢癌細(xì)胞較強(qiáng)的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移能力為臨床根治帶來(lái)極大困難，雖然針對(duì)癌細(xì)胞浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制已有較深入研究，但關(guān)鍵有效的分子機(jī)制尚不清楚。因此尋找上皮性卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子標(biāo)記物，對(duì)提高患者的治療與預(yù)后有重要的意義。

卵巢上皮癌細(xì)胞的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移涉及多方面的機(jī)制，細(xì)胞與基質(zhì)的黏附作用是惡性腫瘤侵襲的首要步驟[6]。整合素與CD44分子作為主要的細(xì)胞黏附分子，參與多種轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞內(nèi)外基質(zhì)的黏附作用，可通過(guò)多途徑影響細(xì)胞，即可以改變基質(zhì)成分調(diào)節(jié)細(xì)胞間的粘附作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移；又介導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞的分化增殖中的信息傳遞，可作為靶向抗癌的新分子靶點(diǎn)。

整合素α6β1是由介導(dǎo)細(xì)胞與ECM之間黏附的α6亞基和β1亞基和構(gòu)成的異二聚體，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、血管形成等功能[7]。研究發(fā)現(xiàn)整合素α6β1在卵巢上皮細(xì)胞中廣泛的表達(dá)，對(duì)卵巢組織的發(fā)育和功能起重要作用，其異常表達(dá)可能與卵巢腫瘤的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。而近期對(duì)卵巢癌病理組織的檢測(cè)研究發(fā)現(xiàn)，整合素α6β1在不同病理分型的癌組織中的表達(dá)水平有差異，提示整合素α6β1與卵巢上皮癌有可以值得研究探討的關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)在正常卵巢與卵巢良性腫瘤組織中α6β1蛋白表達(dá)水平較低，遠(yuǎn)低于卵巢上皮癌組織中72.31%的陽(yáng)性率（P<0.05）；且與卵巢上皮癌組織分化程度及病理分期存在明顯相關(guān)性，即低分化組織的表達(dá)高于高分化的表達(dá)，且隨著病理組織分期的提高而顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；但是整合素α6β1與病理組織學(xué)分型無(wú)明顯相關(guān)性，在子宮內(nèi)膜樣癌、粘液性與漿液性囊腺癌中表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。以上提示整合素α6β1可能參與了卵巢上皮癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，對(duì)其臨床發(fā)展階段的診斷有一定參考價(jià)值。

CD44V4分子作為CD44分子家族的一種亞型，可以通過(guò)跨膜糖蛋白的方式介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-ECM 的相互作用，在腫瘤細(xì)胞的黏附、腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用[8]。本文探討CD44V4 的表達(dá)情況與卵巢不同組織臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果顯示CD44V4在卵巢上皮癌細(xì)胞胞漿中呈棕褐色顆粒，其表達(dá)水平顯著高于正常卵巢與卵巢良性腫瘤組織（P<0.05）；而正常卵巢與卵巢良性腫瘤組織間的兩者表達(dá)水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。而卵巢上皮癌高-中分化組的表達(dá)低于低分化組的表達(dá)，Ⅰ～Ⅱ期組CD44V4的表達(dá)明顯低于Ⅲ～Ⅳ期組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；但在子宮內(nèi)膜樣癌、粘液性及漿液性囊腺癌組織中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。以上充分證實(shí)了CD44V4在卵巢上皮癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

整合素α6β1是一種黏附分子，其過(guò)量表達(dá)可使癌細(xì)胞與組織細(xì)胞的黏附力發(fā)生改變，為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供條件；CD44V4作為一種原癌基因參與腫瘤發(fā)生發(fā)展，誘導(dǎo)了其他原癌基因的高效表達(dá)，整合素α6β1與CD44V4共同參與腫瘤的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移過(guò)程。本文通過(guò)檢測(cè)卵巢腫瘤組織和正常組織中整合素α6β1、CD44V4的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)整合素α6β1、CD44V4與卵巢上皮癌組織臨床病理特點(diǎn)相關(guān)。同時(shí)，隨著整合素α6β1表達(dá)的增強(qiáng)，CD44V4的表達(dá)也有增強(qiáng)的趨勢(shì)，其表達(dá)呈正相關(guān)，可以推斷這兩種分子在卵巢上皮癌浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移這一復(fù)雜的過(guò)程中有正協(xié)同作用。但是要更進(jìn)一步的了解兩者的具體作用機(jī)制，仍需進(jìn)一步研究探討。

參考文獻(xiàn)：

[1]張爽爽，夏慶民，鄭榮壽，等.中國(guó)2010年卵巢癌發(fā)病與死亡分析[J].中國(guó)腫瘤，2016（03）：169-173.

[2]王晨，陳小巖，陳新，等.卵巢漿黏液性癌的臨床病理分析[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2015（11）：1253-1257.

[3]Zhang W，Huang N，Wang Q，et al.Effect of CXCL1 gene expression on the biological function of epithelial ovarian carcinoma cells in vitro[J].Chinese Journal of Oncology，2013，35（2）：109-113.

[4]Sagawa K，Uwa N，Daimon T，et al.Expression of CD44 variant isoforms，CD44v3 and CD44v6，are associated with prognosis in nasopharyngeal carcinoma[J].J Laryngol Otol，2016，130（9）：843-849.

[5]紀(jì)曉寧，豐有吉.上皮性卵巢癌病因?qū)W研究進(jìn)展[J].中國(guó)癌癥雜志，2014（11）：861-864.

[6]He M，Wang D，Zou D，et al.Re-purposing of curcumin as an anti-metastatic agent for the treatment of epithelial ovarian cancer：in vitro model using cancer stem cell enriched ovarian cancer spheroids[J].Oncotarget，2016，7（52）：86374-86387.

[7]Buommino E，Di Domenico M，Paoletti I，et al.AlphaVBeta5 integrins mediates Pseudomonas fluorescens interaction with A549 cells[J].Front Biosci（Landmark Ed），2014，19：408-415.

[8]雷燕，吳緒峰.CD44基因在卵巢癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系[J].醫(yī)學(xué)綜述，2013（01）：155-158.

收稿日期：2017-8-23；修回日期：2017-9-21

編輯/楊倩