飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、氮代謝及毛皮品質(zhì)的影響

乜 豪 楊福合 張鐵濤 崔 虎 司華哲 王中成 謝靜靜 高秀華*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，生物飼料開發(fā)國(guó)家工程研究中心，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100081；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所，長(zhǎng)春 130112)

益生菌是指定植于動(dòng)物腸道、生殖系統(tǒng)內(nèi)，能產(chǎn)生確切健康功效，從而改善機(jī)體微生態(tài)平衡、發(fā)揮有益作用的活性微生物的總稱[1]。益生菌作為動(dòng)物飼料添加劑具有促生長(zhǎng)、提高飼料消化率、增強(qiáng)動(dòng)物免疫能力、預(yù)防及治療疾病等功能[2-4]。因此，具有無污染、無殘留和無毒副作用等優(yōu)點(diǎn)的益生菌作為飼料添加劑使用倍受關(guān)注。Hu等[5]研究得出，飼糧中添加枯草芽孢桿菌KN-42可以改善仔豬的生長(zhǎng)性能和胃腸健康。劉江坤等[6]研究得出，斷奶仔豬飼糧中添加枯草芽孢桿菌(PB6株)制劑可顯著提高仔豬的平均日增重(ADG)和蛋白質(zhì)消化率，降低料重比(F/G)，改善仔豬腸道的微生態(tài)平衡，緩解斷奶應(yīng)激對(duì)仔豬的不利影響。侯璐等[7]研究發(fā)現(xiàn)，斷奶仔豬飼糧中添加糞腸球菌等益生菌可以提高其平均日采食量(ADFI)和平均日增重，降低腹瀉率，提高機(jī)體免疫力和蛋白質(zhì)利用率。貢筱等[8]研究發(fā)現(xiàn)，在育成期藍(lán)狐飼糧中添加益生菌(枯草芽孢桿菌和糞腸球菌)可提高藍(lán)狐的生長(zhǎng)性能和蛋白質(zhì)、脂肪消化率，降低氮排出，提高氮沉積。荊祎等[9]研究發(fā)現(xiàn)，水貂飼糧中添加貂源乳桿菌和屎腸球菌可顯著提高干物質(zhì)和蛋白質(zhì)消化率，降低糞氮排出量，提高機(jī)體免疫功能。國(guó)內(nèi)外將枯草芽孢桿菌和糞腸球菌應(yīng)用于豬等動(dòng)物上的報(bào)道[5-7]較多，但還未見應(yīng)用于冬毛期水貂的報(bào)道。為此，本試驗(yàn)擬通過研究飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、氮代謝及毛皮品質(zhì)的影響，篩選出其在冬毛期水貂飼糧中的適宜添加量，為枯草芽孢桿菌和糞腸球菌在水貂生產(chǎn)中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用益生菌均由北京思科福生物科技有限公司提供，枯草芽孢桿菌來源是土壤，糞腸球菌來源是豬腸道。經(jīng)測(cè)定，枯草芽孢桿菌制劑有效活菌數(shù)≥1×1010CFU/g，糞腸球菌制劑有效活菌數(shù)≥1×1010CFU/g。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及飼糧

在農(nóng)業(yè)部長(zhǎng)白山野生生物資源重點(diǎn)野外科學(xué)觀測(cè)試驗(yàn)站的毛皮動(dòng)物生產(chǎn)基地隨機(jī)選擇健康、體重為(1 767.94±174.20) g的135日齡雄性水貂70只。國(guó)內(nèi)目前沒有統(tǒng)一的水貂飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，參照NRC(1982)[10]水貂與狐營(yíng)養(yǎng)需求并結(jié)合國(guó)內(nèi)相關(guān)研究報(bào)道[11]，配制冬毛期水貂基礎(chǔ)飼糧，此水貂飼糧為干粉料型，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，將70只水貂隨機(jī)分成7組，每組10個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1只。Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加1×108、1×109和1×1010CFU/kg枯草芽孢桿菌，即每千克飼糧中添加0.01、0.10和1.00 g枯草芽孢桿菌制劑；Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加1×108、1×109和1×1010CFU/kg糞腸球菌，即每千克飼糧中添加0.01、0.10和1.00 g糞腸球菌制劑。育成期后，水貂已適應(yīng)干粉料，故沒有預(yù)試期，分組完成后即開始試驗(yàn)，試驗(yàn)期70 d。試驗(yàn)水貂均單籠飼養(yǎng)，每天08:00和15:00各飼喂1次，2種益生菌均為每日添加，先溶解在水中，然后加入一定量的飼糧，混合均勻后進(jìn)行飼喂，自由飲水，試驗(yàn)于2016年9—11月在農(nóng)業(yè)部長(zhǎng)白山野生生物資源重點(diǎn)野外科學(xué)觀測(cè)試驗(yàn)站進(jìn)行。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供The premix provided the following per kg of the diet: VA 10 000 IU，VD32 000 IU，VE 100 IU，VB16 mg，VB210 mg，VB66 mg，VB120.1 mg，VK31 mg，VC 400 mg，煙酸 niacin acid 30 mg，泛酸 pantothenic acid 40 mg，生物素 biotin 0.2 mg，葉酸 folic acid 1 mg，膽堿 choline 400 mg，F(xiàn)e 82 mg，Cu 20 mg，Mn 120 mg，Zn 50 mg，I 0.5 mg，Se 0.2 mg，Co 0.3 mg。

2)代謝能為計(jì)算值(代謝能=18.8×粗蛋白質(zhì)+39.8×粗脂肪+17.6×碳水化合物)，其他為測(cè)定值。ME was a calculated value (ME=18.8×CP+39.8×EE+17.6×carbohydrate), while the others were measured values.

1.4 消化代謝試驗(yàn)

試驗(yàn)第32天，每組挑選6只體重相近的水貂進(jìn)行消化代謝試驗(yàn)，消化代謝試驗(yàn)時(shí)間為2016年10月16日至2016年10月18日，共計(jì)3 d。采用全收糞法，消化代謝試驗(yàn)期間飼養(yǎng)管理與日常飼養(yǎng)管理相同。每天收集尿液，在每100 mL尿液中加入2 mL的10%硫酸溶液，加4滴甲苯用于防腐，保存于-20 ℃?zhèn)溆谩Ｃ刻焓占募S便稱重后按鮮重的5%加入10% 硫酸溶液，并加少量甲苯防腐，保存于-20 ℃?zhèn)溆?。? d的尿液和糞便分別混合均勻后取樣，其中糞便于65 ℃烘干至恒重，磨碎過40目篩，制成風(fēng)干樣本，以備實(shí)驗(yàn)室分析。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

試驗(yàn)第1天早晨對(duì)每只水貂進(jìn)行空腹稱重，為初始體重，試驗(yàn)結(jié)束后空腹稱重，作為終末體重，計(jì)算出每組水貂的平均日增重；記錄每只水貂每天的給料量和剩料量，計(jì)算每組水貂的平均日采食量以及料重比。試驗(yàn)結(jié)束后屠宰，屠宰前對(duì)毛皮品質(zhì)進(jìn)行鑒定，由4名中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所毛皮動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究專家組成評(píng)分小組進(jìn)行打分，品質(zhì)評(píng)分為1～12分[12-13]，根據(jù)毛絨豐滿度、顏色、光澤度和平齊度分為4個(gè)等級(jí)，具體標(biāo)準(zhǔn)如下：1～3分，針毛彎曲、脫毛自咬傷殘、破損等；4～6分，毛色不光亮、平齊度低、顏色不均勻等；7～9分，毛絨較豐足，毛色黑，毛被較光亮，背、腹部毛絨較平齊、柔和，無傷殘等；10～12分，毛絨豐足，毛色黑，毛被光亮，背、腹部毛絨較平齊、柔和，無傷殘，針毛無彎曲，無夏毛未脫凈等。水貂體長(zhǎng)用軟尺測(cè)量，為鼻尖到尾根的長(zhǎng)度；水貂針毛長(zhǎng)和絨毛長(zhǎng)使用直尺測(cè)量，選水貂背中部針毛和絨毛，為毛尖到毛根部的長(zhǎng)度。

飼糧及排泄物中的干物質(zhì)含量采用烘箱烘干法進(jìn)行測(cè)定，參考GB/T 6435—2006[14]；粗脂肪含量采用索氏抽提法進(jìn)行測(cè)定，參考GB/T 6433—2006[15]；粗蛋白質(zhì)含量采用FOSS凱氏定氮儀以凱氏定氮法進(jìn)行測(cè)定，參考GB/T 6432—1994[16]；鈣含量以高錳酸鉀滴定法測(cè)定，參考GB/T 6436—2002[17]；總磷含量以釩鉬酸銨比色法測(cè)定，參考GB/T 6437—2002[18]；鹽酸水解法測(cè)定氨基酸含量，參考GB/T 5009.124—2003[19]。

1.6 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用單因素方差分析(one-way ANOVA)進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，其中P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，各試驗(yàn)組終末體重和平均日增重均高于對(duì)照組，且Ⅵ組終末體重與對(duì)照組的差異達(dá)顯著水平(P<0.05)，Ⅳ、Ⅵ和Ⅶ組的平均日增重與對(duì)照組的差異達(dá)顯著水平(P<0.05)。Ⅱ組料重比與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)，其他試驗(yàn)組均顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。各組平均日采食量差異不顯著(P>0.05)。

2.2 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

由表4可知，各組干物質(zhì)采食量、干物質(zhì)排出量和干物質(zhì)消化率均差異不顯著(P>0.05)。Ⅵ組蛋白質(zhì)消化率顯著高于對(duì)照組以及Ⅱ和Ⅴ組(P<0.05)。各組脂肪消化率均在90%以上，且各試驗(yàn)組脂肪消化率均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

2.3 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂氮代謝的影響

由表5可知，各試驗(yàn)組食入氮、糞氮和尿氮與對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。Ⅳ和Ⅵ組氮沉積顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。各試驗(yàn)組凈蛋白質(zhì)利用率和蛋白質(zhì)生物價(jià)值均高于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。

2.4 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂毛皮品質(zhì)的影響

由表6可知，各試驗(yàn)組毛皮品質(zhì)略優(yōu)于、體長(zhǎng)略高于對(duì)照組，但差異均不顯著(P>0.05)。各組針毛長(zhǎng)差異不顯著(P>0.05)。Ⅳ組絨毛長(zhǎng)顯著高于Ⅴ組(P<0.05)，但針絨比顯著低于Ⅴ組(P<0.05)。

表3 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂生長(zhǎng)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), and with different capital letter superscripts mean significant difference (P<0.01), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表4 飼糧中添加枯草芽孢桿菌和糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

表5 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂氮代謝的影響

續(xù)表5項(xiàng)目Items組別GroupsⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦ尿氮排出量UNoutput/(g/d)4.09±0.803.71±0.323.67±0.403.54±0.323.86±0.183.69±0.703.78±0.62氮沉積RN/(g/d)1.07±0.15b1.13±0.14ab1.21±0.15ab1.39±0.19a1.19±0.15ab1.41±0.18a1.33±0.21ab凈蛋白質(zhì)利用率NPU/%16.07±6.7117.44±2.5618.18±5.4419.37±1.0417.46±1.4919.38±1.8218.15±4.80蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值BVofprotein/%22.08±3.3523.40±2.9924.40±3.6626.00±1.0423.84±3.9726.14±2.0625.49±3.13

表6 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂毛皮品質(zhì)的影響

3 討 論

3.1 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂生長(zhǎng)性能的影響

益生菌作為飼料添加劑使用，動(dòng)物采食后益生菌后可部分定植于動(dòng)物腸道內(nèi)，在腸道內(nèi)發(fā)揮不同的作用[1]?？莶菅挎邨U菌等需氧型益生菌可迅速消耗掉腸道中的游離氧，利于消化道優(yōu)勢(shì)厭氧菌生長(zhǎng)，抑制致病性需氧菌繁殖，從而恢復(fù)動(dòng)物腸道健康，進(jìn)而提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能；糞腸球菌等乳桿菌進(jìn)入腸道產(chǎn)生大量乳酸，降低腸道pH，抑制致病菌生長(zhǎng)，提高酸性蛋白酶活性，有助于動(dòng)物消化，提高動(dòng)物生長(zhǎng)性能[20]。Cui等[21]報(bào)道，飼糧中添加枯草芽孢桿菌制劑可顯著提高豬的平均日增重，提高生長(zhǎng)性能。周映華等[22]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可顯著提高斷奶仔豬的平均日增重，降低料重比，提高生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)條件下，當(dāng)飼糧中添加1×1010CFU/kg枯草芽孢桿菌時(shí)，水貂的平均日增重最高，料重比最低，說明冬毛期水貂飼糧中枯草芽孢桿菌添加量為1×1010CFU/kg時(shí)效果最佳，這與在水貂育成期上所得結(jié)果[23]一致。水貂育成期飼糧中枯草芽孢桿菌添加量達(dá)1×1011CFU/kg時(shí)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)生長(zhǎng)性能的影響并不顯著[23]，其原因可能是大量枯草芽孢桿菌較長(zhǎng)時(shí)間的添加造成水貂腸道失衡，對(duì)其生長(zhǎng)性能的增長(zhǎng)效果甚微。Ross等[24]研究得出，將乳酸桿菌和屎腸球菌(豬糞中提取)添加到豬的飼糧中可提高其平均日增重。史自濤[25]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加糞腸球菌可提高斷奶仔豬試驗(yàn)第15～31天的平均日增重和平均日采食量，改善生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)結(jié)果顯示：飼糧中糞腸球菌添加量為1×109CFU/kg時(shí)，水貂的平均日增重和終末體重均顯著高于對(duì)照組，料重比顯著低于對(duì)照組，說明冬毛期水貂飼糧中糞腸球菌添加量為1×109CFU/kg時(shí)效果最佳。

3.2 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響

脂肪是影響冬毛期飼糧中能量水平的主要營(yíng)養(yǎng)成分，冬毛期水貂對(duì)能量的需求較高，而研究表明能量水平可影響動(dòng)物的采食量[26]，本試驗(yàn)中，各組水貂飼喂同一基礎(chǔ)飼糧，能量水平一致，其干物質(zhì)采食量無顯著差異。Giang等[27]報(bào)道，飼糧中添加益生菌(芽孢桿菌和乳酸菌等)可顯著提高育肥豬粗蛋白質(zhì)消化率和干物質(zhì)消化率。魏清甜[28]研究發(fā)現(xiàn)，保育仔豬飼糧中添加糞腸球菌(>2×109CFU/kg)可顯著提高其粗蛋白質(zhì)和粗脂肪的消化率，與抗生素組無顯著差異。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組間干物質(zhì)消化率差異不顯著，但隨著益生菌添加量的提高呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)；糞腸球菌添加量為109CFU/kg時(shí)，蛋白質(zhì)消化率顯著高于對(duì)照組、1×108CFU/kg枯草芽孢桿菌組和1×108CFU/kg糞腸球菌組；添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌的各試驗(yàn)組脂肪消化率均高于對(duì)照組。這與前人的研究結(jié)果一致，即添加益生菌可提高動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)和脂肪的消化率，這是因?yàn)橐嫔ㄖ灿谀c道后，會(huì)分泌蛋白酶、脂肪酶和乳酸等，降低腸道pH，增強(qiáng)腸道蠕動(dòng)，從而促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收。本試驗(yàn)條件下，1×108CFU/kg枯草芽孢桿菌組和1×108CFU/kg糞腸球菌組蛋白質(zhì)消化率顯著低于1×109CFU/kg糞腸球菌組，可能是益生菌添加量較少，在飼料混合過程中未充分?jǐn)嚢杈鶆蛩?。?duì)比育成期水貂相關(guān)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，冬毛期水貂對(duì)蛋白質(zhì)的消化吸收減少。研究表明，毛皮動(dòng)物對(duì)脂肪消化率較其他動(dòng)物高，最高時(shí)超過90%，且隨飼糧脂肪水平的升高，脂肪消化率呈升高趨勢(shì)[29]。荊祎等[9]報(bào)道，飼糧中添加植物乳桿菌和屎腸球菌對(duì)水貂的脂肪消化率有促進(jìn)作用，且其脂肪消化率高于90%。本研究得到了相同的結(jié)果，各組脂肪消化率均高于90%，且添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌的各試驗(yàn)組的脂肪消化率顯著高于對(duì)照組。

3.3 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂氮代謝的影響

動(dòng)物飼糧中含氮物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體后，部分未被消化吸收，隨糞便排出；其他部分則被消化吸收，用于機(jī)體合成蛋白質(zhì)，代謝產(chǎn)物則隨尿液排出[30]。動(dòng)物排泄物中的含氮物質(zhì)會(huì)對(duì)土地和水源造成極大污染，是引起環(huán)境污染的源頭之一[31]。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌后，糞氮和尿氮排出量呈現(xiàn)出降低的趨勢(shì)，而凈蛋白質(zhì)利用率和蛋白質(zhì)生物學(xué)價(jià)值呈現(xiàn)升高的趨勢(shì)；此外，1×1010CFU/kg枯草芽孢桿菌組和1×109CFU/kg糞腸球菌組氮沉積顯著高于對(duì)照組。上述結(jié)果說明添加枯草芽孢桿菌和糞腸球菌提高了蛋白質(zhì)的利用率，降低了氮排放，提高了氮沉積。

3.4 飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌對(duì)冬毛期水貂毛皮品質(zhì)的影響

水貂是一種毛皮動(dòng)物，其毛皮質(zhì)量的高低決定了其經(jīng)濟(jì)價(jià)值，而水貂毛皮質(zhì)量的高低與毛皮品質(zhì)、皮張大小、皮張平齊度和皮張柔軟度等有關(guān)[13]。樸厚坤等[32]指出，水貂體表面積與體重存在直線回歸關(guān)系，冬毛期水貂體重越大所獲得水貂皮張?jiān)酱?。本試?yàn)結(jié)果得出，飼糧中添加枯草芽孢桿菌或糞腸球菌后，水貂體重有所提升，且糞腸球菌添加量為1×109CFU/kg時(shí)體重較對(duì)照組顯著升高；此外，各試驗(yàn)組水貂體長(zhǎng)與對(duì)照組相比呈升高趨勢(shì)。由此可以得出，各試驗(yàn)組水貂皮張大小要優(yōu)于對(duì)照組。Gugolek等[33]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加糞腸球菌和嗜酸性乳桿菌可顯著提高北極狐的毛皮品質(zhì)(包括體長(zhǎng)、顏色、光澤度和皮張大小等)。本試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加1×1010CFU/kg枯草芽孢桿菌或1×109CFU/kg糞腸球菌時(shí)，針毛長(zhǎng)與對(duì)照組無顯著差異，但略高于其他試驗(yàn)組；1×1010CFU/kg枯草芽孢桿菌組絨毛長(zhǎng)最高且顯著高于1×108CFU/kg糞腸球菌組，同時(shí)其針絨比最低且顯著低于1×108CFU/kg糞腸球菌組。針絨比越低，毛皮平齊度越高，1×1010CFU/kg枯草芽孢桿菌組絨毛長(zhǎng)最高，針毛長(zhǎng)也較長(zhǎng)，同時(shí)其針絨比最低，表明該組水貂的毛皮平齊度是最高的。

4 結(jié) 論

飼糧中添加1×1010CFU/kg枯草芽孢桿菌或1×109CFU/kg糞腸球菌可提高水貂的生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率、氮沉積和毛皮品質(zhì)。

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